趨化因子CCL17、CCR4、CXCL12在先兆流產(chǎn)中的表達(dá)

李 萍，何國英，王鳳蓮，劉洪珍

（泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 泰安 271000）

趨化因子CCL17、CCR4、CXCL12在先兆流產(chǎn)中的表達(dá)

李 萍，何國英，王鳳蓮，劉洪珍

（泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 泰安 271000）

目的研究先兆流產(chǎn)者絨毛和蛻膜組織中人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子17(CCL17)、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(CXCL12)與CC趨化因子受體4(CCR4)的表達(dá)，探討先兆流產(chǎn)發(fā)生的相關(guān)免疫學(xué)機(jī)制。方法應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法檢測早期妊娠先兆流產(chǎn)和正常早期妊娠行負(fù)壓吸引清宮術(shù)者各30例的絨毛和蛻膜組織中CCL17、CCR4、CXCL12-mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果先兆流產(chǎn)組絨毛、蛻膜組織CCL17-mRNA的表達(dá)量為較對照組顯著升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；CXCL12-mRNA的表達(dá)量較對照組顯著降低(P＜0.05)；CCR4-mRNA的表達(dá)量為較對照組顯著升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論CCL17、CCR4、CXCL12可能參與在早期流產(chǎn)的發(fā)生，并在此過程中發(fā)揮了重要作用。

人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子；CC趨化因子受體4；基質(zhì)細(xì)胞衍生因子；流產(chǎn)

早期妊娠流產(chǎn)的病因眾多，大部分患者首先表現(xiàn)為先兆流產(chǎn)，大多數(shù)先兆流產(chǎn)患者首先表現(xiàn)為少量陰道流血或者出現(xiàn)超聲提示的宮腔內(nèi)液性暗區(qū)，這兩種情況的出現(xiàn)一般是由于絨毛與蛻膜剝離、出血而造成的。該研究旨在探討趨化因子CCL17、CCR4、CXCL12與早期妊娠先兆流產(chǎn)發(fā)生的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1～6月在泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院自愿要求終止妊娠的早期妊娠60例，年齡20～35歲，無稽留流產(chǎn)、胚胎發(fā)育不良、死胎、死產(chǎn)等不良孕產(chǎn)史，終止妊娠前半年內(nèi)未使用過甾體激素類藥物，流產(chǎn)孕周均在6～9周，其中 30例術(shù)前有少量陰道流血，無妊娠物排出，婦科檢查無宮頸口擴(kuò)張或妊娠物排出，B 超示孕囊周圍可見液性暗區(qū)或提示“先兆流產(chǎn)”，后行負(fù)壓吸引清宮術(shù)者為先兆流產(chǎn)組；B 超提示無任何異常行負(fù)壓吸引清宮術(shù)的正常早期妊娠婦女為對照組。所有對象婦科檢查均排除陰道炎癥、急慢性宮頸炎等其他炎性病變，簽署知情同意書后納入本研究。兩組研究對象的基本情況比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

（1）于負(fù)壓吸引清宮術(shù)中無菌條件下選取新鮮絨毛、蛻膜組織約0.3g，立刻用焦碳酸二乙酯水沖洗，然后投入液氮保存。（2）提取總RNA。（3）按RTPCR試劑盒說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Roche公司）完成定量檢測；β-肌動蛋白由天津六合通生物技術(shù)有限公司合成，并作為內(nèi)參；應(yīng)用Gene runner軟件系統(tǒng)設(shè)計(jì)特異性引物和探針。引物序列如下: CXCL12: FW:AGATGCCCATGCCGATTCTTC RV:G C A C A C T T G T C T G T T G T T G T T C T T C; C C L 1 7: F W: G G G A G T G C T G C C T G G A G TA C R V: T A C A A A A A C G A T G G C A T C C C T；CCR4:FW: GCCTCCAAGACAGACTTCCTTG RV: GCGTTCGGTTCTAGTTTCCAC。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，所得計(jì)量數(shù)據(jù)以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組研究對象絨毛、蛻膜組織CXCL12–mRNA表達(dá)量的比較

先兆流產(chǎn)組絨毛組織中CXCL12–mRNA表達(dá)量均顯著低于對照組，先兆流產(chǎn)組蛻膜組織中CXCL12–mRNA表達(dá)量亦顯著低于對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。詳見表1。

