烏海市3 918例女性HPV基因分型結(jié)果的分析

武燕紅　呂偉　鄭海燕　王珍　裴劉成

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烏海市3 918例女性HPV基因分型結(jié)果的分析

武燕紅呂偉鄭海燕王珍裴劉成★

［摘要］目的探討內(nèi)蒙古烏海地區(qū)婦女人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染情況及各亞型的分布。方法回顧分析2008年10月至2015年5月在我院婦科就診的女性患者3 918例，采用PCR＋導(dǎo)流雜交法對其宮頸脫落細(xì)胞進行21種HPV基因型檢測的結(jié)果。結(jié)果3 918例樣本中陽性1 957例，感染率為49．95%，21種亞型均有檢出。HPV16（12．81%）、HPV52（8．65%）、HPV58 （8．58%）、HPV53（5．36%）及CP8304（4．59%）感染率較高，感染年齡主要分布在21歲～49歲，各年齡組間HPV感染率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）。結(jié)論烏海地區(qū)婦女HPV感染亞型以HPV16、HPV52、HPV58、HPV53、CP8304為主。HPV感染率與年齡有關(guān)。

［關(guān)鍵詞］人乳頭狀瘤病毒；基因分型；宮頸病變

作者單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)烏海市婦幼保健院檢驗科，內(nèi)蒙古，烏海市016000

人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一種嗜上皮性的雙股環(huán)形無包膜DNA病毒，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)超過200多種，其中超過35種能夠感染人類生殖系統(tǒng)［1］。HPV感染被證實是宮頸癌發(fā)生的必要原因［2］，其檢測已成為篩查和預(yù)防宮頸癌的關(guān)鍵問題之一。HPV的感染具有很強的地域性，世界范圍內(nèi)不同國家或地區(qū)HPV的感染率及型別分布均存在差異［3］。本文對3 918例就診者的宮頸脫落細(xì)胞進行核酸分子快速導(dǎo)流雜交分型檢測，以了解烏海地區(qū)婦女宮頸HPV的感染情況及其常見亞型。

1　資料與方法

1．1資料

1．1．1病例來源

2008年10月至2015年5月于本院婦科就診的女性患者3 918例，年齡16歲～80歲（37．75± 9．8）歲，98．95%（3877／3918）為漢族，居住于烏海市及周邊。所有患者均為初次進行HPV檢測，檢測前未經(jīng)宮頸或陰道治療，剔除二次復(fù)查及術(shù)后或?qū)m頸治療后檢測數(shù)據(jù)。

1．1．2儀器與試劑

人乳頭狀瘤病毒（HPV）分型檢測試劑盒（PCR＋膜雜交法）及醫(yī)用核酸分子快速雜交儀均來源于潮州凱普生物化學(xué)有限公司，PCR儀為博日LITTLE GENIUS基因擴增儀。

1．2實驗方法

振蕩混勻樣本管，取保存有宮頸細(xì)胞的細(xì)胞保存液0．5 mL，以14 000 rpm離心1 min，棄上清后，利用凱普的細(xì)胞裂解液嚴(yán)格按照說明書操作步驟提取DNA。

1．2．2PCR擴增HPV DNA

按照凱普說明書比例要求將PCR Mix、Taq酶和DNA模板混勻，低速離心數(shù)秒后，按下述反應(yīng)條件進行PCR擴增：95℃9 min；95℃20 s，55℃30 s，72℃30 s，共40個循環(huán)；72℃5 min；最后4℃保存。

1．2．3導(dǎo)流雜交及結(jié)果判讀

均按試劑盒要求進行，可檢測出15種高危亞型（HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68）、6種低危亞型（HPV6、HPV11、HPV41、HPV42、HPV44、CP8304）。

1．3統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17．0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗，以α＝0．05為檢驗水準(zhǔn)。

