哌拉西林他唑巴坦鈉人體藥動(dòng)學(xué)研究

范珠

（四川省內(nèi)江市中醫(yī)醫(yī)院，四川 內(nèi)江 641100）

哌拉西林他唑巴坦鈉人體藥動(dòng)學(xué)研究

范珠

（四川省內(nèi)江市中醫(yī)醫(yī)院，四川 內(nèi)江 641100）

目的 建立檢測(cè)血漿中哌拉西林和他唑巴坦鈉含量的高效液相色譜（HPLC）法，并對(duì)兩種藥物的藥動(dòng)學(xué)模型進(jìn)行相關(guān)分析。方法 隨機(jī)抽取14名健康者進(jìn)行試驗(yàn)，給予兩種高、低2個(gè)劑量的給藥方案，測(cè)定其不同時(shí)間內(nèi)的血藥濃度。結(jié)果 血漿樣品檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍哌拉西林與他唑巴坦鈉均為0．4～400 g／mL；將血漿樣品置－20℃以下的溫度存放，質(zhì)量濃度下降的相對(duì)偏差均在15%以內(nèi)；哌拉西林和他唑巴坦鈉的血藥峰濃度(Cmax)比與0～6 h藥時(shí)曲線下面積(AUC0－6h)比與質(zhì)量濃度均呈正相關(guān)。結(jié)論 采用HPLC法檢測(cè)該藥血藥濃度，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，血漿中該藥的人體內(nèi)動(dòng)力學(xué)行為與線性藥動(dòng)學(xué)一致，不同劑量之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

哌拉西林；他唑巴坦鈉；高效液相色譜法；人體；藥代動(dòng)力學(xué)

注射用哌拉西林他唑巴坦鈉為復(fù)方制劑，主要成分為他唑巴坦鈉和哌拉西林鈉(1∶4)，主要的適應(yīng)證有糖尿病足、肺炎、皮膚及軟組織感染、盆腔炎、子宮內(nèi)膜炎及闌尾炎等[1－3]。哌拉西林本身是一種抗生素，抗菌譜廣，但對(duì)酶類不穩(wěn)定，易產(chǎn)生耐藥性；他唑巴坦是一種酶抑制劑，可輔助哌拉西林不被肽胺酶滅活，從而提高哌拉西林的抗耐藥作用；兩藥聯(lián)用可增加抗菌種類，增強(qiáng)抗菌活性[4－10]。本研究中主要采用高效液相色譜（HPLC）法檢測(cè)人體內(nèi)血漿中的藥物濃度，研究藥物在人體中的藥動(dòng)學(xué)行為，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

日本島津SPD6高效液相色譜儀，包括四元輸液泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測(cè)器，采用千譜數(shù)據(jù)工作站；SIGMA 2K－15型高速低溫離心機(jī)；美國(guó)Milli－Q Plus純水器（美國(guó)密理博＜中國(guó)＞有限公司）。

1．2 試藥

注射用哌拉西林他唑巴坦鈉（Wyeth Lederle SPA，批號(hào)為0512301，規(guī)格為每瓶2．5 g，含哌拉西林2．0 g與他唑巴坦0．5 g)；哌拉西林（華北制藥股份有限公司，批號(hào)為0511911）；雷諾嗪（江西西峰藥業(yè)有限公司）；他唑巴坦鈉（石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)＜石家莊＞有限公司，批號(hào)為0510817）；茶堿緩釋片（哈藥集團(tuán)制藥六廠，國(guó)藥準(zhǔn)字H23021113）；乙腈和甲醇（DIMA公司）；試驗(yàn)用水為去離子水，實(shí)驗(yàn)室專業(yè)人員自制；其他藥品及試劑為分析純?cè)噭?/p>

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

2．1．1 哌拉西林

分析柱：Hypersil ODS（2）（大連伊力特分析儀器有限公司，200 mm×4．6 mm，5 μm）；預(yù)柱：C18保護(hù)柱(20 mm×4 mm)；柱溫：30℃；流動(dòng)相：0．025 mol／L磷酸二氫鈉－甲醇（60∶40）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：229 nm；靈敏度：0．001 AUFS。

2．1．2 他唑巴坦鈉

分析柱：Hypersil ODS（2）柱（大連伊力特分析儀器有限公司，200 mm×4．6 mm，5 μm）；預(yù)柱：C18保護(hù)柱(20 mm×4 mm)；柱溫：30℃；流動(dòng)相：0．025 mol／L磷酸二氫鈉－甲醇（95∶5）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；靈敏度：0．005 AUFS。

