微載體培養技術在豬用病毒性疫苗研制中的應用進展

莊金秋，梅建國，馬力，李峰，沈志強

（山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東濱州256600）

微載體培養技術在豬用病毒性疫苗研制中的應用進展

莊金秋，梅建國，馬力，李峰，沈志強

（山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東濱州256600）

微載體培養技術是當下疫苗生產的關鍵技術。文章綜述了微載體培養技術在豬用病毒性疫苗中的應用進展，以期為獸醫科技工作者和廣大養殖業主更好地了解該技術及通過該技術制備豬用疫苗，也為合理應用疫苗及有效地預防和控制疾病提供參考。

微載體；生物反應器；疫苗；應用進展

微載體（Microcarrier）是指在細胞培養中使用的直徑為60～250 μm的一類無毒性、非剛性、密度均一、透明可懸浮的微球顆粒[1]。其能使貼壁依賴性的細胞在懸浮培養狀態下貼附在表面呈單層生長，這極大地擴增了細胞貼附面積，可以在較短時間內得到大量的細胞，更利于大規模培養和收集細胞。1967年荷蘭學者Van率先開發了微載體系統，創建了生物反應器微載體培養動物細胞技術，使動物細胞培養進入了高密度培養階段[2]。2008年，我國將動物細胞大規模培養技術生產病毒性疫苗列為“十一五”國家科技支撐計劃重點項目，以推動實現疫苗生產關鍵技術的革新和升級[3]。農業部自2012年2月1日起，已停止受理轉瓶培養生產方式的獸用細胞苗生產線項目獸藥GMP驗收申請[4]。由于應用生物反應器進行微載體培養技術具有高比表面積、細胞產量高，便于監測、控制和取樣，生產規模易于放大，不易染菌等優點，同時還可減少勞動力，提高生產效率，實現大規模自動化生產，因此，該技術無論在人用還是獸用疫苗領域均得到了飛速發展。

1 微載體培養技術

貼壁培養是指細胞貼附在某種基質上進行增殖的培養方法，適用于一切貼壁細胞。在實際生產中具有貼壁生長特性的細胞種類較多，如CHO細胞、ST細胞和Vero細胞等[5]。貼壁細胞培養方法包括方瓶、轉瓶、多層平板培養和微載體培養等。方瓶、轉瓶和多層平板培養在產品研發的中、早期使用比較普遍。但是由于其不能有效監控細胞的生長，操作比較繁瑣，貼附面積具有限制性，傳質和傳氧差，每一瓶都是一個獨立的細胞培養單元，其細胞質量、病毒產量和滴度均不同，導致疫苗批次間差異大、操作勞動強度高，隱性污染也會引起高內毒素等，在大規模實際生產使用中受到很大的限制。而微載體培養技術的出現徹底克服了傳統工藝表面積不足的限制，能在有限的空間內提供巨大的表面積，實現了培養操作的自動化控制，降低了污染的機會，減少了人力的投入，并且細胞在良好的生理狀態下生長，可以獲得高密度貼壁細胞，具有現代化大規模培養貼壁細胞的顯著優勢。微載體培養技術自誕生起經過近50年的研究改進，目前已日趨完善和成熟，并廣泛應用于細胞工程領域的生產和科研，生產具有重要商業價值和實用意義的細胞產品及生物制品，如白蛋白、病毒疫苗和基因工程產品等。

微載體培養技術中所采用的微載體通常是直徑為60～250 μm的固體小珠[6]。微載體材料按其來源可分為兩大類：人工合成聚合物和天然聚合物及其衍生物[7]。早期微載體多采用人工合成聚合物，如聚甲基丙烯酸-2-羥乙酯（PHEMA）、聚苯乙烯（PS）、聚丙烯酰胺、聚氨酯泡沫、葡聚糖、低聚合度聚乙烯醇等。這種微載體重復性和力學性能可以達到較高水平，但缺乏細胞識別位點，影響細胞在其表面的黏附、生長。近年來，越來越多的研究者嘗試用天然聚合物及其衍生物來制備微載體。天然聚合物來源豐富，在功能適應性、組織相容性、理化性能、生物降解性、造價等方面優于人工合成材料，兼備材料學和生物學的特性。在用于制備微載體的天然聚合物中，研究較多的主要有明膠、膠原、纖維素、甲殼質及其衍生物以及海藻酸鹽[8]。微載體根據物理學特性主要分為固體微載體和液體微載體兩類，以前者為常見，又可分為實心微載體和大孔/多孔微載體。目前適用于微載體系統的生物反應器有生產型、中試型和實驗型。國內外相繼研制了數種適合進行微載體大規模細胞培養的生物反應器系統，如攪拌式生物反應器系統、旋轉式生物反應器系統及灌注式生物反應器系統等。

