丹參對肝臟缺血再灌注損傷的分子生物學機制研究

李小玲，楊秀芳張掖市甘州區人民醫院藥劑科，甘肅張掖734000；武威腫瘤醫院中醫科

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丹參對肝臟缺血再灌注損傷的分子生物學機制研究

李小玲1，楊秀芳2
1張掖市甘州區人民醫院藥劑科，甘肅張掖734000；2武威腫瘤醫院中醫科

查閱近幾年國內關于丹參藥理作用的文獻，從藥理作用及分子生物學機制等方面進行歸納、總結，旨在指導臨床應用及研究。

再灌注損傷，肝臟；丹參；藥理作用

肝臟缺血再灌注損傷是肝移植和肝臟葉段切除術后不可避免的并發癥［1］，復流過程中多個器官損傷程序被激活，包括Kupffer細胞、淋巴細胞和中性粒細胞，黏附分子表達的提高等易引起系列損害性的細胞反應，繼而導致肝竇內皮細胞壞死及肝細胞凋亡，由于肝竇內皮細胞的損害而導致的微循環障礙，進一步加重肝臟局部缺血［2］。中藥丹參具有活血祛瘀、通經止痛、清心除煩、涼血消癰之功效［3］。其主要化學成分為脂溶性的二萜醌類化合物和水溶性的酚酸類化合物［4］。大量文獻報道，中藥丹參對肝臟缺血再灌注損傷有保護作用，筆者現對其化學成分、藥理作用及分子生物學作用機制等方面進行詳述。

1　清除氧自由基

丹參成分中的丹參酮類、丹參素、丹酚酸類化合物、原兒茶醛、咖啡酸及迷迭香酸均具有很強的抗氧化作用［5］。研究發現［6］，丹參酮ⅡA可抑制細胞膜上的NADH/NADPH氧化酶的激活，提高SOD的活性，清除氧自由基并抑制脂質過氧化反應，保護血管內皮細胞。高國起等［7］研究結果表明，丹參可通過降低氧自由基水平，拮抗脂質過氧化反應，從而減輕肝臟缺血再灌注損傷。Verzola等［8］等研究發現復方丹參注射液具有很強的抗氧化作用，能提高過氧化物歧化酶（SOD）活力，清除氧自由基，抑制脂質過氧化和抗氧化損傷，從而對抗體內氧自由基對組織細胞的損傷；同時它可以增加動物對缺氧環境的耐受力。

2　抑制中性粒細胞的活化

大量實驗證實，肝臟缺血后強烈的炎癥反應是造成肝組織繼發性損傷的因素之一，在此炎癥反應過程中，多因素相互作用，共同引起再灌注損傷［9］，許多細胞因子，如腫瘤壞死因子、IL-1、IL-8、氧自由基等多種趨化因子的共同參與，激活了多核中性粒細胞（PMN），此外在黏附分子作用下PMN及其他炎性細胞在肝組織缺血區聚集和浸潤，并通過脫顆粒作用釋放彈性蛋白酶、膠原酶、髓過氧化物酶（MPO）等多種蛋白酶，從而造成細胞功能障礙及結構的破壞。當中性粒細胞的耗氧量顯著增加，產生氧自由基，加重肝細胞損傷，即PMN的呼吸爆發或氧爆發。岳鵬飛等［10］研究發現，丹參對中性粒細胞的呼吸爆發效應有抑制作用。郭偉強等［11］發現，丹參酮ⅡA能持續促進IL-10含量的增加，IL-10被稱為細胞因子合成抑制因子，通過調節多種免疫活性細胞因子，間接地參與了Th1反應，從而抑制了炎癥反應，而且這種促進作用是在炎性條件下的特異反應。

3　抑制細胞凋亡

Yu等［12］研究發現，丹參提取物作用于缺血再灌注損傷肝細胞后，細胞內活性氧水平下降，半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表達下調，胞漿內細胞色素C，Bax/Bcl-2比值減小。崔小鵬等［13］研究表明，丹參可通過增強Bcl-2表達，抑制Bax表達，從而抑制肝臟缺血再灌注時肝細胞凋亡。李程等［14］研究丹參注射液預處理對大鼠肝缺血再灌注損傷中PI3K-AKT信號傳導通路的影響中發現丹參使該通路活化，激活p-Akt，進而直接磷酸化前凋亡基因BAD和Bax，激活抗凋亡蛋白Bcl-2，防止線粒體釋放凋亡因子來促進細胞存活和抑制細胞凋亡。

4　減輕線粒體的損傷

張文海等［15］對Wistar大鼠實驗組連續2天肌肉注射復方丹參注射液，對照組等量生理鹽水，第3天手術行肝左、中葉缺血再灌注，2組在肝缺血2小時后分別復流2、6和18小時測定血清谷丙轉氨酶（ALT）、肝細胞線粒體和肝組織丙二醛（MDA）的含量，電鏡觀察肝細胞線粒體的形態改變，結果實驗組復流6小時的ALT、肝細胞線粒體MDA以及復流2、6小時的肝組織MDA的含量均顯著降低［12］；對照組線粒體損傷程度隨著再灌注時間的延長而加重，表現為線粒體普遍腫脹，內膜嵴斷裂，嚴重者線粒體內部結構模糊，內膜嵴破壞明顯甚至消失，只殘留線粒體輪廓，說明復方丹參能夠減輕肝細胞線粒體的再灌注損傷。王靖等［16］研究表明丹參多酚酸預處理組線粒體Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性顯著高于缺血再灌注組。表明丹參多酚酸可以維持肝臟缺血時線粒體Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性。支文煜［17］研究表明，缺血再灌注后，線粒體大量自由基，攻擊線粒體，進而破壞其結構和功能，引起呼吸功能障礙，同時膜屏障的破壞，導致大量離子內流，使線粒體腫脹，而丹參酮ⅡA可以阻斷這些途徑。

