HPLC法測(cè)定卡非佐米的含量

張志芳（重慶泰濠制藥公司，重慶400039）

HPLC法測(cè)定卡非佐米的含量

張志芳（重慶泰濠制藥公司，重慶400039）

目的：建立原料藥卡非佐米有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定的HPLC法。方法：用Agilent的Extend～C18反相色譜柱（4.6mm× 250mm，5μm），以乙腈～0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH=6.0）（65：35）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，柱溫30℃。結(jié)果卡非佐米在0.14～1.2μg/mL呈良好的線性關(guān)系（r=0.99948），重復(fù)性RSD為0.83%（n=7），卡非佐米的平均回收率為99.9%，RSD為0.22%（n=9）。結(jié)論方法快速、簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于卡非佐米的含量測(cè)定。

卡非佐米；高效液相色譜法；含量

卡非佐米，是一種蛋白酶體抑制劑，適用為治療多發(fā)性骨髓瘤患者。用于治療預(yù)先接受過至少2種藥物治療，并有證據(jù)顯示在完成末次治療后60天內(nèi)疾病惡化的難治性多發(fā)性骨髓瘤。本文采用高效液相色譜法測(cè)定卡非佐米的含量，該方法簡(jiǎn)單、快捷、重復(fù)性較好。

1　儀器與試藥

Agilent1260型高效液相色譜儀及其色譜工作站，紫外檢測(cè)器檢測(cè)（VWD）。卡非佐米工作對(duì)照品（重慶泰濠制藥），卡非佐米樣品（重慶泰濠制藥：CAR～1412001、CAR～1412002、CAR～1412003），乙腈（色譜純），磷酸氫二鉀（分析純），純化水。

2.方法與結(jié)果

2.1色譜條件

Agilent的Extend～C18反相色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈～0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH=6.0）（65：35）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，柱溫30℃。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的配制：精密稱取卡非佐米工作對(duì)照品25mg，置25ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度。

2.2.2供試品溶液的配制：精密稱取卡非佐米供試品25mg，置25ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取上述對(duì)照品溶液進(jìn)樣，卡非佐米的出峰時(shí)間在36min左右，理論板數(shù)在5000以上，拖尾因子為1.02，卡非佐米與相鄰雜質(zhì)色譜峰的分離度大于1.5；對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，卡非佐米峰面積的RSD為0.24%，符合中國(guó)藥典的要求。

2.4線性范圍

精密稱取卡非佐米對(duì)照品25 mg，置25mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為卡非佐米對(duì)照儲(chǔ)備液。精密量取上述儲(chǔ)備液配制卡非佐米工作對(duì)照品系列溶液，濃度分別為1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.14μg/mL。精密量取對(duì)照品系列溶液10μL，進(jìn)樣測(cè)定，以濃度X對(duì)峰面積（y）線性回歸，得到卡非佐米標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=21.416X+0.037（r=0.99948）。這表明卡非佐米在0.14～1.2μg/mL峰面積和濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取卡非佐米（批號(hào)為CAR～1412003）25mg（7份），置25mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果RSD為0.83%（n7）。

2.6準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已經(jīng)確定含量的卡非佐米工作對(duì)照品，測(cè)定卡非佐米工作對(duì)照品在濃度為0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml時(shí)，對(duì)照品中的卡非佐米含量，每份濃度配制三份樣品，計(jì)算含量測(cè)定的準(zhǔn)確度和回收率。九份樣品測(cè)定得回收率平均值為99.8%，含量的RSD為0.22%。

3　討論

3.1本色譜方法中，用前充分平衡色譜柱以及柱溫的選擇是有效分離的關(guān)鍵。Extend～C18反相色譜柱使用前需用流動(dòng)相（水：乙腈=80：20）沖洗，使用后同樣用該流動(dòng)相沖洗色譜柱，否則會(huì)出現(xiàn)色譜系統(tǒng)壓力過高，卡非佐米與雜質(zhì)不能完全分離。

3.2本研究中，對(duì)比了不同濃度的磷酸鹽緩沖液和不同pH值的磷酸鹽緩沖液，結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液調(diào)節(jié)pH為6.0時(shí)，對(duì)卡非佐米和雜質(zhì)的出峰情況效果最好。通過對(duì)卡非佐米溶液進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)卡非佐米的最大吸收波長(zhǎng)為210nm，因此色譜方法中的波長(zhǎng)定為210nm。

4　結(jié)語

本文建立了優(yōu)化的卡非佐米含量測(cè)定的HPLC法，并對(duì)該方法進(jìn)行了完整的方法學(xué)驗(yàn)證。通過以上試驗(yàn)結(jié)果表明，所建方法系統(tǒng)適用性、線性范圍、準(zhǔn)確度和重復(fù)性均符合要求，能夠準(zhǔn)確地對(duì)卡非佐米進(jìn)行含量測(cè)定的分析，可為卡非佐米質(zhì)量控制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供可靠手段。

［1］霍秀穎，封宇飛.蛋白酶體抑制劑卡非佐米的藥理作用與臨床評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)新藥雜志，2013（13）.

［2］陳小燕，張建中，倪海華，胡征，鄒愛峰.卡非佐米的藥理學(xué)及臨床研究進(jìn)展［J］.中國(guó)抗生素雜志，2015，（09）.