雞傳染性法氏囊病亞單位滅活疫苗免疫SPF雞瓊擴抗體效價與攻毒保護相關性試驗

王 雷　凌紅麗　曲信芹　張園園　（青島蔚藍生物股份有限公司　山東 青島　266114）

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雞傳染性法氏囊病亞單位滅活疫苗免疫SPF雞瓊擴抗體效價與攻毒保護相關性試驗

王 雷凌紅麗*曲信芹張園園（青島蔚藍生物股份有限公司山東 青島266114）

摘要為了探討雞傳染性法氏囊病(IBD)亞單位滅活疫苗瓊擴抗體效價與攻毒保護之間的相關性，為血清學效力檢驗標準的制定提供依據，用試驗室試制的3批雞傳染性法氏囊病基因工程亞單位滅活疫苗以不同劑量分別免疫21日齡SPF雞，免疫后21日采血分離血清并用強毒攻擊，將每只雞的瓊擴抗體效價與攻毒保護情況一一對應，結果顯示IBD瓊擴抗體效價不低于1:1的雞均可以抵抗強毒攻擊，表明瓊擴抗體效價與攻毒保護具有一定的相關性。

關鍵詞雞傳染性法氏囊病瓊擴抗體效價攻毒保護相關性

雞傳染性法氏囊病(infectious bursal disease, IBD)是危害雛雞的一種急性、高度接觸性、病毒性傳染病。病原為雞傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease irus, IBDV)[1]。目前該病已遍布全球養禽地區，在工業化養禽業發達地區尤為嚴重。鄺榮祿于1979年在廣州首先發現我國存在該病，此后北京、上海等地發現了該病[2, 3]。1990年以后，我國報道分離到IBD超強毒株和變異毒株，使該病出現了新的流行特點，給我國養禽業造成了很多的經濟損失[4]。

常規疫苗存在的潛在免疫病理作用是無法克服的缺陷，對病毒不斷變異也束手無策。另一方面，基因工程疫苗或藥物的生產越來簡易并趨于產業化，這些都是傳統疫苗無法比擬的。VP2蛋白是IBDV的主要結構蛋白和宿主保護性抗原，也是病毒衣殼的主要成分，與病毒中和抗體的誘導與識別、病毒毒力變異、病毒的抗原漂移、細胞凋亡的誘導等有很大關系[5, 6]，為此，采用近年流行的超強毒株制備了IBD VP2亞單位滅活疫苗。為了解雞傳染性法氏囊病亞單位滅活疫苗免疫雞只瓊擴抗體效價與攻毒保護之間是否存在一定的相關性，將不同批次的疫苗以不同的免疫劑量免疫SPF雞后測定瓊擴抗體效價并攻毒，現將試驗報告如下。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1疫苗將表達IBDV VP2的重組大腸桿菌發酵菌體破碎后離心取上清，純化后檢測其瓊擴效價，調整至不低于1:16用于配苗，水相:油相為1:3。制備3批疫苗，批號分別為201001、201002、201003，100ml/瓶，經各項檢驗合格，置2~8℃保存備用。

1.1.2SPF雞120只SPF雞購自北京梅里亞維通實驗動物技術有限公司。

1.1.3攻毒用的毒種雞傳染性法氏囊病病毒BC6/85株，購自中國獸醫藥品監察所。

1.1.4診斷抗原雞傳染性法氏囊病瓊擴診斷抗原購自中國獸醫藥品監察所。

1.2方法

將120只21日齡SPF雞隨機分成12組，每組10只，分別接種3個批次疫苗，每個批次的疫苗肌肉注射接種劑量分別為0.05、0.1、0.2、0.3ml，另10只不接種作為對照，免疫后21日采血，采用瓊擴方法檢測抗體，并點眼攻IBD強毒0.1ml?只(實含病毒量為100BID)，觀察記錄發病情況并于攻毒后72~96h剖檢，觀察法氏囊病變。具體試驗設計方案見表1。