2 微載體培養技術在豬用疫苗研制中的應用

2.1 豬瘟

豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一種嚴重危害養豬業的毀滅性傳染病。豬瘟的防制歷來是全世界豬瘟存在國非常重視的課題，為此各國都投入了大量的人力、物力，并取得了很大的成績。疫苗接種是控制豬瘟的重要手段。王延輝等（2010）[9]利用有限稀釋法從現有ST細胞系中克隆出一株對CSFV疫苗株具有高敏感性的克隆細胞株STK，并且初步研究了該克隆株對病毒增殖的穩定性。將該克隆株用微載體培養后進行攻毒試驗，結果顯示該克隆株對CSFV疫苗株的增殖具有明顯的優勢，病毒滴度可達107.0TCID50/mL。為CSFV傳代細胞疫苗的開發提供了基本保障。漆世華等（2013）[10]采用生物反應器微載體技術大規模培養豬瘟疫苗，微載體的使用密度為2～25 g/L，采用批式、流加或灌注培養的方式生產的病毒液效價高，與傳統的轉瓶工藝相比，收獲的病毒液滴度增加了5～10倍，疫苗質量穩定，不存在安全性問題。

2.2 豬偽狂犬病

豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的豬的急性傳染病。該病在豬群中呈暴發性流行。引起妊娠母豬流產、死胎，公豬不育，新生仔豬的大量死亡，肥育豬呼吸困難、生長停滯等，是危害全球養豬業的重大傳染病之一。張智明等（2012）[11]建立了應用生物反應器微載體培養ST細胞生產PRV的方法，細胞活力≥90%、活細胞密度≥1×107cells/mL，病毒液TCID50≥108.0。其生產過程銜接緊密、順暢，規模放大容易，生產周期短，占用場地小，環境污染少且易于處理，病毒液收獲方便，質量易于實現均衡穩定，可顯著降低生產成本、提高疫苗產量和質量。

2.3 豬細小病毒病

豬細小病毒（Porcine parvovirus,PPV）是引起母豬繁殖障礙的主要病原之一，PPV感染主要引起胚胎和胎兒死亡、重吸收、流產、木乃伊胎等，但母豬不表現明顯的癥狀。近年來，PPV強毒株的出現使得此病在世界范圍內的發病率急劇增加，且范圍在不斷擴大。目前，豬細小病毒病的預防方式主要以接種滅活疫苗為主。高效的滅活疫苗和佐劑能誘導豬體產生大量的病毒中和抗體。這些抗體能有效預防野毒株的感染。目前，大多疫苗生產企業仍采用轉瓶生產模式進行病毒生產，存在批次間差異大、占地面積多、勞動強度大等缺點。李智力等（2015）[12]通過對PPV感染時間（Time of infection,TOI）、感染復數（Multiplicity of infection,MOI）和收毒時間進行優化，成功建立了基于PK-15細胞反應器微載體懸浮培養的工藝，在5 L反應器上最大病毒滴度達到107.2TCID50/mL。PPV在PK-15細胞增殖的過程中，因PPV對溫度敏感，當病毒滴度達到最大值后不能維持，而是持續下降，因此確定合適的收毒時間對PPV生產至關重要。通過研究PK-15細胞接種PPV后胞外代謝特性，首次發現乳酸對葡萄糖得率與病毒滴度的正相關性，當PPV滴度處于最大值時，乳酸對葡萄糖得率也達到最大值，并從能量和代謝的角度予以闡述，這將為PPV以及其他病毒收毒時間的確定提供重要依據。