2　結(jié)果

2．1HPV感染各亞型分布情況

在大數(shù)據(jù)時代, 誰掌握了數(shù)據(jù)，誰就站到了大數(shù)據(jù)研究的戰(zhàn)略制高點，因此，對數(shù)據(jù)資源的爭奪是大數(shù)據(jù)研究的必然階段。然而，擁有數(shù)據(jù)這一重要的戰(zhàn)略資源是不夠的,保證使用者拿到大數(shù)據(jù)資源，并能夠?qū)ζ溥M行有效的分析研究、挖掘使用，才能充分發(fā)揮其戰(zhàn)略資源的作用。因此，數(shù)據(jù)資源的整合、開放、共享是實施好大數(shù)據(jù)發(fā)展戰(zhàn)略中極為重要的一個環(huán)節(jié)。這些也同樣面臨著來自技術(shù)、基礎(chǔ)設(shè)施、政策和法律、數(shù)據(jù)人才等各方面的挑戰(zhàn)。

每批實驗均加陰性及陽性對照，陰性對照結(jié)果的2個紫藍(lán)色點為質(zhì)控對照點，詳見圖1。陽性對照為HPV18型，結(jié)果見圖2。在3 918例樣本中，21種基因亞型均有檢出，HPV16是感染率最高的亞型（12．81%，502／3918），其次為HPV52 （8．65%，339／3918）、HPV58（8．58%，336／3918）、HPV53（5．36%，210／3918）、CP8304（4．59%，180／3918）。具體結(jié)果見表1。

表1　HPV感染各亞型的排序分布情況Table 1　Sorting in the subtypes and the distribution of HPV infection

2．2HPV單一及多重感染情況

3918例樣本中，HPV感染共1957例，感染率為49．95%（1957／3918）。755例檢出2個或2個以上亞型，多重感染率為19．27%（755／3918），結(jié)果見表2。多重感染中2重感染（472例）較多，感染最多型別的是9重感染，共3例，實例一見圖3。5種最常見的多重感染模式為HPV16和HPV52（61例），HPV16和HPV58（54例），HPV52和HPV53（43例），HPV16和CP8304（42例），HPV58和HPV52（42例）。

2．3HPV感染與年齡的關(guān)系

3918例受檢者分為5個年齡組。經(jīng)χ2檢驗，各年齡組HPV感染率比較，χ2＝38．131，自由度為4，P＝0．000；各年齡組高危型感染率比較，χ2＝11．784，自由度為4，P＝0．019；各年齡組高危型占陽性比率比較，χ2＝20．435，自由度為4，P＝0．000；各年齡組多重HPV感染率比較，χ2＝64．071，自由度為4，P＝0．000；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。30歲～39歲、40歲～49歲、≥50歲3組間多重HPV感染率比較，χ2＝3．442，自由度為2，P＝0．179，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。具體結(jié)果見表3。

表2　3 918例標(biāo)本中HPV DNA單一感染及多重感染情況Table 2　Samples of HPV DNA single infection status andmultipe infection status in 3 918 cases