表1 兩組絨毛、蛻膜CXCL12–mRNA表達(dá)量比較（x+s）

2.2 兩組研究對象絨毛、蛻膜組織CCL17–mRNA表達(dá)量的比較

先兆流產(chǎn)組絨毛組織中CCL17–mRNA表達(dá)量顯著高于對照組，先兆流產(chǎn)組蛻膜組織中CCL17–mRNA表達(dá)量亦顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。詳見表2。

表2 兩組絨毛、蛻膜CCL17–mRNA表達(dá)量比較（x+s）

2.3 兩組研究對象絨毛、蛻膜CCR4–mRNA表達(dá)量的比較

先兆流產(chǎn)組絨毛組織中CCR4–mRNA表達(dá)量顯著高于對照組，先兆流產(chǎn)組蛻膜組織中CCR4–mRNA表達(dá)量亦顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。

3 討 論

研究表明[1]母胎界面免疫耐受異常是流產(chǎn)發(fā)生原因之一，免疫耐受平衡遭到破壞可以導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，趨化因子CCL17、CXCL12、CCR4-mRNA在人早期妊娠絨毛和蛻膜組織中均有的表達(dá)。CXCL12主要在滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、分化和侵蝕中發(fā)揮作用，并且可以趨化滋養(yǎng)細(xì)胞定向移動到蛻膜間質(zhì)及血管，從而在囊胚的植入過程中發(fā)揮協(xié)助作用[2]；同時(shí)CXCL12還參與了蛻膜中CD16-CD56+NK細(xì)胞亞群的募集和遷移，而該細(xì)胞亞群對胚胎可以起到免疫耐受和營養(yǎng)作用。CCL17是Th2 細(xì)胞的特異性趨化因子，可以通過募集更多的CD4+CD25+Treg 到母胎界面，從而限制效應(yīng)性T細(xì)胞或清除抗原特異性T 細(xì)胞使母胎免疫耐受成功發(fā)揮作用而維持正常妊娠[3]。CD4+CD25+T 細(xì)胞可大量表達(dá)CCR4，CCR4作為CCL17的高親和力受體，通過與CCL17 結(jié)合來完成趨化作用，二者結(jié)合后引起分子構(gòu)象的改變，導(dǎo)致胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度增高及蛋白激酶C活化，引起靶細(xì)胞效應(yīng)，參與免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)分化，在滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入、蛻膜化反應(yīng)和血管重鑄等關(guān)鍵環(huán)節(jié)促成了局部免疫耐受狀態(tài)的建立和維持。

本研究結(jié)果表明先兆流產(chǎn)患者中CCL17、CXCL12、 CCR4的調(diào)節(jié)異常可能影響了母胎界面淋巴細(xì)胞表型，數(shù)量及功能，尤其使得巨噬細(xì)胞數(shù)量和免疫活性及功能發(fā)生異常，Th1/Th2平衡失調(diào)，NK細(xì)胞的功能異常，使得具有免疫排斥功能的CD16+CD56+NK細(xì)胞占優(yōu)勢，從而不利于維持正常妊娠的母胎界面免疫微環(huán)境出現(xiàn)，利于正常妊娠維持的免疫耐受環(huán)境遭到破壞，誘發(fā)了母體對囊胚的排斥反應(yīng)，導(dǎo)致先兆流產(chǎn)的發(fā)生。

總之，CCL17、CXCL12、CCR4是對正常妊娠維持非常重要的細(xì)胞因子，本研究發(fā)現(xiàn)CCL17、CXCL12、CCR4在先兆流產(chǎn)中的異常表達(dá)，可能參與了先兆流產(chǎn)的發(fā)生，但在流產(chǎn)發(fā)生中的具體作用機(jī)制我們尚不清楚，有待于進(jìn)一步研究來驗(yàn)證。

[1] Orie N. Children immunology, what can we learn from animals studies: decidual cells induce specific immune system of fetomaternal interface. J Toxicol Sci, 2009, 34(2):SP331-9.

[2] 顧 艷,張慧琴.趨化因子及其受體與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(J).生殖與避孕,2014,7(7):548-554.

[3] 劉玉昆,劉梅蘭,王蘊(yùn)慧,等.母胎界面樹突狀細(xì)胞CCL17和CCL22表達(dá)在母胎免疫耐受中的作用[J].中國病理生理雜志,2012,28(6):1061-1065．

R714.21

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ISSN.2095-8803.2016.12.017.02