Weel蛋白在鼻咽癌組織中的表達及其與臨床預后的關系

霍占江，李偉，高飛

(1.張家口市第一醫院耳鼻咽喉頭頸外科，河北 張家口 075061；2.中國人民解放軍251醫院病理科，河北 張家口 075000；3.中國人民解放軍251醫院重癥醫學科，河北 張家口 075000)

Weel蛋白在鼻咽癌組織中的表達及其與臨床預后的關系

霍占江1，李偉2，高飛3

(1.張家口市第一醫院耳鼻咽喉頭頸外科，河北 張家口 075061；2.中國人民解放軍251醫院病理科，河北 張家口 075000；3.中國人民解放軍251醫院重癥醫學科，河北 張家口 075000)

目的 探討Wee1蛋白在鼻咽癌組織中的表達及其與臨床預后的關系。方法收集2005年1月至2010年12月期間在張家口市第一人民醫院和中國人民解放軍251醫院耳鼻喉科住院患者70例，手術病理活檢均明確診斷為鼻咽癌，應用免疫組織化學(EnVisionTM)法檢測其Wee1蛋白表達，并與30例正常組織的表達進行比較，同時分析Weel蛋白的表達與鼻咽癌臨床病理因素的關系及其5年生存率。結果Wee1蛋白在鼻咽癌組織、正常組織中的陽性表達率分別為52.86%(37/70)、10.00%(3/30)，兩組的陽性表達率比較差異有顯著統計學意義(P＞0.01)；Wee1蛋白的陽性表達與腫瘤直徑、淋巴結轉移、浸潤鄰近組織及EBV感染有關(P＞0.05)，與性別、年齡、組織學類型及腫瘤部位無關(P＞0.05)；Wee1蛋白陽性表達的鼻咽癌患者5年生存率為35.14%(13/37)，明顯低于Wee1蛋白陰性表達的81.82%(27/33)，兩組比較差異有顯著統計學意義(P＞0.01)。結論Wee1蛋白的異常表達不僅參與了鼻咽癌的發生，而且有利于癌細胞的浸潤轉移，對預測患者的生存預后也有參考價值。

鼻咽癌；Wee1蛋白；生存；預后

鼻咽癌是鼻咽部黏膜發生的癌變，在光鏡和超微結構中被證實具有鱗狀上皮分化，其包括鱗狀細胞癌、非角化性癌(分化型或未分化型)和基底樣鱗狀細胞癌，而腺癌和涎腺型癌除外[1]。目前，鼻咽癌發病病因還未完全闡明，但認為其與EB病毒感染、化學致癌物質及遺傳因素等有關。上述一種或多種因素的刺激下，細胞結構或功能發生改變，導致細胞增殖凋亡失衡，進而引起腫瘤的形成。細胞的增殖或凋亡與細胞周期的轉變有關，而Wee1蛋白在細胞周期轉變中具有重要的調節作用。本實驗主要探討Wee1蛋白在鼻咽癌形成中的作用及與病理參數之間的關系，同時分析其對患者5年生存預后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2005年1月至2010年12月期間在張家口市第一人民醫院和中國人民解放軍251醫院耳鼻喉科住院患者資料70例，手術病理活檢明確診斷為鼻咽癌。男性患者37例，女性患者33例。患者年齡18～83歲，中位數年齡46歲，其中≥46歲者41例、＜46歲者29例。腫瘤直徑≥3 cm者39例、＜3 cm者31例；腫瘤部位：側壁25例，咽隱窩34例，上側壁11例。組織學類型：角化性鱗狀細胞癌9例、非角化性分化型癌32例、非角化性未分化型癌29例。淋巴結轉移者40例，無淋巴結轉移者30例。浸潤鄰近組織者38例，無浸潤鄰近組織者32例。EBV陽性者36例，EBV陰性者34例。并對上述患者或家屬電話隨訪5年。同時選取癌旁正常組織30例作為對照組。

