番石榴葉提取物促進金銀花抗炎作用的試驗

趙立香，邵國麗（吉林農業科技學院制藥工程學院，吉林吉林132101）

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番石榴葉提取物促進金銀花抗炎作用的試驗

趙立香，邵國麗
（吉林農業科技學院制藥工程學院，吉林吉林132101）

摘要：為了探討番石榴葉提取物對金銀花提取液抗炎作用的影響，采用水醇提取和水提取工藝分別制備番石榴葉和金銀花提取液，用二甲苯致小鼠耳腫脹法，建立小鼠耳炎模型，并觀察對大鼠棉球肉芽腫增生的影響。結果表明，番石榴葉提取物能促進金銀花提取液的抗炎作用，隨著番石榴葉劑量增加，抗炎作用隨之增強。

關鍵詞：金銀花；番石榴葉；抗炎作用

由于許多合成藥物具有較強的毒副反應，人們越來越重視從天然藥物中開發抗炎藥物。一些中藥活性成分如苷類、生物堿類、黃酮類、萜類、揮發油等都具有很好的抗炎作用[1]。

金銀花為中獸醫常用藥物，應用歷史悠久，自古被譽為清熱解毒的良藥，其所含的很多化學成分均具有較強的抗菌作用。另外還可增強免疫力、抗早孕、護肝、抗腫瘤、消炎、解熱、止血（凝血）、抑制腸道吸收膽固醇等，其臨床用途非常廣泛。

番石榴葉[2]，為桃金娘科植物番石榴的葉，葉中含有豐富的黃酮類化合物、酚類化合物、多糖、無機元素、揮發油、皂苷及齊墩果酸與熊果酸等多種功能成分[3]，可收斂止瀉；番石榴葉提取物的抗炎[4]、止痛作用源于提取物中的揮發性成分。近年來國內外對番石榴葉的研究仍漸深入，對其研究越來越重視。

對中藥聯合抗炎研究較少，番石榴葉功能很多，具有抗炎作用，應用前景廣闊。金銀花的抗炎作用已被證明，但番石榴葉與之聯合抗炎仍沒有結論，因此，期待在本次研究中能有突破的進展。

1　材料與方法

1.1實驗動物和藥品健康昆明系小鼠50只（BALB/c小鼠，SPF級，6～8周齡，體重18±2 g，雄性），由吉林醫藥學院提供。

健康大鼠50只（SD，雄性，30日齡），由吉林大學提供。

金銀花、番石榴葉，購自吉林市中藥店，生理鹽水、蒸餾水、二甲苯、水合氯醛（吉林農業科技學院實驗室提供），磺胺粉，購自吉林市獸藥店。

1.2器材塑料試劑盒，購自吉林市超市；6 mm打孔器（國產）；電子天平CP114（奧豪斯儀器，上海有限公司制造）；數顯式電熱恒溫水浴鍋（上海躍進醫療器械廠）；旋轉蒸發儀（BUCHI，鄭州長城科工貿有限公司）；干燥箱（DHG-9035A電熱鼓風干燥箱，上海源長實驗儀器設備廠）；灌胃針等（吉林農業科技學院實驗室提供）。

1.3方法

1.3.1金銀花提取液的制備色澤潔白的金銀花100 g，并清洗干凈備用。切碎片清洗后的金銀花加水充分浸潤。浸提、過濾將處理好的金銀花放入鍋中加水（1∶5）熬煮，熬制小碎片用手指稍用力可捏爛，40 min，將熬好的料液過濾，濾液濃縮至100 mL，既得濃度1 g/1 mL金銀花浸提液[5]。

