宮頸癌患者外周血E RCC1基因多態(tài)性對(duì)順鉑新輔助化療療效的影響

關(guān) 靈，鄭銳年，吳少敏，林順歡，李仲均，吳依芬，廖玉婷，江麗華，趙燕海

（廣東省東莞市人民醫(yī)院，廣東 東莞 523000）

宮頸癌患者外周血E RCC1基因多態(tài)性對(duì)順鉑新輔助化療療效的影響

關(guān) 靈，鄭銳年，吳少敏，林順歡，李仲均，吳依芬，廖玉婷，江麗華，趙燕海

（廣東省東莞市人民醫(yī)院，廣東 東莞 523000）

目的 探討宮頸癌患者外周血核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)1（ERCC1）基因多態(tài)性對(duì)順鉑新輔助化學(xué)治療（簡(jiǎn)稱化療）療效的影響。方法 選擇2010年3月至2014年6月醫(yī)院收治的宮頸癌患者80例，根據(jù)外周血ERCC1基因表達(dá)的不同分為CC組和TT組，各40例。兩組患者均給予紫杉醇聯(lián)合順鉑化療，21 d為1個(gè)周期，共治療6個(gè)周期。治療結(jié)束時(shí)比較兩組患者的近期療效、中位生存期、中位進(jìn)展時(shí)間、2年生存率，記錄不良反應(yīng)的發(fā)生情況。結(jié)果 治療后，TT組近期療效52．50%，CC組近期療效為67．50%，CC組顯著優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）；CC組患者的中位進(jìn)展時(shí)間、中位生存期以及2年生存率均顯著高于TT組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。治療后，兩組患者血清中CYFRA21－1及SCC－Ag表達(dá)均較治療前有所下降，且CC組下降程度優(yōu)于TT組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。兩組患者各方面不良反應(yīng)發(fā)生率結(jié)果均無(wú)顯著性差異（P＞0．05）。結(jié)論 ERCC1 C19007T表達(dá)為C／C型的患者相比較表達(dá)為T／T型的患者臨床療效更好，其中位進(jìn)展時(shí)間、中位生存期均較長(zhǎng)，2年生存率較高，化療后血清中特異腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)可顯著降低，且不良反應(yīng)發(fā)生率相當(dāng)。

核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)1；C19007T；基因多態(tài)性；宮頸癌；臨床療效

宮頸癌為女性常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，占所有女性腫瘤的15%左右[1]。發(fā)展中國(guó)家宮頸癌發(fā)病率高于發(fā)達(dá)國(guó)家，超過(guò)85%的宮頸癌發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家[2]。我國(guó)每年新發(fā)宮頸癌病例14萬(wàn)，占世界宮頸癌新發(fā)病例的28．8%，嚴(yán)重威脅了婦女的身體健康[3]。多數(shù)宮頸癌發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于晚期，單純手術(shù)或放射治療不易控制，需結(jié)合新輔助化學(xué)治療（簡(jiǎn)稱化療）控制腫瘤增長(zhǎng)，鉑類藥物是宮頸癌化療藥物中最有效、最基礎(chǔ)的藥物之一，而鉑類藥物的化療敏感性可能影響患者的預(yù)后。核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)1（ERCC1）基因是核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)（ERCC）基因家族一員，其正常表達(dá)可維持該修復(fù)酶功能。ERCC1的多態(tài)性可能影響ERCC1蛋白的表達(dá)、穩(wěn)定性以及活性，由于ERCC1基因存在不同的多態(tài)性，其DNA的核苷酸切除修復(fù)能力也不同，從而表現(xiàn)為對(duì)鉑類藥物的敏感性不同[4]。筆者觀察了我院就診的宮頸癌患者給予順鉑聯(lián)合紫杉醇化療時(shí)患者外周血ERCC1表達(dá)與臨床療效間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料

