HPLC法測定胃痛寧片中甘草酸的含量

胡　蓮（瀘州醫學院附屬醫院藥劑科　瀘州　646000）

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HPLC法測定胃痛寧片中甘草酸的含量

胡蓮（瀘州醫學院附屬醫院藥劑科瀘州646000）

摘要：目的：建立高效液相色譜法測定胃痛寧片中甘草酸的含量。方法：采用Discovery C18柱（5μm，4.6mm×250mm），流動相：乙醇－0.2mol·L-1醋酸銨溶液－冰醋酸（42∶56∶2），檢測波長：254nm，流速：0.5mL·min-1，柱溫：45℃。結果：甘草酸在0.198～0.892μg范圍內呈良好線性關系，r＝0.9999，平均回收率為99.04%，RSD為1.5%。結論：該方法操作安全，簡便，結果準確、可靠，可用于該制劑的質量控制。

關鍵詞：甘草酸高效液相色譜法胃痛寧片

胃痛寧片是由甘草干浸膏、蒲公英提取物、氫氧化鋁等6味藥組成的中西藥復方制劑，具有清熱燥濕、理氣和胃、制酸止痛之效，用于濕熱互結所致胃、十二指腸潰瘍、胃炎，癥見胃脘痙痛、胃酸過多、脘悶噯氣、泛酸嘈雜、食欲不振、大便秘結、小便短赤。衛生部藥品標準[1]中未收載含量測定方法，為有效控制藥品質量，本文以甘草的有效成分甘草酸為指標，采用高效液相色譜法，流動相以乙醇作洗脫劑，建立了含量測定方法。

1　儀器與試藥

高效液相色譜儀：HP-1100VWD系統，HP化學工作站；試劑：乙醇為優級純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。甘草酸銨對照品（110731-201116，以甘草酸計含量為91.2%）中國藥品生物制品檢定所，胃痛寧片（市售）。

2　實驗方法與結果

2.1色譜條件：色譜柱：Discovery C18（5μm，4.6mm×250mm），流動相：乙醇－0.2mol·L-1醋酸銨溶液－冰醋酸（42∶56∶2），檢測波長：254nm，流速：0.5mL·min-1，柱溫：45℃。理論塔板數以甘草酸計算不低于3000。

2.2空白試驗：按處方量制備缺甘草干浸膏的陰性對照樣品，照樣品測定方法項下操作，測定比較了樣品、甘草酸對照品、陰性對照樣品，結果在陰性對照樣品色譜圖中甘草酸色譜峰相應的保留時間處無干擾，樣品中甘草酸與其他成分能較好分離，分離度大于1.5，見圖1。

2.3線性關系：精密稱取甘草酸銨對照品11.32mg，置25mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取3mL，加流動相稀釋至25mL，搖勻，作為對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液4.0、6.0、10.0、14.0、18.0μL進樣，以峰面積積分值（Y）為縱坐標，甘草酸的進樣量（X）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為：Y=14.55090X－26.84902，r＝0.9999。結果表明甘草酸在0.198～0.892μg范圍內呈良好線性關系。

2.4精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL，重復進樣6次，測定對照品溶液峰面積，計算RSD為0.36%（n＝6）。

2.5重復性和穩定性試驗：取同一批樣品（20111013）6份，按樣品測定項下所述方法測定，結果平均含量為2.85mg·片-1，RSD 為1.1%（n＝6）。取其中一份供試品溶液在室溫下放置0、2、4、8、12、24h進行測定，結果表明樣品在24h內穩定，RSD為0.85% （n＝6）。

2.6回收率試驗：精密稱取甘草酸銨對照品49.65mg，置25mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密稱取已知含量的同一批樣品（20111013）0.5g，置具塞錐形瓶中，共6份，分別精密加入上述對照品貯備液2、3、4mL（各2份），按樣品測定項下所述方法測定，計算回收率，結果見表1。

Table 1 Recoveries of G lycyrrhizic Acid added to sam ple

2.7樣品測定：取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取1.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇200mL，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，以上述色譜條件分析測定，分別測定3批樣品，以外標兩點法計算甘草酸含量，結果見表2。

Table 2 Results of sam ple determ ination（n=3）

3　討論

3.1甘草酸對照品分別用甲醇和流動相作溶劑，在本色譜條件下，用流動相作溶劑其峰型、理論塔板數明顯優于甲醇作溶劑。甘草酸在藥材中常以鉀、鈣鹽形式存在[2]，幾乎不溶于無水乙醇，但易溶于熱的稀乙醇，故樣品采用稀乙醇作提取溶劑，經試驗，稀乙醇回流提取1h可將樣品中的甘草酸提取完全。

3.2參考文獻[3，4]，在選用甲醇－醋酸銨溶液－冰醋酸、乙腈－冰醋酸作流動相進行試驗時，甘草酸在較低流速下才能與其他成分較好分離，柱壓較小。故考慮在低流速下以乙醇代替甲醇、乙腈作洗脫劑，經反復試驗，以乙醇－0.2mol·L-1醋酸銨溶液－冰醋酸（42∶56∶2）作流動相時，只需適當提高柱溫，也能獲得較好分離，色譜峰形對稱，柱壓適中（約106bar），測得的含量與甲醇系統下測定的含量一致。甘草酸與相鄰雜質峰的分離度在乙醇系統中約高于甲醇系統。

3.3本法用于胃痛寧片中甘草酸的含量測定，結果準確，操作安全，簡便、快速，能有效控制該產品質量。

參考文獻

[1]衛生部藥品標準，中藥成方制劑[S].第十七冊，1998：198.

[2]楊云，馮衛生.中藥化學成分提取分離手冊[M].北京：中國中醫藥出版社，1998：95.

[3]中華人民共和國藥典（一部）[S].北京:化學工業出版社，2005：59.

[4]付春梅，李章萬，劉三康，等.乙醇-水反相高效液相色譜法在中藥及中成藥分析中的應用[J].藥物分析，2000，20（1）：37-41.

Determ ination of G lycyrrhizic Acid in Weitongning Tablets by HPLC

Hu Lian（Sichuan，Luzhou 646000，China）

Abstract：Objective:An assay method was developed for determination of glycyrrhizic acid in Weitongling Tablets by HPLC.Methods: The Chromatographic conditions were as follows:column Discovery C18（5μm，4.6mm×250mm）;the mobile phase ethanol－0.2mol·L-1ammonium acetate solution－acetic acid glacial（42∶56∶2）and detection at 254nm.The flow rate was 0.5mL·min-1.Column temperature was at 45℃.Results:The liner range of glycyrrhizic acid was 0.198～0.892μg，r＝0.999 9.The average recovery was 99.04%，the RSD was 1.5%.Conclusion:The method was security，simple.The results were accurate and reliable.The method can be used for quality control of theWeitongling Tablets.

Key words:glycyrrhizic acid HPLC Weitongling Tablets

中圖分類號：R927.2

文獻標識碼：A

文章編號：1672-8351（2016）01-0001-02