2.4 豬流行性乙型腦炎

豬流行性乙型腦炎又名日本乙型腦炎，是由日本乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一種急性人獸共患傳染病。豬主要特征為高熱、流產、死胎和公豬睪丸炎。劉漢平等（2011）[13]、岳雷等（2013）[14]先后建立了利用微載體系統和生物反應器制備豬乙型腦炎滅活疫苗的方法，使傳統病毒滴度提高10倍以上。將收獲的病毒液滅活后，加入佐劑定量分裝即可獲得高質量的疫苗成品。制得的疫苗安全、有效，生產工藝穩定，質量可控。

2.5 豬傳染性胃腸炎

豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible Gastroenteritis Virus,TGEV）引起的一種以嚴重腹瀉、嘔吐和脫水為臨床癥狀的高度接觸傳染性腸道疾病，尤其對2周齡以內的仔豬具有很高的致死率，死亡率可達100%。該病呈世界性分布，是現今引起仔豬發病和死亡的主要原因之一，給各國養豬業均造成了嚴重的經濟損失。目前對于TGEV仍缺乏有效的臨床治療藥物，采用疫苗免疫接種是主要的預防措施。鄒勇等（2005）[15]系統地研究了微載體工藝生產TGEV的條件。ST最佳細胞生長條件為低糖DMEM生長液、4.5×104cells/mL細胞接種密度和5 mg/mL微載體濃度，TGEV最佳生產條件為含0.2%LH的低糖DMEM、5.5 lgTCID50/0.2 mL接種劑量和細胞生長第3天為接種時間。按此最佳條件在5 L反應器中生產的TGEV效價為11.0 lgTCID50/0.2 mL，比方瓶工藝高兩個滴度。動物免疫試驗結果表明，微載體工藝生產的TGEV稀釋10倍后免疫效果與方瓶工藝一致。周燕等（2005）[16]通過孔板培養系統以及微載體和轉瓶培養系統，研究了MOI、TOI和病毒維持液對細胞生長和TGEV增殖的影響。結果表明，MOI影響細胞生長速率和單位細胞病毒產量，TOI影響細胞對病毒的敏感程度以及胞內病毒的增殖速率；豐富的維生素、氨基酸等物質有利于病毒效價的提高；采用微載體和生物反應器系統生產TGEV，病毒效價可達11.3 lgTCID50/0.2 mL，比方瓶培養系統提高約100倍。邱文英等[17]（2013）為了大規模生產TGEV抗原，采用生物反應器及微載體進行ST細胞的培養，待微載體上的ST細胞長滿至單層后接種TGEV。共使用生物反應器培養3批TGEV抗原，每批培養過程中分別調節初始細胞密度至2.14×106個/mL、1.83×106個/mL和2.02×106個/mL，微載體濃度為3 g/L、6 g/L和9 g/L。結果表明應用生物反應器及微載體培養得到抗原的病毒含量均達到108.0TCID50/mL，明顯高于轉瓶培養的病毒含量。何錫忠等（2014）[18]通過生物反應器制備TGEV，研究了微載體濃度、MOI、TOI和病毒維持液對病毒效價的影響，結果表明，分別以1∶500稀釋種毒（8.0 lgTCID50/mL）后接種、接種72 h的ST細胞、5 mg/mL微載體濃度和維持液低糖DMEM＋0.2% LH的參數培養方式效果最為理想。