2．2 血漿樣品處理

2．2．1 哌拉西林

取 1．5 mL離心管，精密量取 0．25 mL血漿，加入10 μL水、0．75 mL甲醇，混勻，離心5 min，轉(zhuǎn)速為10 000 r／min，取出上清液15 μL進(jìn)行HPLC分析。

2．2．2 他唑巴坦鈉

他唑巴坦鈉：取1．5 mL離心管，精密量取0．25 mL血漿，加入10 μL水、0．25 mL乙腈，混勻，離心10 min，轉(zhuǎn)速為 10 000 r／min，取出上清液 20 μL進(jìn)行 HPLC分析。

2．3 方法學(xué)考察

2．3．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

取若干空白血漿，均為0．25 mL，加入不同質(zhì)量濃度的哌拉西林標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μL，配成6份血漿樣品，得質(zhì)量濃度分別為1，5，25，50，100，200 mg／L的系列溶液，按血漿樣品處理方式進(jìn)行處理，記錄色譜圖。同法制備他唑巴坦鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄色譜圖。血漿樣品質(zhì)量濃度線性范圍哌拉西林與他唑巴坦鈉均為0．4～400 μg／mL。

2．3．2 精密度與回收率試驗(yàn)

取0．5 mL的空白血漿，加入哌拉西林和他唑巴坦鈉溶液50 μL，分別制備高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品。其中，哌拉西林的質(zhì)量濃度分別為1，20，200 μg／mL，他唑巴坦鈉的質(zhì)量濃度分別為1，10，50 μg／mL。每個(gè)質(zhì)量濃度制備6份樣品溶液，取當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線求樣品濃度，并與加入質(zhì)量濃度相比求出準(zhǔn)確度和精密度及提取回收率。提取回收率＝提取后的峰面積／未經(jīng)提取的峰面積）。結(jié)果見表1。

2．3．3 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法配制高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品，計(jì)算出質(zhì)量濃度。將另外3份樣品分別置室溫4，24，48 h，4℃及－80℃下進(jìn)行反復(fù)凍融3次和60 d，再次測(cè)定樣品質(zhì)量濃度。結(jié)果顯示，將血漿樣品置－20℃以下的溫度存放，質(zhì)量濃度下降的相對(duì)偏差均在15%以內(nèi)，表明樣品在測(cè)試過程中比較穩(wěn)定，存放溫度不會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

表1 精密度與回收率試驗(yàn)結(jié)果（s）

表1 精密度與回收率試驗(yàn)結(jié)果（s）

藥物成分他唑巴坦鈉哌拉西林加入量（ g／mL）1 10 50 1 20 200方法回收率（%）95．3±4．8 102．7±2．7 98．7±2．8 106．7±5．8 102．8±2．6 99．8±2．6提取回收率（%）93．6±2．7 92．6±1．9 96．3±2．5 97．4±2．5 93．7±2．5 95．8±2．6日內(nèi)精密度 RSD（%）2．5 2．1 2．1 3．8 2．3 2．4日間精密度 RSD（%）11．3 2．7 2．2 12．8 3．1 3．6

2．4 人體藥動(dòng)學(xué)研究

2．4．1 研究對(duì)象

隨機(jī)抽取14名健康體檢者，男7例，女7例；年齡20～25歲；體重46～70 kg；身高158～178 cm。所有研究對(duì)象在進(jìn)行試驗(yàn)前均進(jìn)行全面體檢，所有指標(biāo)均顯示正常。在進(jìn)行試驗(yàn)前2周均停止使用任何藥物，試驗(yàn)過程中禁止吸煙、飲酒及食用高脂肪食物等。所有研究對(duì)象對(duì)本次試驗(yàn)均知悉，且一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），具有可比性。

2．4．2 給藥方案

試驗(yàn)當(dāng)天給予患者青霉素皮膚過敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示陰性即可進(jìn)行試驗(yàn)。使用試驗(yàn)制劑（規(guī)格為每支1．25 g）溶于0．9%氯化鈉注射液100 mL靜脈滴注，45 min內(nèi)滴完，分別在滴注時(shí)及滴注后的第0．08，0．25，0．5，0．75，1，1．5，2，2．5，3，4，6 h時(shí)取血4 mL，離心5 min，轉(zhuǎn)速為10 000 r／min。取1 mL血漿，作為待測(cè)樣品，置－70℃處存放。1周后再次進(jìn)行試驗(yàn)。

