宮血停顆粒質量標準的探究

傅英昳

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

宮血停顆粒質量標準的探究

傅英昳

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

目的：明確宮血停顆粒的質量控制方法。方法：以TLC法對整機中的墨旱蓮和益母草進行鑒別，并以HPLC-ELSD法對制劑中的黃芪甲苷進行含量測定。結果：通過含量測定，黃芪甲苷在0.20-2.50μg之間保持良好的線性關系，宮血停顆粒中黃芪甲苷的平均回收率為101.0%，RSD值為1.7%。結論：此種鑒別方式在實際應用中能夠實現準確高效分離，具有簡便性和有效性，在宮血停顆粒的質量評價中具有良好的應用價值。

宮血停顆粒；薄層色譜法；HPLC-ELSD

宮血停顆粒是一種中藥復方制劑，主要由黃芪、升麻、黨參、益母草以及當歸等組成，在臨床上具有補益脾腎、活血化瘀的功效，在氣虛血瘀所導致的月經過多以及崩漏等方面具有較好的臨床治療效果。為了對宮血停顆粒進行有效的質量控制，本文就此展開實驗亞久，建立薄層色譜鑒別方法，并采用HPLC-ELSD法對黃芪甲苷進行含量測定，以明確宮血停顆粒的質量控制方法，從而保證藥品質量，提高臨床用藥安全性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

本次實驗研究中，以HP1100高效液相色譜儀、蒸發光散射檢測器作為主要實驗儀器，并進行空氣泵、電子天平等配合開展實驗研究。

1.2 樣品

以選自哈藥集團世一堂制藥有限公司的宮血停顆粒作為實驗樣品，樣品共10個批次。

1.3 試劑與試藥

在本次實驗研究中，流動相試劑為色譜純，其余試劑與試藥均為分析純。旱蓮苷A對照品、（批號111886-201001）墨旱蓮對照藥材（批號958-200203）鹽酸水蘇堿對照品（批號110712—2000508）益母草對照藥材（批號120912-200306）黃芪甲苷對照品（批號0781—200311）來源：均購自中國藥品生物制品檢定所。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別

為保證墨旱蓮鑒別準確性，在實際操作過程中取含量測定項下供試品溶液5批作為供試品溶液，將適量甲醇加入旱蓮苷A對照品中，制成標準含量的對照品溶液，其規格為每1ml含有0.5mg旱蓮苷。之后，取墨旱蓮對照材料2g，加入標準比例乙醇進行超聲處理，待45min后濾過，取續濾液作為對照藥材溶液。取含量按A對照品2.5mg以及宮血停顆粒2.5g，加以處理后制成加樣回收溶液。取墨旱蓮對照藥材2g制成供試品后，依照含量測定方法制成陽性供試品溶液。在此基礎上，依照處方量比例制成宮血停顆粒，其中不含墨旱蓮，依照供試品溶液制備方式制成陰性供試品溶液。

按照《中國藥典》2010年版中的薄層色譜發開展試驗，取所制備10種溶液各5μl，滴于同一硅膠G薄層板上，選用二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水作為展開劑，將溶液展開后取出晾干，并噴以標準比例的硫酸乙醇溶液，在105℃條件下加熱處理，5分鐘后取出，于日光下對其質量進行檢查。通過觀察對比可知，供試品溶液、陽性供試品溶液、加樣回收溶液色譜中，其與墨旱蓮對照藥材、旱蓮苷A對照品色譜相應位置上所顯斑點顏色相同，陰性供試品溶液對墨旱蓮藥材的鑒別不存在干擾情況。

在益母草鑒別過程中，取本品2.5g（無糖型），加70%乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，用稀鹽酸調節pH值至1～2，通過732鈉型陽離子交換樹脂柱（內徑為2cm，柱高為15cm），用水洗脫至洗脫液無色，棄去洗脫液，再用氨溶液（2→13）250ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加70%乙醇5ml使溶解，作為供試品溶液。取鹽酸水蘇堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。取益母草對照藥材2g，按供試品處理方法，制成對照藥材溶液。同時，按處方量比例制成不含益母草的宮血停顆粒，然后按供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以丙酮—無水乙醇—鹽酸（10：6：1）為展開劑，展開，取出，晾干，在105℃加熱15分鐘，放冷，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘干，噴以稀碘化鉍鉀試液-1%三氯化鐵乙醇溶液（10：1）混合溶液至斑點顯色清晰，晾干。供試品色譜中，在與益母草對照藥材，鹽酸水蘇堿對照品色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，處方中其他成分對益母草藥材的鑒別無干擾。