2.6 豬流行性腹瀉

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diahorrea virus,PEDV）引起的以腹瀉、嘔吐和脫水為主要特征的一種腸道傳染病。該病常導致10日齡以內仔豬100%的死亡率，為世界各國養豬業目前重要的腹瀉疾病之一，給養豬業造成了巨大的經濟損失。疫苗接種是目前預防該病最好的措施。王建超等（2003和2004）[19-20]通過研究攪拌速度、pH、血清濃度等環境條件對細胞貼壁的影響以及細胞接種密度、微載體濃度與細胞生長的關系，對應用微載體技術和生物反應器系統生產PEDV的可行性進行了探討。結果表明，攪拌轉速、pH、血清濃度均對Vero細胞在CT-3微載體上的貼壁率和均勻分布有影響；當接種密度為15.0×104/mL時，即每1 mg微載體接種5.0×104細胞時，可以獲得較高的細胞密度；隨著微載體濃度的提高，最高細胞密度也增加；在CelliGen反應器中，采用優化的培養條件，細胞密度可達到174.0×104/mL，是方瓶培養的3.5倍，每個細胞的PEDV含量與方瓶培養相當，制備的疫苗免疫原性好。為進一步大規模生產PEDV疫苗提供基礎試驗數據。姜艷平等（2015）[21]為了探索PEDV在微載體培養Vero細胞上的增殖效果，采用2 L生物反應器進行微載體培養Vero細胞和PEDV繁殖，并摸索細胞生長和病毒繁殖的最佳條件，檢測病毒滴度，與方瓶培養的病毒滴度進行比較。結果顯示，當微載體為5 g，種子細胞數約3.05×107個，采用灌注式培養，Vero細胞經72 h長滿單層，細胞數約為3.02×109個，此時用滴度為104.45TCID50/mL的PEDV 1 mL感染Vero細胞，培養96 h，微載體上80%細胞脫落時收毒，培養的PEDV具有較高的病毒滴度。相同病毒在微載體系統與方瓶上進行同步傳代，經檢測病毒滴度均有提高，但在微載體系統上培養的PEDV最高滴度可達到106.05TCID50/mL，明顯高于方瓶培養。這為研究PEDV能更好適應Vero細胞，提高PEDV產量提供技術支持。

2.7 豬藍耳病

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）又稱豬藍耳病，是一種嚴重危害養豬業的傳染病，給養豬業造成了巨大經濟損失。目前控制豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）的主要方法是使用疫苗進行免疫防控，而提高病毒增殖滴度是疫苗生產的一個非常重要的環節。Marc-145細胞是實驗室中用于PRRSV增殖的細胞宿主，同時也是目前豬藍耳病疫苗的生產用細胞株。生物反應器微載體懸浮培養Marc-145細胞及PRRSV增殖技術整個生物過程控制精確，易于重復，保證了疫苗產品批次間質量的一致性，并具備了規模放大的可能性。穆光慧等（2010）[22]通過研究攪拌程序、細胞接種密度、微載體濃度與細胞生長的關系，探索Marc-145細胞在微載體上的生長條件。結果表明，細胞接種密度為4.28×105cells/mL時，病毒滴度可達到107.5TCID50/mL，表明利用微載體增殖PRRSV是可行的。梅建國等（2012）[23]應用激流式生物反應器培養Marc-145細胞生產高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HP-PRRSV），并通過工藝優化，實現了病毒抗原的高效生產。馮磊等（2012）[24]采用分批式培養方法研究了Marc-145細胞微載體懸浮培養及PRRSV增殖工藝。結果表明，在3 g/L的微載體用量下，采用3×105cells/mL的初始接種密度及培養至第3天進行換液操作工藝可以獲得最佳的Marc-145細胞生長效能。采用MOI為0.05的接毒比例及接毒后48 h收獲毒液可獲得最高的PRRSV增殖效價。在5 L反應器中重復驗證上述工藝，獲得較為穩定的試驗結果，最大細胞密度均可高于2×106cells/mL，PRRSV的增殖效價均高于108.0TCID50/mL。為PRRSV疫苗的生物反應器規模化生產及產品質量控制奠定了基礎。楊雷等（2013）[25]研究表明，用生物反應器微載體灌注培養Marc-145細胞制備PRRS疫苗工藝可行，適合大規模工業化生產，有較好的應用前景。喬自林等（2014）[26]建立了微載體培養Marc-145細胞增殖PRRSV的多次收毒工藝，在微載體培養條件下Marc-145細胞增殖PRRSV時多次收毒方式所獲符合標準的病毒液是正常收毒方式的兩倍以上，提高了微載體和種子細胞的利用率，降低疫苗的生產成本。