2．4．3 血藥濃度和藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

結(jié)果顯示，給予研究對(duì)象靜脈滴注哌拉西林1．0 g和2．0 g的劑量比為50%，血藥峰濃度(Cmax)比和0～6 h藥時(shí)曲線下面積(AUC0－6h)比分別為48%和45%，呈正相關(guān)；給予研究對(duì)象靜脈滴注他唑巴坦鈉0．25 g和0．5 g的劑量比為50%，Cmax比和 AUC0－6h比分別為47%和43%，呈正相關(guān)。14名研究對(duì)象在45min內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。

表2 45 min內(nèi)14名研究對(duì)象藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（s,n＝14）

表2 45 min內(nèi)14名研究對(duì)象藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（s,n＝14）

參數(shù)哌拉西林 他唑巴坦鈉達(dá)峰時(shí)間(Tmax，h)血藥峰濃度(Cmax，mg·L－1) 0～6 h藥時(shí)曲線下面積[AUC0－6h，mg·(L·h)－1] 0～∞藥時(shí)曲線下面積[AUC0－∞，mg·(L·h)－1]末端消除半衰期(t1／2，h)清除率(Cl，L／h) 1．0 g 0．74±0．06 74．8±19．5 104．75±29．7 106．4±28．0 1．3±0．5 10．8±2．6 2．0 g 0．74±0．06 152．7±23．8 223．6±46．8 227．4±46．8 1．3±0．5 9．3±2．6 0．25 g 0．74±0．06 14．8±2．8 20．6±3．8 22．8±4．8 1．8±0．7 12．8±2．3 0．5 g 0．76±0．00 32．8±5．8 47．7±8．9 48．6±9．6 0．95±0．18 10．8±1．8

3 討論

哌拉西林和他唑巴坦的藥理作用差別較大，HPLC法可對(duì)血漿內(nèi)的藥物進(jìn)行檢測(cè)。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，使用HPLC法測(cè)定血漿中的他唑巴坦和哌拉西林水平，兩種藥物在紫外區(qū)末端吸收最大，聯(lián)合使用可明顯改變干擾大的現(xiàn)象，也可達(dá)到定量要求[11－13]。

另外，本研究中加入了茶堿作為內(nèi)標(biāo)物，試驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確。本研究中藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)結(jié)果與文獻(xiàn)[14－16]結(jié)果相似，證明了哌拉西林、他唑巴坦鈉的消除半衰期并不受到劑量和滴注時(shí)間的影響。給予研究對(duì)象靜脈滴注哌拉西林1．0 g和2．0 g的劑量比為50%，Cmax比和 AUC0－6h比分別為48%和45%，呈正相關(guān)；給予研究對(duì)象靜脈滴注他唑巴坦鈉0．25 g和0．5的劑量比為50%，Cmax比和 AUC0－6h比分別為47%和43%，呈正相關(guān)。

綜上所述，哌拉西林和他唑巴坦體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程可預(yù)測(cè)，本研究結(jié)果為該藥臨床研究和應(yīng)用提供了參考。

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Pharmacokinetic Study of Piperacillin Tazobactam Sodium

Fan Zhu
(Neijiang Chinese Medicine Hospital,Neijiang,Sichuan,China 641100)

Objective To establish an HPLC method for the content detection of piperacillin and tazobactam sodium,and to conduct correlation analysis on the pharmacokinetics model of the two drugs．M ethods 14 healthy subjects were randomly selected and given high and low dose regimen．The plasma concentrations at different times were determined．Results The linear range of plasma samples of the piperacillin and tazobactam sodium were both 0．4－400 μg／mL;plasma samples stored below －20℃,the relative deviation decreased within 15%;Cmaxof piperacillin and tazobactam sodium showed positive correlation with AUC0－6hand concentrations．Conclusion The HPLC blood concentration determination of this drug is simple and relatively accurate．The dynamic study shows that the plasma of human dynamics is consistent with the linear dynamic of this drug,and the dose difference does not have statistical significance．

piperacillin;tazobactam sodium;HPLC;human;pharmacokinetics

R969．1；R978．1＋1

A

1006－4931(2016)09－0005－04

2015－08－13；

2015－12－08)