豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體水平檢測(cè)與分析

李衛(wèi)忠

(新疆維吾爾自治區(qū)吉木薩爾縣吉木薩爾鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,新疆吉木薩爾 831700)

豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體水平檢測(cè)與分析

李衛(wèi)忠

(新疆維吾爾自治區(qū)吉木薩爾縣吉木薩爾鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,新疆吉木薩爾 831700)

為了解新疆吉木薩爾縣慶欣養(yǎng)殖專業(yè)合作社和吉木薩爾縣鑫盛源生豬養(yǎng)殖合作社豬繁殖與呼吸障礙綜合征(PRRS)免疫抗體水平及其生長(zhǎng)的規(guī)律,采集了該場(chǎng)共60份血清,采用間接ELISA方法檢測(cè)PRRS免疫抗體水平并進(jìn)行分析。結(jié)果表明,2個(gè)豬場(chǎng)的PRRS免疫抗體陽(yáng)性率分別為73.33%、83.33%,其中抗體水平均達(dá)到了國(guó)家規(guī)定的70%免疫陽(yáng)性率,但整體水平需通過(guò)進(jìn)一步加強(qiáng)免疫,以提高整體豬藍(lán)耳病抗體水平。

豬;繁殖;免疫抗體;抗體

1 前言

1.1 概述

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS），俗稱豬藍(lán)耳病。是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）引起的一種高度傳染性疾病，臨床上以母豬發(fā)熱、厭食、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障礙以及仔豬呼吸道癥狀和高死亡率為特征，是目前危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一。

1.2 豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒的發(fā)病機(jī)理及癥狀特征

主要呈現(xiàn)特征性間質(zhì)性肺炎和淋巴結(jié)的輕度或中度腫大。流產(chǎn)或死產(chǎn)的胎兒及胎盤很少發(fā)現(xiàn)顯微病變。對(duì)繁殖母豬進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)母豬感染PRRSV后可引起胎兒臍帶出血、擴(kuò)張，呈現(xiàn)壞死性臍動(dòng)脈炎的變化，使得臍血管的正常血液循環(huán)受損，結(jié)果導(dǎo)致胎兒缺氧而死亡。

病毒能夠通過(guò)精液與胎盤進(jìn)行傳播，感染母豬與帶毒母豬主要表現(xiàn)為發(fā)情障礙。一些孕豬出現(xiàn)早產(chǎn)狀況，還有一些孕豬在后期出現(xiàn)流產(chǎn)狀況，產(chǎn)弱仔、木乃伊胎以及死胎，一部分在產(chǎn)后出現(xiàn)無(wú)乳現(xiàn)象。

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料

2.1.1 待測(cè)樣品采集

2015年1月至2015年3月期間，采集了慶欣養(yǎng)殖場(chǎng)和鑫盛源養(yǎng)殖場(chǎng)豬血清樣品60份，根據(jù)豬群的日齡不同，進(jìn)行前腔靜脈采血，將盛有血清的EP管放置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

試劑由蘭州獸醫(yī)研究所提供，其中包括PRRS陽(yáng)性血清4.0ml，陰性血清4.0ml，10倍洗液235mL，樣品稀釋液120ml，酶標(biāo)抗體70ml，TMB底物液60ml，終止液60ml。

2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

單道和多道微量移液器、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、隔熱式恒溫培養(yǎng)箱、小型高速冷凍離心機(jī)、微量攪拌器、超凈工作臺(tái)、量杯、量筒。

2.1.4 試劑的準(zhǔn)備

（1）用樣品稀釋液40倍稀釋被測(cè)樣品。

（2）洗滌液的準(zhǔn)備：濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（18～25℃），并搖動(dòng)使沉淀鹽溶解。使用前濃縮洗滌液應(yīng)用蒸餾水或去離子水10倍稀釋。

2.2 實(shí)驗(yàn)步驟

2.2.1 操作流程

使用前所有試劑應(yīng)恢復(fù)至室溫（18～25℃）。試劑應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩混合。每個(gè)樣品使用一個(gè)獨(dú)立的吸頭。

