沉降式液基細胞學制片質量12 000例分析

賀德智（勝利石油管理局河口醫院病理科，山東東營257200）

沉降式液基細胞學制片質量12 000例分析

賀德智（勝利石油管理局河口醫院病理科，山東東營257200）

目的提高液基細胞學制片的質量。方法收集該院2009年12月至2015年12月共12000例婦科患者，采用廣州安必平醫藥科技有限公司生產的沉降式液基細胞學系統進行制片。結果通過總結經驗改進制片時的操作技術，提高了涂片質量。結論通過對制片過程中嚴格的質量控制，使每一步都做到細致操作，完全能做出符合診斷要求的涂片。

宮頸腫瘤；細胞診斷學；沉降式；液基細胞學

宮頸癌是女性腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一，發病率僅次于乳腺癌，居女性惡性腫瘤第2位，但在一些發展中國家和地區仍居第1位［1］，嚴重危害婦女的生命。而在我國的發病率呈明顯上升和年輕化的趨勢［2］，患病率以每年2%～3%的速度增長［3］。因而宮頸病變篩查顯得尤為重要，各種檢查方法也應運而生，沉降式液基細胞學制片就是其中的一種，相比于其他種類，該方法通過固定液保存標本，再經過一系列的技術處理，去掉了標本中的血液、黏液等雜質，利用自然沉降原理，將具有診斷意義的細胞沉淀下來，制成薄片，片內細胞豐富，分布均勻，易于辨認。自2009年開始，本院病理科使用廣州安必平醫藥科技有限公司生產的沉降式液基薄層細胞學檢查系統，通過對大量標本制片，積累了一些制片及染色經驗，現介紹如下。

1　資料與方法

1.1一般資料由安必平醫藥科技公司提供成套設備與耗材。選取本院2009年12月至2015年12月收治的婦科患者12 000例，年齡20～65歲。

1.2方法

1.2.1標本采集由婦科醫生進行標本的采集。

1.2.2液基薄層細胞學片的制備將標本瓶放置在漩渦混合器上振蕩約30 s；將標本瓶、離心管、載玻片及申請單對應寫上編號；在12 mL離心管中注入4 mL分離提取液；使用自動樣本轉移機轉移8 mL樣本；第1次離心：1 200 r/min，2 min，吸去8 mL上清液；第2次離心：2 200 r/min，10 min，棄上清液；置漩渦混合器上振蕩約30 s。

1.2.3制片染色將處理好的載玻片放置在染色板上并扣上制片染色艙，使用安必平液基細胞沉降式自動制片染色系統進行制片及染色（染色艙的直徑決定了涂片直徑為1.3 cm）。

1.2.4濕式封片拆除染色艙，將片子放入無水乙醇內進行脫水（2次）；二甲苯內透明（2次）；中性樹膠濕式封片。

1.3細胞學診斷采用2001年TBS分類標準［3］：（1）無上皮內病變或惡性病變（NILM）；（2）意義不明的非典型鱗狀細胞（ASCUS）和非典型腺細胞（AGC）；（3）不除外高度鱗狀上皮內病變的非典型鱗狀細胞（ASC-H）；（4）低度鱗狀上皮內病變（LSIL）；（5）高度鱗狀上皮內病變（HSIL）；（6）鱗狀上皮癌（SCC）；（7）非特異性不典型子宮頸管腺細胞（AGC-NOS）；（8）不典型子宮頸管腺細胞傾向于腫瘤（AGC傾向腫瘤）；（9）宮頸原位腺癌（AIS）及腺癌。根據液基薄層細胞學檢測報告系統（TBS報告系統）：LSIL包含人乳頭瘤病毒（HPV）感染和宮頸上皮內瘤變（CIN）Ⅰ級，HSIL包含CINⅡ級、CINⅢ級或鱗狀上皮原位癌（CIS）；該系統也對標本質量進行評估，對微生物和炎癥程度或萎縮等分別加以描述。TBS報告正常或炎性反應作為細胞學陰性，ASCUS及以上病變為細胞學陽性。

2　結　果

2.1制片及染色結果12 000份片子中，有11 736份達到制片標準，甲片率97.8%，對不滿意片子進行分析，找出原因并進行解決。細胞染色的結果：整張涂片背景干凈，上皮細胞核呈深藍色，核仁紅色；角化細胞細胞質粉紅色，不全角化細胞細胞質橙黃色，角化前細胞細胞質淡藍或淡綠色。