5　改善肝臟微循環

楊佳等［18］研究表明，丹酚酸B抑制正常大鼠血漿血小板黏聚性的作用機制可能與抑制TXA2合成有關，進而起到改善微循環，保護血管內皮作用。實驗表明［19］，丹參中的有效成分丹參酮ⅡA磺酸鈉、丹參素能抑制體外血栓形成，通過抑制ADP誘導的血小板聚集，使血小板黏性降低。丹參素對細胞因子活化內皮細胞的抑制及保護血管內皮，減少白細胞黏附作用，可能是其發揮抗血栓形成作用的機制之一［20］。研究表明［21］，丹參可通過抑制白細胞和血管內皮細胞的黏附，降低血小板的黏性，從而改善微循環。

6　抑制C a2+內流

在肝臟缺血再灌注時肝細胞膜上鈉-鈣交換異常，導致Ca2+的被動性彌散增加，細胞內游離鈣濃度增加，形成鈣超載，導致肝細胞的不可逆性損傷。秦嵩［22］研究表明，丹參能明顯減少肝臟缺血再灌注時肝細胞Ca2+濃度，抑制Ca2+內流，維持細胞內鈣穩定，保護細胞膜。盧綺萍等［23］研究發現，丹參注射液通過直接或間接的2個途徑鈣阻滯作用發揮肝缺血再灌注保護作用，一是抑制血小板聚集，改善微循環灌注，減少ATP消耗，改善肝細胞膜泵功能，增加鈣外排內攝；二是直接作用于肝細胞膜ROC受體蛋自，增強鈣泵主動轉運，加速鈣外排內攝，使再灌注期肝細胞內Ca2+維持在生理許可范圍內，由此阻斷肝細胞內鈣超載這一再灌注損傷的始動環節，減少黃嘌呤脫氫酶向黃嘌呤氧化酶的轉化，鈣依賴蛋白水解酶的水解及脂質過氧化自由基的生成，減輕肝細胞膜、細胞器膜損傷，保持其結構功能完整性。

7　免疫調節

齊艷艷等［24］研究表明，丹參酮ⅡA可抑制肝臟缺血再灌注后TNF-α、IL-6等前炎癥因子的表達，從而減輕肝臟損傷。研究表明，丹參注射液通過減少動物體內IC和抗體數量，進而減輕免疫損傷，起到防止免疫性肝纖維化的作用［25］。丹參酮Ⅱa對人白細胞的游走趨化有明顯的抑制作用，其抑制作用在一定劑量范圍內呈明顯的劑量依賴性，并且有較強的直線相關性［26］。蘇志良等［27］研究表明，丹參能增加離體保存再灌注肝臟的IL-10 mRNA表達，對肝臟再灌注損傷可能具有一定防治作用。

8　抑制應激狀態下蛋白表達

高傳長等［28］研究表明，丹參能上調同種異體大鼠移植肝臟中血紅素氧合酶1 mRNA及其蛋白表達，減輕肝缺血-再灌注損傷，保護移植大鼠肝臟。于超等［29］研究表明，丹參可能通過調控HIF-la，降低凋亡因子的表達，減輕肝臟損傷。徐志廣等［30］研究表明，大鼠肝臟缺血再灌注時應用丹參預處理，可能通過使活化轉錄因子-6α（ATF-6α）適度表達及下調半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）蛋白的過度表達，調節肝細胞內質網應激穩態，減少細胞凋亡，發揮細胞保護作用。廖喜望等［31］研究表明，STAT1在大鼠肝缺血再灌注損傷中被激活，丹參可能通過抑制STAT1的表達減輕缺血再灌注對肝的損傷。

9　討論

丹參通過其活性成分從以上諸多方面發揮著對肝臟缺血再灌注損傷的保護作用，可影響其病理生理過程中的自由基損傷、炎癥反應、線粒體結構、微循環及肝細胞的凋亡等多個環節，作用呈現出多環節、多途徑、多靶點、多效性，但目前的研究主要集中在動物實驗層面，僅涉及少部分臨床實驗。由于肝臟缺血再灌注病理過程的復雜性及丹參活性成分的多樣性，大多數實驗僅能表明丹參的某個活性成分在肝臟缺血再灌注的某個病理環節上發揮著諸多作用。因此中藥丹參對肝臟缺血再灌注損傷的分子生物學機制研究應從丹參活性成分間的相互作用、總體活性成分效應著手，來闡明丹參對肝臟缺血再灌注損傷的分子生物學機制。

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Molecular Biological Mechanism of DanShen on Ischemia Reperfusion Injury of Liver

LI Xiaoling1，YANG Xiufang2
1 Pharmaceutical Preparation Department of Ganzhou District People's Hospital，Zhangye 734000，China；2 TCM Department of Wuwei Cancer Hospital

By consulting the literature about pharmacological action of DanShen（Radix Salviae Miltiorrhizae）at home in recent years，the actions of Danshen were concluded and summarized from pharmacological action，molecular biological mechanism and others，in order to guide clinical application and the research.

reperfusion injury，liver；DanShen；pharmacological action

R575

A

1004-6852（2016）06-0163-03

2016-01-22

李小玲（1974—），女，主管藥師。研究方向：中藥制劑。