（2）在包被孔內(nèi)加入100μl沒(méi)有稀釋的陰性對(duì)照，每次檢測(cè)加兩孔。

（3）在包被孔內(nèi)加入100μl沒(méi)有稀釋的陽(yáng)性對(duì)照，每次檢測(cè)加兩孔。

（4）在相應(yīng)的孔中加入100μl已稀釋好的樣本。

（5）18～25℃孵育30±2min。

（6）吸取各孔的液體棄入廢液筒。

（7）用大約300μl洗滌液洗滌板孔，共洗滌3～5次。每次洗滌后應(yīng)吸去孔內(nèi)的液體。注意：應(yīng)避免包被孔干燥。在最后一次洗滌液吸去后，將每塊板中殘留的洗滌液扣拍到吸水材料上。

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（8）每孔加入100μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體。

（9）18～25℃孵育30±2min。

（10）重復(fù)步驟6和7。

（11）每孔加入100μlTMB底物液。

（12）18～25℃孵育15±1min。

（13）每孔加入100μl終止液，終止反應(yīng)。

（14）測(cè)量并且記錄樣本和對(duì)照的吸光值A(chǔ)（650）。

（15）計(jì)算結(jié)果。

2.2.2 檢測(cè)原理

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)試劑盒（IDEXX PRRS X3 Ab）是用于檢測(cè)豬血清和血漿中PRRSV IgG抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。將重組的PRRSV抗原包被在微量反應(yīng)板上將待檢樣品在反應(yīng)孔中孵育時(shí)，針對(duì)PRRSV的特異性抗體與包被的抗原形成抗原抗體復(fù)合物。洗去包被孔中沒(méi)有結(jié)合的成分后，加入辣根過(guò)氧化物酶（HRPO）標(biāo)記的抗豬抗體，它與孔中的豬抗體結(jié)合。

2.2.3 結(jié)果判定

實(shí)驗(yàn)有效性判定：

若試驗(yàn)有效則陽(yáng)性對(duì)照的平均值減去陰性對(duì)照的平均值必須大于或等于0.150；此外，陰性對(duì)照的平均值（NCx）必須小于或等于0.150。

判定標(biāo)準(zhǔn)

PRRS抗體的有無(wú)（陽(yáng)性/陰性）通過(guò)計(jì)算每個(gè)樣品的S/P值判定。

（1）如果S/P值低于0.4，樣品應(yīng)判定為PRRS抗體陰性。

（2）如果S/P值大于或等于0.4，樣品應(yīng)判定為PRRS抗體陽(yáng)性。

3 結(jié)果

3.1 豬血清PRRS抗體檢測(cè)結(jié)果

應(yīng)用PRRS抗體ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)吉木薩爾縣慶欣養(yǎng)殖專業(yè)合作社和吉木薩爾縣鑫盛源生豬養(yǎng)殖合作社豬血清各60份，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 兩個(gè)豬場(chǎng)PRRS抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

3.2 試驗(yàn)結(jié)果

由表1結(jié)果得到，吉木薩爾縣慶欣養(yǎng)殖專業(yè)合作社陽(yáng)性率為73.33%，吉木薩爾縣鑫盛源生豬養(yǎng)殖合作社陽(yáng)性率為83.33%，都達(dá)到了國(guó)家要求的免疫抗體合格率70%，但吉木薩爾縣慶欣養(yǎng)殖專業(yè)合作社免疫抗體陽(yáng)性率普遍較低，由于此病一旦爆發(fā)，將造成難以估計(jì)的損失，故兩個(gè)豬場(chǎng)均可在現(xiàn)水平上，從疫苗到防疫人員各個(gè)環(huán)節(jié)加強(qiáng)管理，以待豬藍(lán)耳抗體陽(yáng)性率不斷提高。

4 討論

高致病性豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒變異株引起的一種高致死性傳染病，是養(yǎng)豬業(yè)必須正視的一個(gè)重大問(wèn)題，已被農(nóng)業(yè)部定為強(qiáng)制免疫范疇。免疫是防控重大動(dòng)物疫病的重要措施，是避免和減少動(dòng)物疫情發(fā)生的關(guān)鍵。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，雖然兩個(gè)豬場(chǎng)豬藍(lán)耳病的陽(yáng)性率都超過(guò)了國(guó)家要求的免疫抗體合格率70%，但其陽(yáng)性率不同，而且豬藍(lán)耳抗體合格率普遍較低。

[1] 劉安石，鐘蘭蘭，楊亞，等.草分枝桿菌對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體水平的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2013，49（5）：42-44.

[2] 曾顯成，陳曉實(shí)，羅先，等.豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）抗體水平檢測(cè)與分析[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，26（4）：552-556.