高效液相色譜法測定連花清瘟顆粒中連翹酯苷A含量

蔡清宇　唐慧慧　李曼玲　康琛

摘要：目的 建立連花清瘟顆粒中連翹酯苷A含量的高效液相色譜測定方法，為更好地控制連花清瘟顆粒質量提供參考。方法 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動相為乙腈-0.4%冰醋酸（15∶85），流速為1 mL/min，柱溫為室溫，檢測波長330 nm。結果 連翹酯苷A在0.1～1.4 μg范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=1240X-16.82（r=0.999 9），平均回收率為101.53%，RSD=1.71%。結論 本方法準確、可靠、重復性好，能測定連花清瘟顆粒中連翹酯苷A含量，可作為連花清瘟顆粒質量控制的含量檢測方法。

關鍵詞：連花清瘟顆粒；連翹酯苷A；高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.02.027

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）02-098-03

Content Determination of Forsythoside A in Lianhua Qingwen Granules by HPLC CAI Qing-yu1， TANG Hui-hui1， LI Man-ling2， KANG Chen2 （1. Navy General Hospital， Beijing 100048， China； 2. Institute of Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

Abstract： Objective To provide a better reference for the quality control of Lianhua Qingwen Granules by establishing the method for the content determination of Forsythoside A in Lianhua Qingwen Granules by HPLC. Methods The chromatographic conditions were Agilent C18 as chromatographic column， acetonitrile-0.4% acetic acid （15∶85） as the mobile phase； the flow rate was 1.0 mL/min； the column temperature was at room temperature； the detection wavelength was 330 nm. Results Forsythoside A was in a good linear range between 0.1–1.4 μg； regression equation was Y=1240X?16.82 （r=0.999 9）； the average recovery was 101.53%， RSD=1.71%.Conclusion The method is accurate， reliable， and with good repeatability， which can be used for the content determination of Forsythoside A in Lianhua Qingwen Granules and the quality control of Lianhua Qingwen Granules.

Key words： Lianhua Qingwen Granules； Forsythoside A； HPLC

連花清瘟顆粒收載于2010年版《中華人民共和國藥典》第二增補本，同時收載的其他劑型還有連花清瘟片、連花清瘟膠囊[1]，均由連翹、金銀花、麻黃（炙）、苦杏仁（炒）、石膏、板藍根、綿馬貫眾、魚腥草、廣藿香、大黃、紅景天、薄荷腦、甘草13味中藥組成。該組方源于麻杏石甘湯與銀翹散，功能清瘟解毒、宣肺泄熱，臨床廣泛用于中醫辨證屬表寒里熱證患者的治療，對非重癥社區獲得性肺炎在聯合西醫抗感染治療的基礎上治愈率更高，安全性好[2-4]。關于連花清瘟顆粒及另2個劑型的質量標準，目前只收載了連翹苷的含量測定項，未見制劑中連翹酯苷A的含量測定及限度規定。本研究建立高效液相色譜法（HPLC）測定其主要成分連翹酯苷A含量的方法，為提高該制劑質量標準提供依據。

1 儀器與試藥

安捷倫1100液相色譜儀，CHEM32工作站，G1314A UV檢測器；色譜柱kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；超聲波清洗器KQ-100（昆山市超聲儀器有限公司）。

連翹酯苷A對照品購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用（批號111810-201304）；連花清瘟顆粒為市售，北京以嶺藥業有限公司生產（批號1402080、1403004、1403079）；乙腈，甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 稱取連翹酯苷A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0. 1 mg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70% 甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率100 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.1.3 陰性對照溶液的制備 取陰性樣品（除連翹外其他藥材制成的成藥），按“2.1.2”項下方法制備，即得。

2.2 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈- 0.4%冰醋酸（15∶85）為流動相，檢測波長330 nm，流速1 mL/min，進樣量10 μL，理論板數按連翹酯苷A峰計算不低于3 000[5]。

2.3 線性關系考察

精密吸取對照品溶液1、4、10、12、14 μL分別進樣測定，記錄色譜圖，以對照品的峰面積為縱坐標，對照品量（μg）為橫坐標進行線性回歸，連翹酯苷A回歸方程為Y=1240X+16.82，r=0.999 9，表明連翹酯苷A在0.1～1.4 μg范圍內線性關系良好。

2.4 精密度試驗

取上述已制備的供試品溶液，連續進樣6次，記率錄色譜圖，結果計算得連翹酯苷A峰面積RSD=0.82%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗

取本品顆粒劑，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，分別于第0、1、2、4、8、12、24 h進行測定，每次進樣10 μL，結果供試品中連翹酯苷A含量的RSD=0.85%，表明該方法制備的供試品溶液在24 h內含量基本不變。

2.6 重復性試驗

選擇同一批號樣品，按“2.1.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別進樣，測定峰面積。結果供試品中連翹酯苷A含量RSD=1.88%，重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取已知含量的連花清瘟顆粒，按1∶1比例分別添加連翹酯苷A對照品，按“2.2”項下色譜條件，分別進樣，記錄色譜圖，測定，結果表明平均回收率為101.53%，RSD=1.71%，見表1。

2.8 空白試驗

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，進樣10 μL，結果連花清瘟顆粒的陰性對照溶液，在連翹酯苷A處未出現相同保留時間的色譜峰，表明無干擾，此方法可行。色譜圖見圖1。

2.9 樣品測定

取連花清瘟顆粒3批，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，按上述色譜條件，平行測定3次，采用外標法計算含量，結果見表2。

3 討論

本試驗主要參考2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）中連翹藥材中連翹酯苷A測定條件測定連花清瘟顆粒中連翹酯苷A含量，流動相為乙腈- 0.4%冰醋酸（15∶85），同時對流動相比例乙腈-0.4%冰醋酸（17∶83）及乙腈-0.4%冰醋酸（20∶80）進行了研究，結果均不理想，故仍選用乙腈-0.4%冰醋酸（15∶85）為流動相。

根據文獻[5]確定采用甲醇后分別對60%、70%、80%不同濃度的溶劑進行試驗，結果表明70%甲醇制備的樣品測得含量較高，故選用70%甲醇作為提取溶劑。本研究分別對15、20、25 mL溶劑用量進行試驗，結果表明，25 mL甲醇制備的樣品測得含量較高，故選擇加入25 mL甲醇。確定以上條件后，分別對冷浸、超聲處理、回流3種不同提取方法進行試驗，結果表明，超聲處理及回流方法測得樣品含量接近，冷浸略低，故選用超聲處理作為提取方法。然后分別對超聲處理20、30、40 min進行試驗，結果表明，超聲處理20 min略低，30、40 min測得樣品含量接近，故選用超聲處理30 min。

另外，本研究測得3批樣品中的連翹酯苷A含量分別為15.42、17.34、18.70 mg/袋，故暫定其每袋含連翹酯苷A不得少于13 mg。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中國人民共和國藥典：第二增補本[M].北京：中國醫藥科技出版社，2013：35-36.

[2] 李彬，孟泳.蓮花清瘟顆粒治療急性上呼吸道感染60例臨床觀察[J].中國民族民間醫藥，2014，17（9）：38-39.

[3] 周三軍，方強.連花清瘟顆粒治療痰熱壅肺型社區獲得性肺炎46例[J].浙江中醫雜志，2014，48（11）：805.

[4] 王代平，黃巍.連花清瘟顆粒治療非重癥社區獲得性肺炎療效觀察[J].熱帶病與寄生蟲學，2014，12（3）：176-177.

[5] 國家藥典委員會.中國人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：159-160.

（收稿日期：2015-05-14）

（修回日期：2015-06-01；編輯：陳靜）