1.2 試劑和方法 即用型兔抗人Wee1單克隆抗體及其配套試劑盒、DAB顯色劑均由福州邁新生物技術有限公司提供。免疫組化染色采取EnVision兩步法，操作步驟參照試劑盒說明書。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷 Wee1著色于細胞核或細胞質，可表現為淺黃色、棕黃色、棕褐色。計數高倍鏡視野下每張切片著色的細胞，判斷標準參考文獻[2]。染色結果由兩名以上病理醫師進行雙盲評估，并建議(-)和(+)標為低表達，記為陰性；(++)和(+++)標為高表達，記為陽性。

1.4 統計學方法 采用統計分析軟件SPSS17.0處理相關數據，計數資料采用χ2檢驗及復式條形圖，多個率之間的比較采用RxC χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 Wee1蛋白在鼻咽癌組織和黏膜慢性炎組織中的表達 Wee1蛋白著色于細胞核，在70例鼻咽癌組織中陽性表達37例，陽性率為52.86%；在30例正常組織中陽性表達3例，陽性率為10.00%，兩組之間差異有顯著統計學意義(χ2=16.07，P=0.00＜0.01)，見圖1、圖2。

2.2 Wee1蛋白的表達與鼻咽癌臨床病理因素的關系 Wee1蛋白在男性患者組中陽性表達率為51.35%，女性患者組中陽性率為54.54%，兩組之間差異無統計學意義(P＞0.05)；Weel蛋白在≥46歲組中陽性率為53.65%，＜46歲組中陽性率為51.74%，兩組之間差異無統計學意義(P＞0.05)；Wee1蛋白在腫瘤直徑≥3 cm組中陽性率為66.67%，在腫瘤直徑＜3 cm組中陽性率為35.48%，兩組之間差異有統計學意義(P＜0.05)；Wee1蛋白在咽側壁、咽隱窩和上側壁瘤組織中陽性表達率分別為52.00%、52.94%、54.54%，三組之間差異無統計學意義(P＞0.05)；Wee1蛋白在角化性鱗狀細胞癌、非角化性分化型癌和非角化性未分化型癌組織中陽性表達率分別為44.44%、53.13%、55.17%，三組之間差異無統計學意義(P＞0.05)；Wee1蛋白在淋巴結轉移組中陽性率為67.50%，無淋巴結轉移組中陽性率為33.33%，兩組之間差異有統計學意義(P＜0.05)；Wee1蛋白的表達在浸潤鄰近組中陽性率為68.45%，無浸潤鄰近組中陽性率為34.37%，兩組之間差異有統計學意義(P＜0.05)；Wee1蛋白在EBV陽性組中陽性率為66.67%，EBV陰性組中陽性率為38.23%，兩組之間差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 Wee1蛋白的表達與鼻咽癌臨床病理因素的關系(例)

2.3 Wee1蛋白的表達對鼻咽癌患者5年生存預后的影響 70例鼻咽癌患者在5年隨訪期間無一例失訪。隨訪期內發現，Wee1蛋白陽性表達的37例患者中有13例患者存活，5年存活率為35.14%；Wee1蛋白陰性表達的33例患者中有27例患者存活，5年存活率為81.82%，兩組之間差異有顯著統計學意義(χ2= 15.52，P=0.00＜0.01)，見圖3。

圖1 Wee1蛋白在鼻咽癌組織陽性表達(EnVision×100)

圖2 Wee1蛋白在黏膜慢性炎組織中陰性表達(EnVision×100)

圖3 Weel蛋白的表達對鼻咽癌患者5年生存預后的影響

3 討 論

人Wee1基因位于11p15.3～11p15.1，是編碼分子量為94 kD、含有647個氨基酸的蛋白。Wee1蛋白激酶作為G2/M期檢查點的關鍵激酶而特異性地參與細胞周期的調節，其表達的異常都會影響細胞周期的正常轉變，進而改變細胞的生物功能。國外研究資料顯示，多種惡性腫瘤高表達Wee1蛋白，且通過抑制或沉默其表達，相關腫瘤細胞的增殖速度降低，甚至引起細胞的凋亡或死亡。外陰鱗狀細胞癌組織中Wee1過表達，其表達與淋巴結轉移及分化差有關，且有可能成為單一療法患者治療的靶點[2-5]。Pappano等[6]認為Wee1在正常細胞生長情況下起著腫瘤抑制基因的作用，但在腫瘤細胞系中發現，特異性抑制Wee1不利于無p53活性的腫瘤增殖和生存。國內學者呂慧等[7]發現，Wee1蛋白在肝細胞癌中的表達明顯高于肝硬化及正常肝組織，不僅如此，肝細胞癌中Wee1蛋白表達越高，其分化程度越低。張金敏等[8]實驗結果顯示，PB方案介入治療后，Wee1蛋白的表達較介入前顯著降低，推測Wee1蛋白的表達有可能成為監測PB方案療效的指標。