2.2TBS細胞學診斷結果NILM者11580例（96.50%），ASC-US者244例（2.03%），ASC-H者14例（0.12%），LSIL者242例（2.02%），HSIL者25例（0.21%），SCC者8例（0.07%）。檢出霉菌504例（4.20%），滴蟲12例（0.10%），線索細胞150例（1.25%）。

2.3與病理組織學結果進行對照分析細胞學診斷中，部分ASC-US和 LSIL以上鱗狀上皮病變（包括ASC-H）均行陰道鏡下活檢，病理組織學檢測結果：CINⅠ級254例（2.12%），CINⅡ級26例（0.22%），CINⅢ級8例（0.07%），SCC 7例（0.06%）。

3　討　論

傳統巴氏涂片中，53%～90%為假陰性的原因是涂片中沒有能診斷的細胞［4］，有研究發現，常規涂片有80%以上的細胞隨取材器被丟棄［5］。另外，傳統涂片質量差，涂片不均勻或過厚，血液、黏液等雜質掩蓋了不正常細胞，或細胞重疊影響了對異常細胞的識別能力［6］。

液基薄層細胞學技術是1996年美國食品藥品監督管理局（FDA）批準上市的改良細胞學技術，其突出優點是標本的利用率高，符合不丟棄任何所取材料的原則［7］。國內從2001年開始做液基薄層細胞學檢查篩選宮頸癌的研究［8］。與傳統涂片相比，安必平沉降式液基薄層細胞學檢查系統具有以下優勢：能夠有效地收集細胞；標本固定及時，細胞無蛻變、固縮等現象，核漿比的改變易辨認；有效去除了血液、黏液等雜質成分，保證了制片的質量；一次能制成24張片子，非常適合大規模查體工作，減少了技術人員的工作量；機器標準化、自動化的染色保證了染色效果的穩定性；獨立的染色艙能有效避免交叉污染。最后制成的涂片中細胞層次薄、平鋪，而且能呈現出腫瘤細胞特有的立體結構，這使得診斷的準確性、敏感性都比傳統涂片明顯提高。該技術漏診率低，無創傷，因此成為篩查癌前病變的主要手段，對宮頸癌的早防、早治起到積極的作用［9］。

由于制片中的環節比較多，如取材、固定、涂片、染色、封固，既有手工操作也有機器操作，在實際工作中任何一個步驟操作不規范，都會影響到最后的制片質量。因而應注意以下幾個方面：（1）提前與婦科醫生進行溝通，提高標本采集合格率。90%以上的宮頸癌來自頸管交界處的細胞［10］，所以應采集到病變部位和宮頸的移行區（鱗柱交界區）細胞。取材時還要注意力度要適當，當患者宮頸糜爛嚴重或分泌物過多時，可用紗布輕輕擦拭后取樣。（2）第2次離心后的振蕩非常重要，如果振蕩不充分，細胞團沒有被打散，在片子上的細胞會堆積在一起，影響診斷，作者的經驗是：振蕩一會兒觀察一下試管，試管內呈均勻的混懸狀，則是合適的；反之，如果在清亮的液體中見到成團狀漂浮物，則應繼續振蕩直至細胞塊充分打散為止（絕經期女性例外）。（3）在向離心管中注入緩沖液后，應逐個檢查一遍，當管內的混懸液特別濃稠時，可向管內再次注入少量的緩沖液，稀釋一下，以避免制片時，細胞層過厚。反之，當管內的混懸液特別稀時，可將整管的液體全部倒入染色艙內（向染色艙移液時，移液量一般設為300 μL）。（4）安必平醫藥科技有限公司提供的是改良的巴氏染色法，試劑的用量和染色時間均可以調整，這需要在工作中不斷總結經驗，找到最合適的用量和染色時間。當染液使用時間過長時，要及時更換。

總之，沉降式液基細胞學制片是一種簡單易操作的方法，比傳統涂片的檢測陽性率較高。掌握上述注意事項，規范操作過程，完全能夠制作出一張滿意的液基細胞學涂片，為正確的細胞學診斷提供保證。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2016.14.041

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1009-5519（2016）14-2223-03

（2016-03-26）