豬流行性腹瀉的實驗室診斷技術

梁喬

（遼寧省動物疫病預防控制中心，遼寧 沈陽 110164）

豬流行性腹瀉的實驗室診斷技術

梁喬

（遼寧省動物疫病預防控制中心，遼寧 沈陽 110164）

豬流行性腹瀉于2010年在中國暴發并流行至今，該病發生范圍廣、強度大、致死率高，且常與豬傳染性胃腸炎、豬輪狀病毒等傳染病混合感染，臨床診斷并不能對該病確。本文介紹了目前常用的實驗室診斷方法，旨在對該病的防控提供一定的技術依據。

1 病原學檢測方法

1.1 反轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）

吳玉璐等針對PEDV的ORF3基因的缺失區設計引物，建立了可區分PEDV野毒株與疫苗株的RT-PCR診斷方法，其敏感性可達100TCⅠD50/0.1mL，該方法可通過電泳結果根據電泳條帶大小即可得出結論。

1.2 環介導等溫擴增技術（LAMP）

湯小真等針對PEDV的NP基因保守區設計了1套LAMP擴增引物，該方法可根據鈣黃綠素顯色肉眼可視化擴增結果，可檢出的最低cDNAD的量是3.73Pg/μL，是RT-PCR方法檢出量的10倍，該方法無需昂貴的儀器設備，適合基層養殖場實驗室使用。

1.3 熒光RT-PCR檢測方法

劉鄧等根據PEDV的N基因設計了引物和探針，建立了能夠快速檢測出PEDV含量的TaqMan熒光定量PCR方法，敏感性為1×101 copies/μL，特異性好與其他豬的病毒無交叉反應。應用該方法對60份臨床樣品進行熒光RT-PCR和普通RT-PCR方法檢測，結果表明建立的熒光RT-PCR方法檢出率明顯高于普通RT-PCR方法。

2 血清學檢測方法

2.1 酶聯免疫吸附試驗（ELⅠSA）

ELⅠSA方法是血清學檢測的經典方法之一，目前針對PEDV國內學者也進行了大量的研究，建立了相關的ELⅠSA診斷方法。陳茹等使用聚乙二醇（PEG）沉淀法分離純化PEDV抗原，應用該抗原包被，建立了Dot-ELⅠSA方法檢測PEDV抗體?！?br>