甘青報春化學(xué)成分研究

張浩波， 段國建， 陳 暉， 彭曉霞，孫明霞

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，甘肅蘭州 730000)

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甘青報春化學(xué)成分研究

張浩波， 段國建*， 陳 暉， 彭曉霞，孫明霞

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，甘肅蘭州 730000)

[目的]研究報春花屬植物甘青報春的化學(xué)成分。[方法]采用柱層層析、制備薄層層析等分離手段，利用MS、1H NMR、13C NMR等技術(shù)，同時結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和理化數(shù)據(jù)對所分離出的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。[結(jié)果]從甘青報春中分離并鑒定了5個化合物，其分別為2-苯基色原酮、柚皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、異鼠李素、芹菜素。[結(jié)論]該研究所分離的化合物均屬于黃酮類化合物。

甘青報春；化學(xué)成分；分離；理化性質(zhì)；結(jié)構(gòu)鑒定

甘青報春(Primulatangutica)屬于報春花科報春花屬植物，主要產(chǎn)于西藏東部、四川西北部、青海、甘肅南部等地區(qū)，多年生草本植物，為傳統(tǒng)的藏藥。其味微苦、澀，性微寒，無毒，具有安神止痛、退燒、清熱斂瘡、斂痛等功效，常用于治療神經(jīng)痛、關(guān)節(jié)痛、高血壓、燙傷、瘡癤等疾病[1-2]。報春花科植物中主要化學(xué)成分有黃酮類、萜類、甾醇類、有機酸類、醌類等，已有很多學(xué)者對此屬植物進(jìn)行了相關(guān)研究，并分離出相應(yīng)化合物[3-4]。張雅媛[5]通過對報春花科植物過路黃干燥全草進(jìn)行提取，得到金錢草水提物和金錢草醇提物，經(jīng)過篩選，發(fā)現(xiàn)醇提取物具有良好的抗炎、解痙作用。報春花科植物中皂苷類成分抗腫瘤作用的靶點和途徑廣泛，除可直接殺傷和抑制癌細(xì)胞外，在增強機體免疫功能、抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)癌細(xì)胞的再分化等方面具有良好的活性[6]。鑒于對甘青報春的研究相對較少，且該藥的藥理研究鮮見報道。筆者以甘青報春為研究對象，對其全草成分進(jìn)行研究，通過運用現(xiàn)代分離 (柱色譜、HPLC、PTLC等)、分析技術(shù)(1H NMR、13C NMR、HRMS等) 對甘青報春提取物中的化學(xué)組分進(jìn)行了分析鑒定。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材。甘青報春于2014年9月購于甘肅省碌曲縣，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)李成義教授鑒定為甘青報春。

1.1.2 藥劑。二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚 (60～90 ℃)、丙酮和甲醇等均為分析純。顯色劑為5%磷鉬酸-乙醇溶液及碘。

1.1.3 儀器。1H NMR由Bruker Avanced Ⅲ超導(dǎo)核磁共振儀測定，DMSO-d6作溶劑；薄層 (II C) 檢測用ZF-1三用紫外燈 (254和365 nm)。XMTD-8222型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (上海精宏實驗設(shè)備有限公司)；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 (上海亞榮生化儀器廠)；SB-3200DTD型超聲波清洗機 (寧波新芝生物科技股份有限公司)；薄層色譜硅膠預(yù)制板 (煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所)；柱層析硅膠(200～300目)、薄層層析硅膠 (硅膠H，GF 254) 均為青島海洋化工廠出品。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理及制備。干燥的甘青報春全草 (1.5 kg) 研磨后用85%乙醇室溫浸泡3次，每次7 d，浸出液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑得浸膏50 g。浸膏用二氯甲烷 (500 mL) 溶解，過濾并減壓蒸餾除去溶劑得浸膏15 g，然后以硅膠拌樣，揮干溶劑后以200 g硅膠濕法裝柱，用洗脫劑 (石油醚∶乙酸乙酯=5∶1～2∶1，二氯甲烷∶甲醇=50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1) 梯度洗脫，經(jīng)薄層檢測合并極性相近的餾分，得11個極性段 (A～K)。選擇合適的極性段化合物進(jìn)行進(jìn)一步純化，得到5種化合物。