表1　雞IBD亞單位滅活疫苗在SPF雞瓊擴抗體效價與攻毒保護試驗方案

2　結果

3批疫苗以不同劑量肌肉注射21日齡SPF雞，21日后測血清瓊擴效價同時用100BID的強毒BC6/85攻毒，結果顯示不同批次、不同劑量IBD亞單位滅活疫苗免疫的SPF雞，當免疫劑量為0.05ml/只時，部分免疫雞瓊擴抗體效價轉陽，攻毒保護數為5/10~7/10；免疫劑量為0.1ml/只時，少數免疫雞的瓊擴抗體效價為陰性，攻毒保護數為當瓊擴抗體效價為8/10~9/10；免疫劑量為0.2ml/只以上時，免疫雞只瓊擴抗體均為陽性，攻毒保護數均為10/10。將每只雞的瓊擴抗效價與攻毒保護情況進行一一對照，表明瓊擴抗體效價與攻毒保護具有相關性。具體試驗數據見表2。

表2　不同劑量IBD亞單位疫苗免疫SPF雞瓊擴抗體效價與攻毒結果

3　討論

3.1雞只的個體差異

不同批次疫苗相同免疫劑量攻毒保護結果不同可能由于雞只的個體差異。不同批次IBD亞單位滅活疫苗免疫的SPF雞，當免疫劑量為0.05ml/只時，攻毒保護數為5/10~7/10；免疫劑量為0.1ml/只時，攻毒保護數為當瓊擴抗體效價為8/10~ 9/10。不同批次疫苗免疫劑量相同時，保護率存在一定差異，推測可能是由于雞只的個體差異造成的這一結果。

3.2抗體效價與攻毒保護的相關性

采用實驗室制備的3批雞傳染性法氏囊病VP2亞單位疫苗以不同免疫劑量免疫21日齡SPF雞，免疫后21日采血分離血清測定瓊擴抗體效價并用BC6/85株強毒以100BID/只劑量攻毒，攻毒后72~96h剖殺所有試驗雞，觀察法氏囊病變，將每只雞的瓊擴抗體效價與攻毒保護情況一一對應，結果顯示，所有瓊擴抗體轉陽的雞只均能抵抗強毒的攻擊，瓊擴抗體效價與攻毒保護具有一定的相關性，但由于本文所用的疫苗批次及試驗雞數量有限，瓊擴抗體效價轉陽雞只是否一定能獲得攻毒保護尚需大規模的試驗驗證。

參考文獻

[1] (美)B.W.卡爾尼克主編, 高福, 劉文軍主譯. 禽病學第9版[M]. 北京: 中國農業大學出版社, 1991, 554-556.

[2] 周蛟等. 北京地區雞傳染性法氏囊病病原分離[J]. 中國獸醫雜志. 1982, 7: 25-26.

[3] 畢英佐. 廣東地區雞傳染性法氏囊病的研究[J]. 華南農業大學學報, 1985, 1: 46-59.

[4] 李德山, 武志強, 陳冠春. 雞傳染性法氏囊病超強毒株的分離和初步鑒定[J]. 中國畜禽傳染病, 1999, 6: 3-7.

[5] 包曉瑋, 張厚雙, 高宏雷. 雞傳染性法氏囊病超強毒Gx及其致弱毒株基因組B節段的克隆和序列分析[J]. 中國預防獸醫學報, 2005, 27(2): 85-89.

[6] 蔣靜, 孫建和, 陸萍. 傳染性法氏囊病病毒上海超強毒株VP2-4-3基因真核質粒的構建與表達[J]. 華中農業大學學報, 2004, 23(2): 179-182.

[7] 白文彬, 于康震. 動物傳染病診斷學[M]. 北京: 中國農業出版社, 2002: 138-142.

收稿日期：（2015–11–27）

*通訊作者。

基金項目：青島市戰略性新興產業培育計劃項目(項目編號：13-4-1-9-nsh-2)

中圖分類號：S858.31

文獻標識碼：A

文章編號：1007-1733(2016)02-0002-02