子宮內膜異位癥中OPN、VEGF的表達及意義

陳曼詩 王冰 陳燦 陳衡 陳春瑩

子宮內膜異位癥中OPN、VEGF的表達及意義

陳曼詩 王冰 陳燦 陳衡 陳春瑩

目的研究子宮內膜異位癥患者血清中骨橋蛋白(OPN)和血管內皮生長因子(VEGF)的表達,及在子宮內膜異位癥中的作用。方法采用酶聯免疫吸附測定(ELISA)方法檢測30例子宮內膜異位癥患者(研究組)、30例因子宮平滑肌瘤、卵巢良性腫瘤手術患者(對照組)血清中OPN、VEGF的表達情況,觀察其表達的意義及兩者之間的關系。結果研究組血清OPN、VEGF表達高于對照組(P＜0.05)。子宮內膜異位癥患者血清OPN與VEGF呈正相關(r=0.411,P＜0.05)。結論OPN、VEGF的改變與子宮內膜異位癥的發生、發展緊密相連,OPN可上調VEGF使其表達增強,而VEGF也可通過某種機制促進OPN酶切,兩者共同誘發新生血管的形成,這表明OPN與VEGF在血管生成方面或許存在相關的協同作用。

子宮內膜異位癥；骨橋蛋白；血管內皮生長因子

骨橋蛋白(osteopontin,OPN)在粘附、侵襲和惡性腫瘤轉移等方面中起著非常重要的作用［1］。OPN在腫瘤方面研究較多,其與結直腸癌、乳腺癌［2］等腫瘤中均存在異常,但與子宮內膜異位癥的相關性的研究卻較少,故OPN成為近來子宮內膜異位癥探索的熱點之一。血管的生成不但在正常子宮內膜的生長修復中起重要的作用,而且在子宮內膜異位癥的發展過程中也起著至關重要的角色［3］。血管的生成與促進血管生成的因子有著緊密的聯系,是在多種細胞因子的協調控制下完成的,這些細胞因子中又以血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)為主。已有大量實驗報道,OPN與VEGF的關聯性在胃癌、肺腺癌等探索較密［2］,可用于輔助治療,并且兩者在惡性腫瘤中也呈現著高表達,而子宮內膜異位癥在臨床上具有類似惡性腫瘤的種植、擴散及遠處轉移等能力。故本實驗通過應用ELASE方法測定子宮內膜異位癥患者血清中OPN、VEGF含量,來探索這兩種因子在子宮內膜異位癥中演進發展的過程,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年7月～2014年1月在福田區人民醫院予手術治療并術后病理確診：子宮內膜異位癥患者30例為研究組,平均年齡(29.8±7.1)歲；選取同期子宮平滑肌瘤、卵巢良性腫瘤(卵巢成熟畸胎瘤、漿液性囊腺瘤)手術患者30例為對照組,平均年齡(31.7±7.6)歲。兩組患者一般資料比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。兩組患者術后均由病理證實,各組患者肝腎功能均正常,同時排除自身免疫性疾病(如類風濕性關節炎等)患者、近期服用激素類藥物及惡性腫瘤者。

1.2 標本采集與制備及檢測 術前清晨空腹抽取肘靜脈血5ml,室溫靜置,離心機3000r/min,離心10min,取血清,-70℃凍存備用。同時取腹腔鏡/開腹直視下抽取直腸子宮陷凹腹腔液3ml,處理同肘靜脈血,所有標本污染者棄之。采用 OPN酶聯免疫吸附測定試劑盒,VEGF酶聯免疫吸附測定試劑盒(上海研輝生物科技有限公司)分別測定 OPN和VEGF含量,嚴格按照試劑盒說明書步驟進行實驗,測定 450nm吸光度(A)值。根據 ELISA實驗所得的標準品的OD值,相應濃度,應用Excel軟件繪制標準曲線,再根據血清樣本的 OD值分別求出OPN、VEGF濃度。

1.3 統計學方法 采用SPSS 19.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson分析。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清OPN、VEGF水平比較 研究組血清OPN、VEGF表達高于對照組(t=21.013、12.771,P＜0.05)。見表1。

表1 兩組血清OPN、VEGF水平比較(±s)

表1 兩組血清OPN、VEGF水平比較(±s)