1.2.2 測試。通過1H NMR、13C NMR等技術(shù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.1 化合物1 無色針狀晶體。1H NMR (400 MHz,Chloroform-d)δ:8.23 (dd,J= 7.9,1.7 Hz,2H),7.98～7.89 (m,4H),7.70 (ddd,J= 8.7,7.0,1.7 Hz,2H),7.60～7.47 (m,8H),7.42 (s,1H),7.42 (dd,J= 15.1,1.1 Hz,1H),6.83 (s,2H)。從該化合物的氫譜數(shù)據(jù)可以看到，除在δ6.83 ppm處有一個單吸收峰外，其余吸收峰均在δ8.5～7.0 ppm的低場區(qū)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]較為一致,故鑒定為2-苯基色原酮 (Flavone)。

2.2 化合物2 黃色粉末。1H NMR (CD3OD,400 MHz) δ：7.29 (d,J=8.5 Hz,2H),6.81 (d,J=8.5 Hz,2H),5.87 (s,2H),5.30 (d,J=10.2 Hz,1H),3.10 (d,J=10.2 Hz,1H),2.66 (dd,J=17.1,3.2 Hz,1H)。13C NMR (CD3OD,100 MHz)δ：197.0,168.3,165.5,164.9,159.0,131.0,129.0,116.3,103.3,97.0,96.1,80.4,44.0。從該化合物的核磁氫譜數(shù)據(jù)可以看到，在高場區(qū)(δ 2.66 ppm)只有一個吸收峰，而其他的吸收峰主要集中在苯環(huán)區(qū)，所以初步判斷此化合物屬于黃酮類化合物。結(jié)合核磁碳譜數(shù)據(jù)可知，在化合物中應(yīng)該有一個羰基結(jié)構(gòu)(δ 197.0 ppm)，另外在δ 160 ppm左右有4個吸收峰，可以判斷應(yīng)屬于連有吸電子結(jié)構(gòu)或元素的C ，這也符合黃酮類化合物的化學(xué)位移規(guī)律。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]一致，故鑒定為柚皮素 (Naringenin)。

2.3 化合物3 黃色粉末。1H NMR (CD3COCD3,400 MHz) δ：12.36 (s,1H),8.01 (d,J=2.0 Hz,1H),7.57 (dd,J=8.4,2.0 Hz,1H),6.93 (d,J=8.4 Hz,1H),6.50 (d,J=2.0 Hz,1H),6.27 (d,J=2.0 Hz,1H),5.42 (d,J=7.2 Hz,1H),3.74 (dd,J=11.8,2.3 Hz,1 H),3.57 (dd,J=11.8,5.2 Hz,1H),3.46～3.20 (m,4H)。13C NMR (CD3COCD3,100 MHz) δ：180.1,165.9,163.9,159.8,158.9,149.9,145.8,134.2,123.7,117.1,116.8,105.6,99.2,94.2,78.7,77.9,75.9,70.8,62.9。從該化合物的核磁氫譜數(shù)據(jù)可以看到，在δ 3.8～3.2 ppm有明顯的吸收峰存在，且其峰型具有糖苷吸收峰的特點。結(jié)合核磁碳譜數(shù)據(jù)可知，在δ 180～140 ppm的吸收峰具有典型的黃酮類化合物特征。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本符合，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷 (Quercetin-3-O-β-D-glucosicle)。