2.8 豬圓環病毒病

豬圓環病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）是引起仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）為代表的系列疾病的病原，主要侵害6～12周齡的仔豬。PCV2的感染呈世界性分布，已成為危害養豬業健康發展的重要病因之一。PCV2感染可以導致動物免疫抑制，從而增強對其他多種病原體的易感性，使病情更加復雜化。目前疫苗免疫仍是控制PCV2感染引起相關疾病的重要手段。在疫苗的研制中，病毒抗原含量對免疫效果影響較大。由于PCV2在細胞中不產生細胞病變（CPE），體外增殖能力差，增殖滴度不高，因此篩選高滴度病毒株和提高PCV2在細胞中的增殖滴度是PCV2疫苗研究的關鍵。何錫忠（2009和2010）[27-28]研究了反應器、轉瓶、方瓶不同培養系統生產PCV2，對轉瓶不同參數下的病毒效價情況進行優化比較，最終參數分別以1∶10稀釋種毒后接種、接種24 h的PK-15細胞、5～7 mg/mL微載體濃度和維持液低糖DMEM+0.2%水解乳蛋白（LH）的培養方式效果最為理想。高金良（2013）[29]為了克服PCV2體外繁殖能力差、增殖滴度低的缺點，利用微載體貼壁細胞具有高比表面積，細胞產量高、便于監測、控制和取樣，生產規模容易放大，不易污染等優點，初步探討利用轉管微載體培養PK-15細胞生產PCV2。結果顯示，相同培養液中轉管培養PK-15細胞數是普通方瓶培養細胞數的10倍左右，接毒120.8MOI組在接毒后100 h時病毒含量達到最高5.53E+06 copies/μL，可以提高病毒滴度1.65倍左右。表明利用微載體培養PK-15細胞生產PCV2是可行的，為提高病毒增殖滴度和大規模工業化生產高效價疫苗抗原提供了技術依據。喬云龍等（2014）[30]建立了利用WAVE波浪生物反應器生產PCV2滅活疫苗的方法，通過對微載體的含量、細胞接種密度、細胞培養條件等參數進行了優化，有效提升了PCV2滅活疫苗的生產效率以及免疫保護效力。楊霞等（2015）[31]為提高PCV2的增殖規模及單位體積內的病毒滴度，利用轉管微型反應器，采用熒光定量PCR檢測方法，對PCV2在PK-15細胞中復制特性和增殖動態進行了系統研究。結果顯示，轉管（內置0.6 g紙片載體）中接種約2.98×107個PK-15細胞，培養7 d細胞增至1.93×108～2.0×108個，并確定培養7 d時為最佳接毒時間；病毒的最佳接種劑量為120.8 MOI，最佳收毒時間為接毒后的100 h。細胞數增長與糖耗間呈明顯平行關系，在細胞生長期內（168 h）平均每個細胞耗糖量為3.09×10-8g/24 h，可以根據糖耗量的多少推測細胞生長狀態和數量。相同培養液中利用轉管微型反應器培養PK-15細胞生產PCV2最終獲得的病毒液毒價比轉瓶培養毒價提高1.65倍。本研究為PCV2在生物反應器中大規模培養提供了參考依據。

3 存在的問題與展望

由于微載體系統培養細胞具有顯著的優點，其與生物反應器相結合進行培養具有系統化、自動化的可操作系統，國內外研究人員在微載體的研究與制備方面做了大量工作，因此隨著科研方法的不斷改進，微載體系統細胞大規模培養技術必將有更為廣闊的應用前景。但微載體系統大規模細胞培養還存在一定的限制因素[32]。如微載體雖在某些方面進行了改善，但總體上還不能很好地同時滿足操作簡便、系統穩定、經濟合理、生物相容性好以及對細胞的機械保護等諸多要求；在培養過程中，人們往往忽略了微載體對細胞的生物學作用，不能實現培養過程的階段性調控；現有的生物反應器系統不能同時滿足規模化、剪切力小及混合性能好等特點。相信隨著科研人員對微載體材料進行表面改性來調節其力學和生物降解性能，將生物力學和材料科學的相關成果移植于細胞工程領域，必將實現微載體技術大規模培養的仿生化、自動化和精巧化水平，推進該技術的廣泛應用。反應器細胞培養工藝技術的革新是我國獸用生物制品行業升級換代的必然趨勢。細胞培養技術在走向全懸浮培養的終極階段，微載體培養技術必將在漫長的過渡階段為提高我國疫苗質量、有效地發揮疫苗在我國防控政策中的基礎性作用，從而對推動我國從疫苗生產大國走向疫苗生產強國等方面起著重要的示范作用和社會意義。

參考文獻

[1]王家敏，平玲，徐水林，等.微載體培養技術及其在疫苗生產中的應用[J].黑龍江農業科學，2014（12）：146-149.

