冀北山區野生紅柴胡組織培養與快速繁殖研究

李冬杰

（河北科技大學生物科學與工程學院，河北 石家莊 050018）

冀北山區野生紅柴胡組織培養與快速繁殖研究

李冬杰

（河北科技大學生物科學與工程學院，河北 石家莊 050018）

以冀北山區野生藥用植物紅柴胡的腋芽為外植體，以MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.5mg/L為誘導培養基，以MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L為增殖培養基，以1/2MS+IBA 0.5mg/L為生根培養基，采用漸進法煉苗，注重適時移栽，成活率達到90%以上，且苗齊苗壯。

紅柴胡；腋芽；組織培養

紅柴胡（B.scorzonerifolium Willd.）是為傘形科柴胡屬多年生草本植物，為我國的傳統中藥，以根入藥，主治感冒、發熱、寒熱等癥狀[1]。藥理實驗表明，柴胡皂苷具有鎮靜、鎮痛、鎮咳、抗炎、保肝、抗腫瘤等多種功效[2]。紅柴胡主要分布在壩上高原，海拔1200m以上，光照充足，品質上佳，是冀北山區野生珍稀藥用植物[3]。由于過度采挖，野生資源逐漸枯竭，在冀北山區僅零星分布，數量稀少。本文所建立的紅柴胡組織培養和快速繁殖技術，對其資源保護及合理開發利用具有一定的指導意義。

1 材料

試驗材料為野生紅柴胡帶腑芽莖段，采自河北省壩上地區。

2 方法

以MS為基本培養基。（1）誘導培養基：MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.5mg/L。（2）增殖培養基：MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L。（3）生根培養基：1/2MS+ IBA 0.5mg/L。以上培養基中均加入3%的蔗糖和0.8%瓊脂，pH5.8，培養溫度為（24依2）℃，光照時間12h/d，光照強40μmol/m2·s左右。

2.1 芽的誘導

將腋芽莖用流水沖洗，在超凈臺里用75%酒精浸泡30s，無菌水漂洗2次，每次1～2min；再用升汞水溶液消毒8～10min，無菌水漂洗3次，每次1～ 2min。切成0.5cm的帶芽莖段，接種到培養基（1）中進行芽誘導。5d后芽體開始萌動，經過20d芽可長出新葉。

2.2 增殖培養

將誘導培養獲得的無菌芽轉接至叢生芽增殖培養基（2）中培養，進行繼代增殖。經過短暫的停滯期，3d后即能觀察到新芽開始繼續生長，莖段基部伴有少量愈傷組織生成，10d后開始從腋芽處分化出叢生芽，30d后叢生芽長到3～4cm，增殖系數可達3～5。

2.3 生根培養

將生長健壯的單苗接種到生根培養基中誘導生根，7d后可見葉片明顯增大，開始有根形成，15d不定根長達2～3cm。20d每苗生根數5～6條，生根率91%。

2.4 煉苗與移栽

待根長到2～3cm時，將其從培養室中移到溫度較低、自然光照的室內4～5d后，開瓶練苗2～3d再移栽。栽植前將培養土滅菌，苗栽后澆透水。初期加蓋塑料薄膜保濕保溫，濕度保持在80%，溫度控制在（18依2）℃，每日自然光照10h。7d后揭去薄膜，移栽14d后統計，成活率90%以上。成苗后移栽至苗圃。

3 討論

目前，有關柴胡的組織培養研究盡管已有報道，但仍有不少問題需深入研究[4]。本文對以下幾個方面進行了改進，首先在外植體的選擇上，盡管柴胡的外植體選擇較廣泛，包括葉片、葉柄、莖段、腋芽都可以進行快繁[5]，但選用分化能力最強的外植體對組培的成功很關鍵。本實驗直接采用帶芽莖段，其芽的誘導啟動快、芽增殖效果也好。另外，在外植體的選擇問題上，還注重了采用同一基因型的植株作為外植體。

在柴胡快繁的激素配比方面，多數采用的是細胞分裂素6-BA、KT，與生長素NAA、2，4-D和IAA的配比[6-7]。本實驗采用了6-BA與IBA的組合，結果顯示其對芽的誘導、芽增殖效果均佳。

在柴胡適時移栽研究方面，有報道成活率在95%以上，移栽2～3周后，可長出葉片[7]。本實驗采用了漸進法，即閉瓶煉苗逐漸到開瓶煉苗，此時恰好根長到2～3cm時，苗高2～3cm時，移栽時機最適，成活率能達到90%以上，且苗齊苗壯，整體提高了組培的效率。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京：中醫藥科技出版社，2010：263-264.

［2］呂曉慧，孫宗喜，蘇瑞強，等.柴胡及其活性成分藥理研究進展［J］.中國中醫藥信息雜志，2012，19（12）：105-107.

［3］王玉慶，牛顏冰，秦雪梅.野生柴胡資源調查［J］.山西農業大學學報（自然科學版），2007，27（1）：103-107.

［4］胡海英，吳曉玲.銀柴胡離體培養與毛狀根誘導技術初步研究［J］.生物技術進展，2015，5（6）：436-437.

［5］徐潔森，趙立子，魏建和.北柴胡花藥愈傷組織高效再生體系的建立［J］.中國中藥雜志，2013，38（21）：3661-3665.

［6］郝建平，徐麗霞，楊東方.北柴胡愈傷組織誘導、分化及不定芽增殖條件研究［J］.中草藥，2008，39（8）：1234-1238.

［7］姚智，高文遠，李克峰.柴胡愈傷組織生長和不定根誘導的研究［J］.中草藥，2007，38（2）：275-278.

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of B.scorzonerifolium Willd.in Mountainous Area of Northern Hebei Province

LI Dong-jie
（Department of Biological Science and Engineering,Hebei University of Science and Technology,Shijiazhuang，Hebei 050018）

To establish the tissue culture and rapid propagation system of the wild medicinal plant B.scorzonerifolium Willd.in the mountain area of northern Hebei,the axillary buds were used as the explants,and the suitable medium for induction, propagation and rooting was selected.The results showed that the seedlings survival rate was more than 90%,and the seedlings were vigorous through asymptotic method training and transplanting in suitable time when the inducing,proliferation and rooting culture medium was MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L，MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L and 1/2MS+IBA0.5 mg/L respectively.

B.scorzonerifolium Willd；Tuber with buds；Tissue culture

S567.79

A

1002-3356（2016）04-0034-02

2016-06-22

資助：河北省科技支撐計劃（14237503D）

李冬杰（1966-），碩士，教授，主要從事生物技術方面的教學與科研工作。E-mail：ldj618@I63.com。