注：與對照組比較,aP＜0.05

組別例數OPN(ng/ml) VEGF(pg/ml)研究組 3058.73±7.78a84.86±19.81a對照組 3018.27±7.1236.44±6.23P <0.05<0.05

2.2 子宮內膜異位癥患者血清OPN與VEGF關系 子宮內膜異位癥患者血清OPN與VEGF呈正相關(r=0.411,P＜0.05)。

3 討論

Cho等［4］用聚合酶鏈反應(PCR)和ELISA方法檢測79例病理為子宮內膜異位癥者為研究組和43例正常子宮內膜者為對照組,在子宮內膜異位癥患者中OPN mRNA的水平高比正常內膜者(P=0.010＜0.05)；且OPN的平均血漿表達在子宮內膜異位癥者和正常內膜者中分別為(407.31±37.80)ng /mL和(165.84±19.29)ng/mL。D'Amico等［5］通過測定OPN與CD133兩者的mRNA和蛋白表達,發現子宮內膜異位癥患者中的血清OPN mRNA蛋白的高表達,OPN可通過促進細胞間的黏附和細胞游走,從而提高異位子宮內膜的侵襲、增殖及生存能力,這與本研究結果相一致。本研究結果表明,研究組子宮內膜異位癥患者血清中VEGF的表達高于對照組,OPN與子宮內膜異位癥的發病有一定的相關,其可通過某種機制促進血管內皮細胞的趨化、粘附和遷移,參與其免疫反應,誘發新生血管的生成,產生抗凋亡信號,使異位的子宮內膜細胞更易于存活,有利于其持續侵襲。故OPN為子宮內膜異位癥的診斷提供了一個可靠的檢測指標,其可作為子宮內膜異位癥的一個有用的診斷標記。研究顯示VEGF在腫瘤靶向藥物的開發及腫瘤輔助診斷等方面有重要意義［6］,如VEGF的多態性的具體機制在神經膠質瘤及胃腸道腫瘤,乳腺癌中的重要作用［7,8］,而VEGF是血管生成的一個重要因子,VEGF將激發和維持子宮內膜異位中的新生血管,促進其生成和增殖。VEGF水平在可能起到兩方面的作用：①可能是一個有利于有活性的內膜組織植入其他部位的重要的病原學病因,高濃度的VEGF可導致腹膜的血管化；②VEGF可進行血管重塑,其是一種肝素結合蛋白的家族成員,VEGF通過增加血管的通透性,影響內皮細胞的生理功能,使凋亡細胞的數目明顯下降,使大量的纖維素和纖維蛋白等溢出,形成膠樣物質沉積于細胞間質內,為血管生成提供基質,誘發血管內皮細胞的增殖,更易于異位內膜的存活。

本研究結果表明,子宮內膜異位癥患者血清OPN與VEGF呈正相關(r=0.411,P＜0.05)。OPN和VEGF能共同促進內皮細胞的活性,誘發血管生成。這表明OPN與VEGF之間或許存在某種必然的協同作用,其共同刺激內皮細胞的遷移,誘發血管的活性,使異位內膜更易于侵襲、種植與發展。有研究認為OPN可通過活化的轉錄因子上調VEGF使其表達增強,誘導內皮細胞粘附和遷移,誘發新生血管的生成,共同促進侵襲、轉移的發生［9］；同時,VEGF也可刺激新生血管的形成,增加血管的通透性,易于激活外源性凝血途徑,產生凝血酶,促進OPN酶切,同時刺激內皮細胞有絲分裂,誘發新生血管的生成,協同促進異位內膜的侵襲與生長。

內異癥的病理機制需要三個步驟：粘附、侵襲和血管形成。血管形成是其重要的一個種植和生長的環節。腹腔鏡雖可作為子宮內膜異位癥診斷的金標準,但因其價格和有創性,臨床應用存在局限性［10］,而血清OPN、VEGF可作為非侵入性診斷標志,且兩者在血管生成等方面具有許多類似的生物學效應,在子宮內膜異位癥中起到一定的作用,但具體機制有待于進一步研究。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.18.016

2016-08-10］

廣東省深圳市福田區公益性科研項目(項目編號：FTWS201361)

518000深圳福田區人民醫院婦產科