1.3.2番石榴葉提取物的制備將番石榴干燥粉碎后的樣品10 g置砂鍋中，加蒸餾水200 mL，浸泡2 h后，用文火煮30 min，過濾，離心取上清液，殘渣再加100 mL水煮20 min，合并濾液，加熱濃縮至10 mL（1 g/mL），使濃度為1 g/mL，將浸提液高壓（121℃，20 min）滅菌后，再將浸提液經微孔濾膜（0.22 μm）除菌后，在4℃下進行保存備用。1.3.3小鼠抗炎模型的建立及觀察將體質健康的昆明系小鼠50只（BALB/c小鼠，SPF級，6～8周齡，體重18±2 g，雄性）隨機分為空白對照組、金銀花分別與高、中、低番石榴葉劑量組和金銀花劑量對照組，每組10只[6]。空白對照組用生理鹽水灌胃，金銀花劑量對照組按86 g/kg制備好的金銀花水煎液灌胃。其余3組分別用86 g/kg（86 g/kg）金銀花水煎液和1.8 g/kg，0.6 g/kg，0.3 g/kg（1 g/1 mL）制備好的高、中、低番石榴葉提取物混勻后灌胃。各組每天給藥1次，連續給藥4 d。最后1次給藥1 h后，將二甲苯0.02 mL均勻涂在小鼠右耳前、后兩面，致炎。致炎后1 h將小鼠脫頸椎處死[7-8]，用6 mm直徑打孔器在小鼠左右耳相同部位打下耳片，用電子天平稱重。記錄左右耳片質量，計算腫脹度。

公式：腫脹度＝右耳重量-左耳重量

抑制率%＝（空白對照組平均值-給藥組平均值）/空白對照組平均值）×100%

1.3.4大鼠棉球肉芽腫增生的影響取30日齡雄性SD大鼠50只，分組同1.2.3，取脫脂棉制成體積大小一致的棉球（10±1）mg，高壓滅菌后，置37℃干燥備用。大鼠用7%水合氯醛淺麻醉鼠，將其仰臥，無菌剪毛后于下腹部正中皮膚切開長約1 cm的切口，左右雙側腹股溝皮下植入10 mg無菌干燥棉球各一粒。縫合切口，瘡口處灑上磺胺粉，以防感染。在大鼠醒后灌胃給藥，空白對照組用生理鹽水灌胃，金銀花劑量對照組按86 g/ kg制備好的金銀花水煎液灌胃。其余3組分別用62 g/kg（86 g/kg）金銀花水煎液和1.8 g/kg，0.6 g/ kg，0.3 g/kg制備好的高、中、低番石榴葉提取物混勻后灌胃。以后每天灌胃1次，連續7 d，第8天頸椎脫臼處死大鼠，將棉球連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，稱濕重。然后置60℃烘干12 h，稱得干重。減去原棉球凈重，即為肉芽腫凈重。按mg/100 g體重表示，計算抑制率（%）。進行組間比較[9]。

肉芽腫凈濕重＝（棉球肉芽腫總濕重-原棉球凈重）/大鼠體重×100；肉芽腫凈干重＝（棉球肉芽腫總干重-原棉球凈重）/大鼠體重×100；濕重抑制率（%）＝（溶劑對照組肉芽腫凈濕重-給藥組肉芽腫凈濕重）/溶劑對照組肉芽腫凈濕重×100%；干重抑制率（%）＝（溶劑對照組肉芽腫凈干重-給藥組肉芽腫凈干重）/溶劑對照組肉芽腫凈干重× 100%。

2　結果

2.1金銀花與不同劑量的番石榴葉對小鼠耳腫脹度的影響通過表1可見，各組小鼠的耳腫脹情況分別為9.85±2.31 mg、5.43±2.62 mg、32±2.31 mg、5.30±2.41 mg、5.28±2.29 mg；抑制率分別為44.9%、44.6%、46.2%、46.4%。

表1　金銀花與不同劑量的番石榴葉對小鼠耳腫脹度的影響

2.2金銀花與不同劑量的番石榴葉對大鼠棉球肉芽腫增生的影響通過表2可見，各組大鼠的濕重抑制率分別為6.56%、11.4%.14.8%、21.3%和干重抑制率分別為13.6%、18.1%、27.2%、31.8%，試驗組與對照組比較差異極顯著（P＜0.01），試驗組間差異也顯著（P＜0.05）。

