Ki—67與宮頸癌患者預后的相關性研究

黃輝　趙丹洋　劉美蓮　蔣宏玲

摘要：目的：分析在正常宮頸上皮、宮頸上皮內瘤變及宮頸癌組織中Ki-67的表達并探討Ki-67與宮頸癌患者預后的關系。方法：經免疫組化法定量檢測20例正常宮頸上皮、20例宮頸上皮內瘤變及40例宮頸癌中Ki-67的表達，結合宮頸癌患者臨床資料分析其與預后的關系。結果：Ki-67在正常宮頸上皮、宮頸上皮內瘤變及宮頸癌組織中的陽性率分別為15.0%、45.0%、75.0%，組間比較差異有統計學意義（P<0.05）。生存分析顯示年齡、Ki-67、淋巴結轉移、臨床分期均為預后影響因素。結論：Ki-67可能參與宮頸組織的癌變過程，可作為宮頸癌預后的影響因素之一。

關鍵詞：官頸腫瘤；Ki-67；預后

中圖分類號：R737.33 文獻標志碼：A 文章編號：1008-2409（2016）05-0044-04

長期以來，宮頸癌威脅著全球女性的生命健康。雖然國內外普及宮頸刮片篩查，同時結合多種治療方式，但宮頸癌發病率仍不斷上升，并且近年來已成為癌癥致死的首要原因。Ki-67是一種衡量惡性腫瘤細胞增殖活性的敏感指標，與多種惡性腫瘤的生物學行為有關；其中與宮頸癌預后的相關性研究，已作為國際婦科腫瘤學研究進展的十大熱點之一。本研究通過檢測Ki-67在各宮頸組織中的表達，結合患者的隨訪情況進行分析，研究Ki-67與宮頸癌預后的關系，探討其在宮頸癌生物學行為中的意義。

1對象與方法

1.1對象

收集我院病理科于2008年1月至2011年1月存檔的宮頸蠟塊共560例，包括正常宮頸組織（Normal cervical epithelia，NCE）75例、宮頸上皮內瘤變（Cervieal intraepithelial neoplasm，CIN）113例、宮頸癌（Invasive cervix carcinoma，ICC）372例。NCE組以宮頸錐形切除術或全子宮切除術并具備較完整的隨訪資料為標準，篩選出20例。CIN組同NCE組篩選條件選出20例。ICC組按以下條件篩選出40例：行根治性子宮切除術+雙側盆腔淋巴結切除術，術前未經放化療，術后全程規范化同期放化療；隨訪資料要求同NCE。按2009年國際婦產科聯盟（International Federation 0fGynecology and Obstetrics，FIGO）進行臨床分期：Ⅰ B/ⅡA期18例，ⅡB期10例，Ⅲ/Ⅳ期12例；組織學分級：Ⅰ級12例，Ⅱ級14例，Ⅲ14例；淋巴結轉移26例，無淋巴結轉移14例。

1.2方法

1.2.1免疫組化法 SP染色試劑盒110 ml（通用型，PV-6000，北京中杉金橋生物技術有限公司），鼠抗人Ki-67單克隆抗體0.1ml（濃縮型，ZM-0166，南寧市金墨醫療科技有限公司）1：300比例稀釋。陰性對照片采用PBS液代替一抗進行操作，陽性對照片采用乳腺癌陽性切片。高倍鏡下任取5個視野，陽性結果為腫瘤細胞核染為棕黃色；計數每個視野下，每100個腫瘤細胞中陽性細胞數量，以百分比形式計數。

1.2.2同期放化療方案 ①采用三維適形放療與腔內后裝放療：美國瓦里安UNIQUE直線加速器6 MV X線照射，上至第4腰椎間隙，下至閉孔下緣，前至恥骨聯合前緣，后至第2椎間隙，左右至真骨盆外1.5 cm。照射劑量：50 Gy/2 Gy/25次，1次/d，5次/周。4周后，給予腔內后裝治療：單原子銥-192 Micro Selectron HDR型后裝機照射，A點照射量30 Gy/6 Gy/5次，1次/周，其等效劑量為90 Gy。從放療之日起至放療后第5周定期陰道沖洗，預防治療部位感染。②單藥順鉑30 mg·（m²）^-1·次^-1，1次/周，靜脈滴注。期間出現消化道不良反應，行鹽酸格拉司瓊注射液對癥治療。

1.3預后情況

定期以門診復查、電話隨診等方式對出院后宮頸癌患者進行隨訪。截止于2015年12月31日，預后評價的起始時間為手術日期，隨訪時間中位數為61個月。無病生存期（disease-free survival，DFS）即從手術之日起至首次復發、遠處轉移或死亡的時間。

1.4統計學方法

以SPSS 18.0統計軟件分析；臨床病理特征分析采用X²檢驗，采用Cox比例風險模型進行預后多因素分析，Log-rank法進行DFS的生存分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 Ki-67與宮頸癌病理特征間的關系