[2]Van Wezel A L.Growth of cell 2 strains and primary cells micro-carriers in homogenous culture[J].Nature,1967,216:64-65.

[3]沈武玲，王家敏，于國偉.微載體培養技術在生物醫藥領域的應用[J].江蘇農業科學，2012，40（8）：43-45.

[4]張韌，王建超，陳文慶，等.反應器細胞懸浮培養和微載體培養技術在動物疫苗生產中的應用[J].中國獸藥雜志，2012，46（11）：39-43.

[5]劉軼，朱國強.動物細胞培養及微載體技術研究進展[J].吉林農業大學學報，2007，29（2）：203-206.

[6]魏鳳，管宇，肖躍強，等.微載體技術在動物細胞培養中的應用進展[J].黑龍江畜牧獸醫，2013（17）：34-36.

[7]過琴媛，王輝，沈心亮.微載體培養動物細胞技術的研究進展[J].微生物學免疫學進展，2007，35（1）：73-75.

[8]周燕，劉寶林，楊波，等.微載體培養技術的研究與進展[J].中國組織工程研究與臨床康復，2010，14（16）：2945-2948.

[9]王延輝，彭伍平，胡東波，等.豬瘟病毒高敏感性細胞的克隆及其在微載體培養中的應用[A].中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術研討會論文集[C].中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會，2010：322-324.

[10]漆世華，劉漢平，秦紅剛，等.應用生物反應器工業化生產豬瘟活疫苗的方法[P].湖北：CN102038944A，2011.

[11]張智明，任德強，戴秀莉，等.應用生物反應器微載體培養ST細胞生產豬偽狂犬病病毒的方法[P].黑龍江：CN102690791A，2012.

[12]李智力，易小萍，儲炬，等.PK-15細胞微載體懸浮培養生產豬細小病毒的工藝研究[J].中國生物工程雜志，2015，35（7）：62-67.

[13]劉漢平，秦紅剛，朱薇，等.應用生物反應器工業化生產豬乙型腦炎疫苗的方法[P].湖北：CN102038943A，2011.

[14]岳雷，郭鑫，陳靜，等.利用生物反應器制備豬乙型腦炎滅活疫苗的方法[P].河北：CN102949715A，2013.

[15]鄒勇，周燕，王建超，等.應用微載體技術生產TGEV試驗研究[A].中國畜牧獸醫學會家畜傳染病學分會第六屆全國會員代表大學暨第11次學術研討會論文集（下）[C].中國畜牧獸醫學會家畜傳染病學分會，2005：1115-1118.

[16]周燕，王建超，華平，等.豬傳染性胃腸炎病毒在ST細胞中增殖規律的研究[J].中國獸醫科技，2005，35（6）：423-427.

[17]邱文英，方鵬飛，胥燕芳，等.應用生物反應器培養豬傳染性胃腸炎病毒[J].中國獸藥雜志，2013，47（6）：24-26.

[18]何錫忠，李春華，潘潔，等.應用生物反應器培養ST細胞制備豬傳染性胃腸炎病毒[J].國外畜牧學-豬與禽，2014，34（6）：48-50.

[19]王建超，周燕，華平，等.應用生物反應器和微載體培養Vero細胞生產豬流行性腹瀉病毒的研究[J].畜牧獸醫學報，2003，34（6）：573-576.

[20]王建超，周燕，華平，等.豬流行性腹瀉病毒Vero細胞微載體培養條件的優化試驗[J].中國獸醫科技，2004，34（5）：50-54.

[21]姜艷平，施雯，徐靜，等.豬流行性腹瀉病毒在微載體培養Vero細胞上的增殖試驗[J].畜牧與獸醫，2015，47（8）：89-92.

[22]穆光慧，李嘉愛，齊冬梅.豬繁殖與呼吸綜合征病毒在Marc-145細胞微載體上培養條件的研究[J].廣東畜牧獸醫科技，2010，35（4）：37-40.

[23]梅建國，王玉茂，王文秀，等.應用生物反應器生產高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原[J].動物醫學進展，2012，33（11）：80-84.

[24]馮磊，褚軒，吳培培，等.Marc-145細胞微載體懸浮培養及PRRSV增殖工藝的建立[J].江蘇農業學報，2012，28（3）：598-603.