3　討論與小結

通過小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫增生試驗可見，金銀花提取液、金銀花提取液和番石榴葉提取物混合各組均有不同程度的抗炎作用，空白對照組、金銀花劑量組、金銀花與低劑量番石榴葉組、金銀花與中劑量番石榴葉組、金銀花與高劑量番石榴葉組，各組小鼠的耳腫脹抑制率分別為44.9%、44.6%、46.2%、46.4%。各組大鼠的濕重抑制率分別為6.56%、11.4%.14.8%、21.3%和干重抑制率分別為13.6%、18.1%、27.2%、31.8%，小鼠耳腫脹試驗組與對照組比較差異極顯著（P＜0.01），試驗組間差異不顯著（P＞0.05）；大鼠棉球肉芽腫增生試驗，試驗組與對照組差異極顯著（P＜0.01），組間差異也顯著（P＜0.05）。試驗表明，番石榴葉提取物對金銀花提取液的抗炎作用效果有一定的促進作用。也可能存在著藥物對不同組織的抗炎效果存在差異性，需要下一步進行深入的研究。

表2　金銀花與不同劑量的番石榴葉對大鼠棉球肉芽腫增生的影響

參考文獻：

[1]劉輝，張藝，蒲友明.番石榴葉的資源概況及化學成分的研究進展[J].湖南中醫藥大學學報，2007（8）：370-372.

[2]鄧家剛，郭力城.抗炎中藥活性成分的進展[J].現代醫藥衛生，2007，23（2）：201-203.

[3]彭雪萍，馬慶一，劉艷芳，等.蘋果廢渣中天然抗氧化物的提取、分離及活性研究[J].食品工業科技，2006，27（11）：111.

[4]丁利君，吳振輝，蔡創海，等.金銀花中黃酮類物質最佳提取工藝的研究[J].食品科學，2002，23（2）：62.

[5]蔡玲婓，徐迎.番石榴葉提取物對常見細菌的體外抗菌作用[J].2005，24（12）：1095-1097.

[6]徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M].北京：人民衛生出版社，2003：911.

[7] Anna Gramza，Santosh Khokhar，Shihikura Yoko，et al . Antioxidant activity of tea extracts in lip ids and correlationwith polyphenol content[J].European Journal ofLip id Science and Technology，2006，108（4）：1：351.

[8] Myung Woo Byun，Cheorun Jo，Tae Woog Jeon，et al . Effects of gamma irradiation on color characteristics and biological activities of extracts of Lonicera japonica（Japanese honeysuckle）with methanol and acetone[J].Lebensmittel-Wissenschaft und-Technologie，2004，37（1）：29.

[9]林躍虹，李惠民，張曉民，等.白芍配伍桂枝抗炎作用的實驗研究[J].實用臨床醫藥雜志，2008，12（7）：22-24.

Guava leaf extract promotes thestudy of liquid anti- inflammatory effects of extracting honeysuckle

ZHAO Li-xiang，SHAO Guo-li
（College of Pharmaceutical engineering，Jilin College of Agricultural Science and Technology，Jilin 132101，China）

Abstract：In order to investigate the effect of guava leaf extract on the anti-inflammatory activity of extract of Floss Lonicerae，we adopted a water alcohol extraction and water extraction process to prepare guava leaf and honeysuckle flower extract .And then we used the extracts to study the effect on xylene induced ear edema in mouse model by observing the influence on rat granuloma hyperplasia induced by cotton ball.The results showed that guava leaf extract promoted the anti-inflammatory effect of honeysuckle extract，and with the increase of the dose of guava leaf，the anti-inflammatory effect increased，and the inhibition rate reached.

Key words：Honeysuckle；Guava leaf；Anti inflammatory effect

作者簡介：趙立香（1976-），女，講師，博士，從事動物藥理學教學，E-mail：zhaolixiang123@tom.com

收稿日期：2014-09-04

中圖分類號：R 282

文獻標志碼：A

文章編號：0529- 6005（2016）01- 0072- 03