表3　各年齡組HPV感染情況Table 3　HPV infection status among all age groups

3　討論

2012年，子宮頸癌居全球女性最常見惡性腫瘤第4位，新發(fā)病例為528 000例［4］。目前已公認(rèn)，宮頸高危型HPV持續(xù)感染99%以上是宮頸癌發(fā)生的必要條件［5－6］。國外研究［7］得出結(jié)論，基于HPV的篩查方法預(yù)防浸潤性宮頸癌的效果相當(dāng)于在細(xì)胞學(xué)檢查方法的基礎(chǔ)上提高60%～70%。因此HPV檢測是宮頸癌篩查的有效方法之一，可以達(dá)到早發(fā)現(xiàn)，早治療的目的。降低宮頸癌的發(fā)生率最好做到防治并舉，預(yù)防首先要了解各地區(qū)的感染狀況及型別分布特點。有文獻(xiàn)報道，HPV16亞型是目前世界范圍內(nèi)共同的最常見的基因型，在宮頸癌中的陽性率可高達(dá)51．00%～81．25%［8］，HPV52和HPV58是亞洲特有的2個基因亞型，在中國、日本等亞洲國家有較高的檢出，而在世界其他地區(qū)很少或者沒有檢出［2］。之前的研究表明，HPV16是中國大部分地區(qū)尤其是北方地區(qū)的主導(dǎo)亞型，HPV52和HPV58排在第2位或第3位［9－11］。有些南方地區(qū)，尤其是東南地區(qū)如湖北、上海、江蘇、江西、湖南、海南以及廣東一些地區(qū)人群中HPV感染以HPV52、HPV16 和HPV58型為主，HPV52排在第一位［12－14］。內(nèi)蒙古中西部地區(qū)HPV感染排在前3位的是HPV16、HPV58和HPV52型［15］。本研究中烏海市HPV感染HPV16共檢出502例，檢出率為12．8%，排第一位，是本地區(qū)的主導(dǎo)亞型。HPV52檢出率達(dá)8．65%，排第2位。目前HPV58檢出率為8．58%，排第3位，與HPV52相差僅3例，HPV58型常超越HPV52型排在第2位。烏海市地處中國內(nèi)蒙古西部，此結(jié)果符合HPV感染的地域特征。在本研究中HPV18檢出率為3．32%，相對較低，排在第9位；眾多研究［16－17］顯示HPV18型感染率低，但致瘤性高，所以也不容忽視。由于烏海市的優(yōu)勢型別除了HPV16外，HPV52和HPV58型也具有顯著優(yōu)勢，因此烏海地區(qū)的宮頸癌防治除了重視HPV16、HPV18型之外，還要重視HPV52及HPV58型的防治，烏海市地區(qū)婦女HPV感染的型別與宮頸病變的關(guān)系將在下一步研究。

HPV在我國婦女宮頸病變中平均感染率為46．51%（5 632／12 110），其中北方地區(qū)HPV平均感染率高于南方（55．67%和42．06%，P＜0．01）［18］。本研究對烏海地區(qū)女性進行HPV檢測，陽性檢出率為49．95%，較接近我國婦女宮頸病變平均感染率，高于內(nèi)蒙鄂爾多斯杭錦旗（蒙古族人口占50%以上）的23．89%［19］。并且高于2011年對內(nèi)蒙古中西部地區(qū)HPV感染的調(diào)查研究結(jié)果——HPV感染總陽性率23．3%（975／4 188）［15］。烏海市屬于內(nèi)蒙西部經(jīng)濟不發(fā)達(dá)地區(qū)，本地區(qū)婦女的衛(wèi)生及自我保健意識相對較差。受經(jīng)濟條件限制，很大一部分人在細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果異常時才愿意接受HPV的檢測，這是本地區(qū)HPV檢出率較同省其它地區(qū)高的原因之一。細(xì)胞學(xué)檢查作為篩查手段已經(jīng)使子宮頸癌的發(fā)病率大幅下降，而HPV亞型測定作為一個細(xì)胞學(xué)檢查附屬的篩查方法使宮頸病變的早期篩查更敏感更有效率［2］。加強本地區(qū)的健康教育，使人們對HPV感染與預(yù)防有一定的認(rèn)識，是相對有效的措施。地區(qū)感染率的差異也可能與檢測人群有關(guān)，今后隨著篩查的普及，這種影響也會排除。