納入標(biāo)準(zhǔn)[5]：經(jīng)宮頸活檢病理確診為宮頸癌，經(jīng)外周血檢測(cè)ERCC1基因C19007T表達(dá)為C／C型或T／T型，按照2009年國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟（FIGO）宮頸癌術(shù)前臨床分期為Ⅱ～Ⅳ期；至少存在1個(gè)可測(cè)量病灶；評(píng)估患者生存期≥3個(gè)月；體力狀況（ECOG）評(píng)分為0～2分；入院前未行任何針對(duì)宮頸癌的有關(guān)治療；既往無(wú)化療史或化療結(jié)束超過(guò)3個(gè)月；無(wú)化療禁忌。

排除標(biāo)準(zhǔn)：非原發(fā)宮頸癌；合并嚴(yán)重心、腎、造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)疾病；精神異常依從性較差；對(duì)本組治療藥物過(guò)敏。

病例選擇：本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。選取2010年3月至2014年6月我院收治的宮頸癌患者80例，所有患者根據(jù)外周血ERCC1基因C19007T表達(dá)的類型分為CC組和TT組，各40例。兩組患者年齡、臨床分期、ECOG評(píng)分、病程等一般資料相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），具有可比性。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者一般資料比較（n＝40）

1．2 方法

1．2．1 化療

兩組患者均在第1天給予紫杉醇注射液（海南中化聯(lián)合制藥工業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20058367，規(guī)格每支5 mL∶30 mg）150 mg／m2，順鉑注射液（江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H20040813，規(guī)格每支6 mL∶30 mg）75 mg／m2，用藥前12 h，6 h口服醋酸地塞米松片（浙江仙琚制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H33020822，規(guī)格為每片0．75 mg），治療前30 min給予鹽酸苯海拉明注射液（廣州白云山明興制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H44022387，規(guī)格每支1 mL∶20 mg）預(yù)處理，21 d為1個(gè)周期，共化療6個(gè)周期。

1．2．2 檢測(cè)方法

在化療前后，抽取所有患者外周血 2 mL，用TIANamp Blood血液基因組DNA提取試劑盒（天根生化科技＜北京＞有限公司）按說(shuō)明書提基因組DNA。

PCR擴(kuò)增 ：采用Primer 5．0軟件設(shè)計(jì)引物設(shè)計(jì)引物，C19007T：5－GAGAGGGCTGAGCTGGAGACAG－3′，5－CCAGCACATAGTCGGGAATTACGTC－3′。

PCR反應(yīng)體系：50 μL總體系中包含基因組DNA 2 μL，上下游引物各1 μL，dNTP（0．2 mmol／L）Mixture 8 μL，0×LA PCR BufferⅡ(Mg2＋Plus)5 μL，TaKaRa LA Taq(5 U／μL)0．5 μL。

反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性3 min，94℃變性1 min，在一定退火溫度下退火1 min，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)，72℃再延伸5 min。

PCR產(chǎn)物測(cè)序：PCR產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察并拍照，200 bp出現(xiàn)亮帶后測(cè)序。測(cè)序結(jié)果用DNASTAR軟件包中的Seqman進(jìn)行序列分析，用其中的MegAlign進(jìn)行與標(biāo)準(zhǔn)序列的比對(duì)，查找突變位點(diǎn)。

1．3 觀察指標(biāo)和臨床療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[6]

近期療效：按RECIST實(shí)體瘤客觀療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者進(jìn)行評(píng)價(jià)，完全緩解（CR）指靶病灶消失，無(wú)新病灶出現(xiàn)且腫瘤標(biāo)志物正常持續(xù)4周及以上；部分緩解（PR）指靶病灶最大徑之和減少≥30%，至少4周；穩(wěn)定（SD）指靶病灶最大徑之和縮小未達(dá)PR或者增大未達(dá)PD；進(jìn)展（PD）指靶病灶最大徑之和至少增加≥20%，且其絕對(duì)值增加至少5 mm，出現(xiàn)新病灶也視為PD。兩組患者均于化療結(jié)束之后評(píng)定近期療效。總有效率＝（完全緩解例數(shù)＋部分緩解例數(shù)）／總例數(shù)×100%。