2.2 含量測定

在本次實驗研究中開展含量測定相關操作時，應當明確色譜條件，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，選用乙腈-水（32:68）作為流動相，以蒸發光散射器作為主要檢測器進行檢測。依照實驗標準以黃芪甲苷對照品作為主要材料，加入適量甲醇后制備出標準含量的對照品溶液。在此基礎上，取宮血停顆粒5g，加入甲醇溶液，并進行回流、放冷、濾過等凡是進行處理，將濾液蒸干殘渣加水溶解，飽和后進行振搖提取，合并正丁醇液，以氨試液洗滌后，將正丁醇液蒸干，加甲醇加入殘渣內進行溶液轉移，再加甲醇進行搖勻、濾過，取出濾液，即可得到供試品溶液。密吸取對照品溶液 2μl，5μl，供試品溶液 10μl，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數方程計算。

按處方量比例制成不含黃芪的宮血停顆粒，然后按照供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液，按上述色譜法測定，結果表明宮血停顆粒中其他成分對黃芪甲苷的測定無干擾。精密量取對照品溶液5μl，重復進樣5次測定峰面積，RSD值為1.1%（n=5）。在穩定性試驗方面，取供試品溶液，隔2h進樣1次，連續進樣6次，測定峰面積，計算含量，RSD值為 1.3%，顯示黃芪甲苷在至少14h內穩定。

之后開展重復性試驗，取同一批號樣品（1107507）6份，分別按樣品含量測定法測定峰面積，計算含量，結果RSD值為2.4%（n=6）。在回收率試驗過程中，精密稱定已知含量樣品的宮血停顆粒6份（批號1107507），精密加入黃芪甲苷對照品溶液1.00ml，按含量測定法測定得峰面積，并計算含量，平均回收率為101.0%，RSD值為1.7%。

通過線性分析可知，黃芪甲苷在 0.20～2.50μg之間，其對數值與峰面積的對數值呈良好的線性關系。就其范圍來看，取宮血停顆粒9份，取樣量分別為含量限度計算樣品取樣量的0.5、1、1.5倍（批號1107507），按含量測定法對9份樣品分別進行含量測定，測定結果的RSD值為1.8%。在此基礎上開展樣品含量測定，按含量測定法對10批樣品分別進行黃芪甲苷含量測定，測定結果為每袋1.73～2.24mg之間。

3 討論

3.1 流動相的選擇

通過實驗研究可知，在C18柱色譜條件下，溶劑系統所使用乙腈-水（36：65）作為流動相，并未獲得理想的分離效果，而采用乙腈-水（32:68）黃芪甲苷與并存雜質的分離效果明顯，對實驗研究的進一步開展具有重要意義。

3.2 耐用性

在本次實驗研究中，通過對三種型號不同的色譜柱進行對比分析，可知三種色譜柱的分離效果較好，三種色譜柱型號分別如下：Waters Symmetry C18 5μm4.6*250mm；DikmaC18 5μ m4.6*250mm；AgilentExtendC18 5μm4.6*150mm。

3.3 供試品處理方法的研究

在本次實驗研究中，取相同批次宮血停顆粒作為對象，依照含量測定標準對處理方法和時間進行調整，依據測定結果進行觀察和分析可知，在標準的供試品處理方法下，能夠獲得較好的回流超聲效果，并且在不同的回流時間下，實際超聲效果存在的差異較小，因此在宮血停顆粒質量控制過程中，在供試品的處理上，可以以1小時為最佳回流時間。

[1]王憲平，張勝波，筆雪艷，張清波 宮血停顆粒質量標準的研究[J].《黑龍江醫藥》,2013, 26(3):382-385

[2]謝守蘭，李煒，馮敏，王海亮 HPLC-ELSD法測定宮血停顆粒中黃芪甲苷的含量[J].《西北藥學雜志》, 2008, 23(3): 148-149

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1672-5018（2016）09-313-01