本實驗結果顯示，Wee1蛋白在鼻咽癌組織中的表達明顯高于正常組織，且其表達與鼻咽癌腫瘤直徑、淋巴結轉移、浸潤鄰近組織及EBV感染有關。這說明癌細胞異常高表達Wee1蛋白不僅增加了癌細胞的增殖抗凋亡能力，而且也有利于癌細胞的浸潤轉移，同時，與EBV感染之間的關系也顯示出，EBV感染陽性組中的Wee1蛋白表達明顯高于對應組，這提示EBV有可能上調了Wee1蛋白，進而促進了病變的發生。統計分析鼻咽癌患者5年生存預后發現，Wee1蛋白陽性表達患者5年生存預后明顯低于Wee1蛋白陰性表達，因而，Wee1蛋白表達的高低有可能成為檢測患者預后好壞的指標。綜上所述，鼻咽癌組織存在Wee1蛋白的過表達，其表達水平能反映癌細胞的生物學行為，也能為臨床判斷預后提供參考。

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[8]張金敏,王翔宇,李南,等.PB方案在宮頸癌介入化療中的療效觀察及對Wee1表達的影響[J].現代生物醫學進展,2014,14(9)∶1719-1723.

Expression of Wee1 protein in nasopharyngeal carcinoma and its relationship with clinical prognosis.

HUO Zhan-jiang1,LI Wei2,GAO Fei3.1.Department of Otolaryngology,Head and Neck Surgery,the First People's Hospital of Zhangjiakou City,Zhangjiakou 075000,Hebei,CHINA;2.Department of Pathology,the 251thHospital of Chinese People's Liberation Army,Zhangjiakou 075000,Hebei,CHINA;3.Department of Intensive Care Unit,the 251thHospital of Chinese People's Liberation Army,Zhangjiakou 075000,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of Wee1 protein in nasopharyngeal carcinoma and its relationship with clinical prognosis.MethodsSeventy patients with nasopharyngeal carcinoma were collected from the First People`s Hospital of Zhangjiakou City and the 251thHospital of Chinese People′s LiberationArmy from January 2005 to December 2010,which were definitely diagnosed as nasopharyngeal carcinoma by surgery pathology biopsy.The expression of Wee1 protein was detected by immunohistochemisty(EnVisionTM)in nasopharyngeal carcinoma tissues in the 70 patients and compared with that of normal tissues(n=30).The relationship between the expression of Wee1 protein and clinicopathological factors,the patients′five-year survival rate were analyzed by χ2test.ResultsThe positive expression rate of Wee1 protein was 52.86%(37/70)in nasopharyngeal carcinoma tissues and 10.00%(3/30)in normal tissues,with statistically significant difference(P＜0.01).The positive expression of Wee1 protein in nasopharyngeal carcinoma tissues was related to tumor size,lymph node metastasis,infiltrating adjacent tissues and EBV infection(P＜0.05),but not related to gender,age,histological category and tumor site(P＞0.05).The five-year survival rate of the patients with nasopharyngeal carcinoma with the positive expression of Wee1 was 35.14%(13/37),which was significantly less than that of the patients with negative expression of(81.82%)(27/33),and the difference was statistically significant(P＜0.01).ConclusionThe overexpression of Wee1 not only takes part in the development of nasopharyngeal carcinoma,but also is useful for cancer infiltrating and metastasis,which is valuable in forecasting the survival and prognosis of patients.

Nasopharyngeal carcinoma;Wee1 protein;Survival;Prognosis

R739.63

A

1003—6350（2016）03—0360—03

2015-06-25)

李偉。E-mail:liwei-324@163.com

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2016.03.006