宮頸高危型HPV感染的相關(guān)因素包括初次性生活的年齡、性伴侶數(shù)、吸煙、長期口服避孕藥、免疫缺陷與抑制等，年齡是影響宮頸高危型HPV感染最重要的因素之一［20］。本調(diào)查結(jié)果顯示＜20歲、20歲～29歲、30歲～39歲、40歲～49歲、≥50歲5個年齡組HPV的感染率分別為79．31%、56．83%、48．83%、47．56%、43．34%，經(jīng)χ2檢驗，P＜0．001；高危型HPV感染率分別為64．00%、47．72%、43．58%、43．39%、40．10%，經(jīng)χ2檢驗，P＜0．05。說明HPV的感染率與年齡有關(guān)，本研究顯示隨著年齡的增長有下降的趨勢，可能與性生活頻率有關(guān)。各年齡組高危HPV占陽性比，經(jīng)χ2檢驗，P＜0．001，顯示隨著年齡的增長HPV感染有增長的趨勢，可能隨著年齡的增長，免疫力下降，導(dǎo)致更易感染高危型HPV，這樣得宮頸癌的風(fēng)險就相對較高。很多研究結(jié)果顯示＜20歲年齡組HPV陽性率較其它年齡組高，于莉和張劉東［21］認(rèn)為可能是由于青春期其免疫系統(tǒng)還未被致敏，導(dǎo)致初次性生活時極易感染。張詠梅［22］認(rèn)為年輕女性宮頸不成熟，感染HPV的機會多。本研究中＜20歲年齡組HPV感染率最高，但檢測人數(shù)較少，只有29人。20歲以下有性生活史的女性占少數(shù)，來醫(yī)院做常規(guī)檢查的更少，臨床癥狀嚴(yán)重時才來醫(yī)院就診，這也可能是其感染率高的一個原因。本研究HPV感染年齡主要集中在20歲～49歲年齡段，HPV感染數(shù)占總感染數(shù)的89．52%（1 752／1 957）。≥50歲年齡組感染率最低，但是高危型占陽性比最高，此年齡段的檢查也是不容忽視的。

除了年齡外多重感染也是與子宮頸癌和HPV感染相關(guān)的危險因素［2］。多重感染在我們的研究中占所有HPV感染的19．27%（755／3 918），高于以前對內(nèi)蒙古自治區(qū)調(diào)查的多重感染率6．2%［15］，低于中國整體的多重感染率28．98%［23］。本研究中多重感染率29歲以下2個年齡段較其它年齡段高（P＜0．05），感染最多型別的是9重感染，共3例，為多性伴或伴侶多性伴者，其中一例58歲，另外2例和7重感染1例、8重感染2例均在20歲～29年齡段。多重感染型別多者可能與性伴的數(shù)量及性生活的頻率有關(guān)。很多關(guān)于多重感染與宮頸癌的關(guān)系的研究結(jié)果不一致，我們將繼續(xù)積累這一方面的數(shù)據(jù)，進行進一步的研究。

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?論著?

Analysis of HPV genotypes in 3 918 female patients in Wuhai city

WU Yanghong, LV Wei, ZHENG Haiyan, WANG Zhen, PEI Liucheng★
(Department of Laboratory Medicine, Wuhai Maternity and Child Health Care Hospital, Wuhai, Inner Mongolia, China, 016000)

[ABSTRACT]Objective To study the epidemiology of human papilloma virus (HPV) infection and the distribution of its different subtypes among women in wuhai, Inner Mongolia. Methods 3 918 cases of female patients who visited our gynecologic clinic between October, 2008 and May, 2015 were retrospectively analyzed. PCR and flow-through hybridization were used to test for the 21 genotypes of HPV in the cervical exfoliated cells from the patients. Results Of 3 918 cases, 1 957 were positive for HPV, with the infection rate of 49.95%. All the 21 genotypes were detected, with higher detection rates seen in certain genotypes than others, such as, HPV16 (12.81%), HPV52 (8.65%), HPV58 (8.58%), HPV53 (5.36%) and CP8304 (4.59%). The highest risk for the infection fell in the age group between 21 and 49 years, and the differences in the infection rates among all age groups were statistically significant (P<0.05). ConclusionHPV16, HPV52, HPV58, HPV53, and CP8304 were the main genotypes of HPV infecting women in Wuhai area. The infection rate correlates with age.

[KEY WORDS]Human papilloma virus; Gene subtypes; Cervical pathological changes

通訊作者：★裴劉成，E-mail：39947629＠qq．com