本研究共收集80例宮頸組織，根據Ki-67指數將樣本分為Ki-67≤5%組（圖1，A）和Ki-67>5%組（圖1，B），其中Ki-67≤5%組38例，Ki-67>5%組42例。NCE組陽性率為15.0%（3/20），CIN為45.0%（9/20）），ICC為75.0%（30/40），呈逐漸上升趨勢。Ki-67陽性率在NCE組、CIN組、ICC組之間、不同分化程度之間、有無淋巴結轉移之間差異均有統計學意義（P<0.05）；其他指標差異無統計學意義（P>0.05）。詳見表1。

2.2預后生存分析

宮頸癌組共40例，Ki-67≤5%組死亡3例，病死率30.0%；Ki-67>5%組死亡7例，病死率23.3%，兩組之間差異無統計學意義（P>0.05）。總體中位DFS為65.3個月（95%可信區間：54.5～68.5月），其中Ki-67≤5%組10例，中位DFS為90個月（95%可信區間：85.7～92.7月）；Ki-67>5%組30例，中位DFS為63個月（95%可信區間：53.1～70.3月）；兩組中位DFS比較差異有統計學意義（X²=3.733，P=0.046），且Ki-67>5%組較Ki-67≤5%組偏低。

2.3預后影響因素分析

Ki-67≤5%組共1例局部復發，無區域轉移，1例遠處轉移，局部控制率為90.0%；Ki-67>5%組共7例局部復發，1例區域轉移，2例遠處轉移，局部控制率為78.1%，兩組局部控制率差異有統計學意義（X²=3.605，P=0.047）。Cox回歸模型分析結果顯示：年齡、臨床分期、淋巴結轉移、Ki-67表達均為預后的影響因素。詳見表2。

3討論

Ki-67是一種參與調控細胞有絲分裂周期的DNA結合蛋白，是國際上公認的表示細胞增殖活性的指標，其敏感性優于增殖細胞核抗原指數和DNA指數。腫瘤的發生發展是一個復雜的過程，Ki-67幾乎參與了腫瘤生物學行為的全部過程，并且與多種腫瘤的轉移、復發和預后有關。Rokita等研究發現Ki-67有助于鑒別和篩選不典型增生的鱗狀上皮與CIN，同時可作為評估患者預后的參考指標。張燕等研究表明，Ki-67與p16的聯合檢測可明確診斷不易識別的間質浸潤細胞和微小浸潤灶。

本研究結果顯示，Ki-67在NCE組、CIN組、ICC組之間呈逐漸上升趨勢表達，差異有統計學意義（P<0.05），與國內外諸多研究結果基本一致。劉嶸等研究得出早期ICC中Ki-67陽性率Ⅱ期高于I期（P<0.05），但其與組織學分級不相關；馬莉娟研究顯示：Ki-67與宮頸癌淋巴結轉移、臨床分期及分化程度呈正相關（P<0.05）。本研究結果表明，Ki-67陽性率在I臨床分期≤ⅡA、ⅡB、Ⅲ/Ⅳ3組中差異無統計學意義（P>0.05）；而在分化程度各級別之間差異有統計學意義（P<0.05）。此外，Ki-67陽性率淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組，兩組之間差異有統計學意義（P<0.05），與馬莉娟等研究結果基本一致。常麗琴等研究證實：Ki-67陽性率在早期宮頸癌存活率>5年組與存活率<5年組分別為75%和95%，兩組差異有統計學意義（P<0.05）。本研究結果顯示：宮頸癌患者Ki-67≤5%組的中位DFS為90個月（95%可信區間：85.7～92.7月）；Ki-67>5%組的中位DFS為63個月（95%可信區間：53.1～70.3月），兩組差異有統計學意義（P<0.05）。Suzuki等通過晚期宮頸癌細胞有絲分裂指數（MI）與Ki-67標記指數（Ki-67-LI）相結合，按照公式pMI=MI/Ki-67-LI計算出增殖細胞群有絲分裂指數，結果顯示pMI對腫瘤的局部控制率影響最大。Agoff等嘗試采用Ki-67定量分析患者的預后，結果發現Ki-67的表達指數對判斷惡性腫瘤患者的預后有很大意義。Hanprasertpong等研究表明：Ki-67≥30%組預后比Ki-7<30%組差。本研究結果顯示，Ki-67≤5%組的局部控制率高于瞄67>5%組，兩者差異有統計學意義（P<0.05）。經預后影響因素分析顯示，Ki-67為預后的影響因素之一。

綜上所述，Ki-67可能參與了ICC的演變過程，但具體機制尚不清楚，需經大樣本、多種蛋白因子研究得以驗證，并且以前瞻性隨機對照研究方法作為首選，以求研究結果更具說服力。