2.4 化合物4 黃色粉末。1H NMR (C5D5N,400 MHz) δ：8.31 (d,J=1.9 Hz,1H),8.21 (dd,J=8.4,1.9 Hz,1H),7.38(d,J=8.4Hz,1H),6.87 (d,J=1.9 Hz,1H),6.76 (d,J=1.9 Hz,1H),3.87 (s,3H)。13C NMR (C5D5N,100 MHz) δ：177.4,165.6,162.5,157.5,149.4,148.5,147.5,137.9,123.1,122.8,116.6,112.6,104.5,99.3,94.4,56.0。從該化合物的核磁氫譜數(shù)據(jù)可以看到，在δ 3.87 ppm處有一個明顯的單吸收峰出現(xiàn)，可以判斷此化合物結(jié)構(gòu)中可能含有甲氧基結(jié)構(gòu)。結(jié)合核磁氫譜與碳譜數(shù)據(jù)可以推斷此化合物應(yīng)屬于典型的黃酮類化合物。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]一致，故鑒定為異鼠李素 (Isorhamnetin)。

2.5 化合物5 淺黃色粉末。1H NMR (CD3COCD3,400 MHz) δ：12.95 (s,1H),7.91(d,J=8.8 Hz,2H),6.92 (d,J=8.8 Hz,2H),6.74 (s,1H),6.44 (d,J=1.6 Hz,1H),6.15 (d,J=1.6 Hz,1H)。13C NMR (CD3COCD3,100 MHz) δ：181.73,165.2,163.8,161.9,161.4,157.5,128.7,121.3,116.1,103.5,102.9,99.2,94.3。從該化合物的核磁氫譜數(shù)據(jù)可以看到，除在低場區(qū)有一個吸收峰外，其他吸收峰均集中在苯環(huán)區(qū)，與核磁碳譜數(shù)據(jù)相符合。但從核磁碳譜數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，在較為低場的δ 160 ppm處有5個吸收峰，說明相應(yīng)C原子上應(yīng)該連有吸電子基團(tuán)，再結(jié)合化合物顏色可以初步推斷應(yīng)屬于黃酮類化合物。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致，故鑒定為芹菜素 (Apigenin)。

3 結(jié)論

采用柱層層析、制備薄層層析等分離手段，利用MS、1H NMR、13C NMR等技術(shù)，結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)和理化數(shù)據(jù)對所分離出的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，研究報春花屬植物甘青報春的化學(xué)成分。結(jié)果表明，從甘青報春中共分離并鑒定了5個化合物，分別為2-苯基色原酮、柚皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、異鼠李素、芹菜素，這些化合物均屬于黃酮類化合物。

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The Study of Chemical Constituents onPrimulatangutica

ZHANG Hao-bo,DUAN Guo-jian*,CHEN Hui et al

(College of Pharmacy,Gansu University of Chinese Medicine,Lanzhou,Gansu 730000)

[Objective]To study the chemical constituents ofPrimulatangutica.[Method]The techniques of separation contain column chromatography(CC),preparative thin layer chromatography (PTLC) and so on.Through the results of H-Nuclear Magnetic Resonance (1H NMR),C-Nuclear Magnetic Resonance (13C NMR),High Resolution Mass Spectrum (HRMS),and combined with literature data,physicochemical data,the structures of the separated compounds were identified.[Result]Five flavonoids were obtained and elucidated as：flavone,naringenin,quercetin-3-O-β-D-glucosicle,isorhamnetin,apigenin.[Conclusion] All above compounds belong to flavonoids.

Primulatangutica;Chemical constituent; Separation; Physicochemical property; Structure identification

甘肅省高等學(xué)校科研項目(2013A-084)；甘肅中醫(yī)藥大學(xué)引進(jìn)人才基金項目(BH2012-089)。

張浩波(1977- )，男，甘肅隴南人，副教授，博士，從事摩擦學(xué)及天然藥物化學(xué)研究。*通訊作者，副教授，博士，從事天然藥物分子的分離分析及全合成研究。

2016-10-12

S 567.23+9

A

0517-6611(2016)36-0154-02