觀察兩組患者的中位進(jìn)展時(shí)間（從治療開(kāi)始到50%患者腫瘤無(wú)法控制，開(kāi)始進(jìn)展的時(shí)間）、中位生存期（藥物治療過(guò)程中，50%的患者能存活的時(shí)間）以及2年生存率。

觀察兩組患者治療前后血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達(dá)的變化。

治療期間密切觀察患者不良反應(yīng)，定期檢查血尿常規(guī)、肝腎功能，記錄不良反應(yīng)的發(fā)生情況。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17．0版軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，行 t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比表示，行 χ2檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 近期療效

結(jié)果見(jiàn)表2。TT組近期療效52．50%，CC組近期療效為67．50%，CC組顯著優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。

表2 兩組患者近期療效比較[例（%），n＝40]

2．2 中位進(jìn)展時(shí)間、中位生存期及2年生存率

治療后，CC組患者的中位進(jìn)展時(shí)間、中位生存期以及2年生存率均顯著高于TT組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組患者中位進(jìn)展時(shí)間、中位生存期以及2年生存率比較（s，n＝40）

表3 兩組患者中位進(jìn)展時(shí)間、中位生存期以及2年生存率比較（s，n＝40）

組別TT組CC組中位進(jìn)展時(shí)間（月）11．10±1．09 16．80±1．24中位生存期（月）17．10±1．45 20．93±1．62 2年生存率（%）42．19±2．18 47．62±2．20

2．3 血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達(dá)

治療前，兩組患者血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0．05），治療后均較治療前有所下降，且CC組下降程度優(yōu)于TT組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。見(jiàn)表4。

表4 兩組患者血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達(dá)的變化（s，mg／L，n＝40）

表4 兩組患者血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達(dá)的變化（s，mg／L，n＝40）

注：與同組治療前相比，＃P＜0．05；與 TT組治療后比較，P＜0．05。

組別CYFRA21－1 SCC－Ag TT組CC組治療前7．01±1．21 7．06±1．29治療后3．92±0．45＃2．34±0．50＃治療前5．72±1．03 5．83±1．09治療后3．70±0．87＃2．33±0．50＃

2．4 藥品不良反應(yīng)

見(jiàn)表5。主要不良反應(yīng)為胃腸道反應(yīng)、骨髓抑制、肝腎功能異常、脫發(fā)、肌肉關(guān)節(jié)疼痛，兩組患者在不良反應(yīng)發(fā)生率各方面進(jìn)行比較均無(wú)顯著性差異（P＞0．05）。

表5 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況比較[例（%），n＝40]

3 討論

鉑類藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后，水解形成雙氯雙氨鉑，與細(xì)胞的DNA形成鉑－DNA加合物，DNA加合物能引起基因突變和細(xì)胞轉(zhuǎn)化，從而影響細(xì)胞DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，最終導(dǎo)致DNA損傷[7]。而機(jī)體對(duì)鉑類藥物的耐受受多因素影響，包括藥物蓄積、藥物失活、DNA損害耐受等。其中機(jī)體的損傷修復(fù)系統(tǒng)可以修復(fù)DNA損傷[8]，從而影響鉑類藥物的化療敏感性，因此機(jī)體DNA損傷修復(fù)能力的差異是決定鉑類藥物化療效果的重要因素。核苷酸切除修復(fù)(NER)是人類最主要及最重要的DNA損傷修復(fù)途徑，切除ERCC1是涉及其中的最主要基因，它可以識(shí)別DNA損傷部位，并與色素性干皮病相關(guān)蛋白F(XPF)結(jié)合形成復(fù)合物切開(kāi)受損DNA的5c末端，從而參與核苷酸切除修復(fù)[9]。此外，ERCC1還參與其他DNA修復(fù)途徑，如同源末端連接修復(fù)、雙鏈斷裂修復(fù)等。所有腫瘤細(xì)胞中均有ERCC1的表達(dá)，而ERCC1表達(dá)的高低以其基因多態(tài)性在這一過(guò)程中起著重要作用，也是引起鉑類藥物耐藥的重要原因。