[25]楊雷，李偉，漆世華，等.微載體灌注培養Marc-145細胞制備豬繁殖與呼吸綜合征疫苗[J].中國獸藥雜志，2013，47（2）：7-10.

[26]喬自林，令世鑫，沈武玲，等.微載體培養Marc-145細胞增殖豬繁殖與呼吸綜合征病毒的多次收毒工藝[P].甘肅：CN 103555674A，2014.

[27]何錫忠.豬圓環病毒2型高密度培養的研究[D].南京：南京農業大學，2009.

[28]何錫忠，李春華，倪建平，等.用微載體系統培養PK15細胞生產豬圓環病毒2型[J].上海農業學報，2010，26（4）：149-151.

[29]高金良.豬細小病毒病—豬圓環病毒病二聯滅活疫苗的研究[D].鄭州：河南農業大學，2013.

[30]喬云龍，張嬌嬌，楊艷坤，等.利用WAVE波浪生物反應器生產豬圓環病毒2型滅活疫苗的方法[P].黑龍江：CN103520715A，2014.

[31]楊霞，高金良，陳陸，等.豬圓環病毒2型在轉管微載體培養PK-15細胞中增殖動態[J].中國預防獸醫學報，2015，37（2）：146-148.

[32]陳玉琴，蔡欽泉，張彥鵬，等.微載體系統規模化細胞培養研究[J].中國生物工程雜志，2008，28（6s）：215-219.

（編輯：富春妮）

新一屆全國動物防疫智庫組成

為深入貫徹中辦、國辦《關于加強中國特色新型智庫建設的意見》精神和農業部關于加強農業農村經濟發展新型智庫建設的要求，進一步發揮委員會作用，提升動物科學決策水平，1月8日，第二屆全國動物防疫專家委員會在北京宣布成立。

2009年，農業部成立第一屆全國動物防疫專家委員會，這是我國動物防疫智庫的雛形。本屆全國動物防疫專家委員會選聘了夏咸柱等65名同志為委員會委員，其中包括8名院士。專家成員中除了獸醫專業領域外，還涵蓋了經濟、科技、質檢、林業和公共衛生等領域。本屆專家委員會分設動物傳染病、獸醫公共衛生、獸醫流行病學、外來動物疫病、動物流感、口蹄疫和血吸蟲病7個專家組。

出席成立大會的農業部副部長于康震強調，成立專家委員會是保障“十三五”現代畜牧業可持續發展的迫切需要，動物防疫專家委員會要當好防控決策的智囊團，要成為獸醫理論創新的思想庫，引領國際獸醫工作的風向標，是解釋宣傳防疫政策的專家團。在推進動物防疫工作過程中，有一些重大問題需要進行深入系統研究，諸如動物防疫法律法規問題，動物防疫體制機制問題，動物防疫隊伍能力問題，以及獸醫技術與管理創新問題。新一屆專家委員會要圍繞“十三五”獸醫事業發展的目標任務梳理問題、提出對策。

（轉自中國畜牧獸醫報[N]，2016-01-10）

Progress on Application of Microcarrier Culture Technology in Viral Vaccine of Swine

ZHUANG Jinqiu,MEI Jianguo,MA Li,LI Feng,SHEN Zhiqiang
(Shandong Binzhou Animal Science&Veterinary Medicine Academy,Binzhou 256600,China)

Microcarrier culture technology is the key technology in the production of vaccines.It reviews the progress on application of the technology in viral vaccine of swine,in order for veterinary science and technology workers and the vast majority of aquaculture owners better understanding of the technology and prepared by the technique of swine vaccine so as to provide references for rational use of vaccine and effective prevention and control of the disease.

microcarrier;bioreactor;vaccine;progress on application

S858.28

A

1002-1957(2016)02-0124-05

2016-03-03

山東省重點研發計劃項目（2015GSF121027）；山東省現代農業產業技術體系生豬產業創新團隊項目（SDAIT-06-022-15）

莊金秋（1978-），女，山東濰坊人，副研究員，碩士，主要從事細胞培養和動物用病毒疫苗研制工作. E-mail:zhuangjinqiu2003@163.com

沈志強，研究員，博士.E-mail:bzshengzq@163.com