不同基因型的ERCC1在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)程度及頻次均不同，從而影響腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑類藥物的敏感性，ERCC1 C19007T多態(tài)性表達(dá)為密碼子AAC變成AAT，其中T等位基因的存在影響mRNA的穩(wěn)定性。有研究認(rèn)為ERCC1－118與化療反應(yīng)顯著相關(guān)[10]，其中C／C， C／T對(duì)鉑類的化療反應(yīng)較 T／T更好。研究報(bào)道，ERCC1C19007A多態(tài)的TT基因型或含T等位基因的單倍型可顯著增加食管癌、乳腺癌、基底細(xì)胞癌、肺癌等惡性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及臨床療效。

本研究針對(duì)ERCC1 C19007T表達(dá)為C／C型及T／T型的患者臨床效果進(jìn)行觀察。結(jié)果顯示，治療后TT組近期療效52．50%，顯著低于CC組的67．50%（P＜0．05）；CC組患者的中位進(jìn)展時(shí)間、中位生存期以及2年生存率均顯著高于TT組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。CYFRA21－1為宮頸癌具有很高價(jià)值的血清標(biāo)記物，SCC－Ag升高與宮頸深肌層浸潤(rùn)和盆腔淋巴相關(guān)，治療后，兩組患者血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達(dá)均較治療前下降，且CC組下降程度優(yōu)于TT組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生率無(wú)顯著性差異（P＞0．05）。

綜上所述，ERCC1 C19007T表達(dá)為C／C型的患者相比較表達(dá)為T／T型的患者臨床療效更好，其中位進(jìn)展時(shí)間、中位生存期均較長(zhǎng)，2年生存率較高，化療后血清中特異腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)可顯著降低，不良反應(yīng)發(fā)生率相當(dāng)。

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Influence of Peripheral Blood ERCC1 Gere Polymorphism on Patients with Cervical Cancer Undergoing Neoadjuvant Cisplatin Chemotherapy

Guan Ling,Zheng Ruinian,Wu Shaomin,Lin Shunhuan,Li Zhongjun,Wu Yifen,Liao Yuting,Jiang Lihua,Zhao Yanhai
(Dongguan People′s Hospital,Dongguan,Guangdong,China 523000)

Objective To investigate the influence of peripheral blood ERCC1 gene polymorphism on patients with cervical cancer undergoing neoadjuvant cisplatin chemotherapy．M ethods 80 cases with cervical cancer from March 2010 to June 2014 were divided into CC group and TT group according to the ERCC1 gene expression of the peripheral blood,40 cases in each group．The two groups were given paclitaxel combined with cisplatin chemotherapy,21 d for 1 course,altogether 6 courses．At the end of the treatment,the shortterm efficacy of the two groups were compared,and the median survival,the median time to progression,the two years survival rate were compared between the two groups,and the occurrence of adverse reactions was recorded．Results After treatment,the short－term efficacy of the TT group was 52．50%,the short－term efficacy of CC group was 67．50%,CC group was significantly better than that in control group(P＜0．05);the median progression,median survival and 2－year survival rate were significantly higher than those in TT group(P＜0．05)．After treatment,serum CYFRA21－1,SCC－Ag expressions in the two groups were decreased,and the level of CC was significantly higher than that of TT group,the difference was statistically significant(P＜0．05)．The incidence of adverse reactions in two groups were observed,and the results showed no significant difference(P＞0．05)．Conclusion The clinical efficacy of C19007T ERCC1 in patients with C／C was better than that of patients with T／T．The median time to progression,median survival and two years survival were higher．The expression of specific tumor markers in serum was significantly lower,and the incidence rate of adverse reactions was similar．

ERCC1;C19007T;gene polymorphism;cervical cancer;clinical efficacy

R979．1；Q786

A

1006－4931(2016)09－0015－04

關(guān)靈（1969－），女，大學(xué)本科，副主任藥師，研究方向?yàn)樗幬锱R床試驗(yàn)，（電子信箱）813008501＠qq．com。

2015－09－10)

廣東省東莞市科技計(jì)劃醫(yī)療衛(wèi)生類科研一般項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：2015105101180。