市售油性記號筆對水產品中結晶紫檢測污染研究

◎ 李 軒，曾麗珠，張 昊

（陽江出入境檢驗檢疫局，廣東 陽江 529500）

市售油性記號筆對水產品中結晶紫檢測污染研究

◎ 李 軒，曾麗珠，張 昊

（陽江出入境檢驗檢疫局，廣東 陽江 529500）

本文研究用超高效液色譜串聯質譜法（UPLC/MS/MS）測定市售4種常見品牌的黑色、藍色、紅色油性記號筆中結晶紫（含隱性結晶紫）的含量。待測筆樣直接在稱量紙上書寫若干直線，再用乙腈提取，UPLC/MS/MS測定，內標法定量。結果表明，4種品牌的黑色、藍色油性筆均檢出結晶紫（含隱性結晶紫），而紅色油性筆中結晶紫（含隱性結晶紫）含量較低或未檢出。水產品檢測過程中樣品應避免直接接觸到油性記號筆的染料，以防止樣品在檢測過程中的本底污染和假陽性。

超高效液色譜串聯質譜法；結晶紫；隱性結晶紫；油性筆

結晶紫為三苯甲烷類染料，常用于魚類水霉病等寄生蟲病的防治或作為消毒劑用于鮮活魚類運輸過程中。研究表明，結晶紫進入人體，可以通過生物轉化，還原代謝成脂溶性隱性結晶紫。隱性結晶紫具有高毒性、高殘留和致癌、致突變等副作用，嚴重威脅著消費者的身體健康，是一種極為有害的消毒劑[1]。美國、韓國、日本等許多國家已要求水產品中結晶紫不得檢出。目前結晶紫在水產品中殘留檢測的方法有HPLC、HPLC/MS/MS、UPLC/MS/MS等，但在樣品前處理過程中可能會使用到含量存在結晶紫目標化合物的物品。其中油性記號筆是一大污染源，經常會用于實驗過程中對各種容器的標志。許榮富 等[2]研究發現，結晶紫、甲基紫、堿性品藍是市售藍色圓珠筆中的主要染料。李心倩 等[3]研究發現，市售藍色圓珠筆油墨所采用的主要色料是結晶紫。因此，研究和分析油性記號筆中結晶紫的含量，控制其在檢測過程中對樣品的污染，能有效提高檢測水平。

1 實驗過程

1.1 儀器

超高效液相色譜-串聯質譜聯用儀（Waters Quattro Premier XE）：配有電噴（ESI）離子源；離心機；漩渦振蕩器（IKA）；超聲波振蕩器。

1.2 試劑

結晶紫（CV）、隱性結晶紫標準品（LCV），Dr.Ehrenstorfer GmbH；同位素內標氘代結晶紫（CV-D6）、同位素內標氘代隱性結晶紫（LCV-D6），Witega；乙腈、乙酸、無水乙酸銨，均為色譜純。10 mmol/L乙酸銨；中性氧化鋁柱。

1.3 油性記號筆

日本斑馬 MO-120-MC，日本櫻花XYK-T，晨光MG-2130，得力6824，4種品牌均含黑、藍、紅3種顏色。

1.4 試樣檢測

（1）標準溶液的配制。準確稱取適量的結晶紫、隱性結晶紫內、外標標準品，用乙腈按需逐級稀釋分別配制成結晶紫、隱性結晶紫混合標準溶液和結晶紫、隱性結晶紫內標混合標準溶液。

（2）提取。取各品牌不同顏色的記號筆，分別在稱量紙上劃寫四道5 cm橫線，晾干后置于塑料離心管中，加入100 μL內標混合標準溶液（100 ng/mL），加入10 mL乙腈，漩渦振蕩1 min，超聲振蕩5 min，4 000 r/min離心10 min。空白稱量紙作為空白對照。

（3）凈化。移取樣品溶液加至已活化的中性氧化鋁柱上，用玻璃試管接受流出液，2 mL乙腈洗滌柱子，收集流出液，45 ℃氮氣吹至近干，1+1乙腈-10 mmol/L乙酸銨定容至1.00 mL，經0.2 μm濾膜過濾后上機測定。

1.5 儀器條件

（1）色譜條件。A：0.1%甲酸乙腈，B：10mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃，進樣量：10 μL；總運行時間：4 min；色譜柱：Acquity UPLC BEH C18色譜柱，2.1×50 mm，1.7μm。

（2）質譜條件。離子化方式：ESI positive；毛細管電壓：1.0 kV；離子源溫度：110 ℃；脫溶劑氣溫度：氮氣，800 L/Hr；采集模式：MRM模式。

1.6 標準曲線制作

取適量的混合標準溶液，分別加入內標混合標準溶液（100 ng/mL）100 μL，50%1+1乙腈-10mmol/乙酸銨溶液稀釋成濃度為0.0、0.2、0.5、1.0、2.0 ng/mL和5.0 ng/mL標準系列，依次按從低到高濃度順序分別進樣檢測，制作標準工作曲線。進樣量10 μL，內標法定量。

2 結果分析

上述品牌各色記號筆中結晶紫（含隱性結晶紫）含量見表1。由表1可知，各品牌的黑色、藍色油性記號筆中均有檢出結晶紫，且藍色筆均含較高濃度的結晶紫。各品牌的紅色油性記號筆中結晶紫含量較低或未檢出。研究結果表明，水產品檢測過程中樣品應避免直接接觸到油性記號筆的染料，以防止樣品在檢測過程中的本底污染和假陽性。

表1 各品牌油性記號筆中結晶紫和隱性結晶紫的含量表

[1]劉 軍，胡華軍，張明洲，等.漁藥孔雀石綠的毒性、危害和檢測現狀[J].浙江農業學報，2006（5）：397-400.

[2]許榮富，盧 青，鄒 洪，等.反相高效液相色譜法對藍色圓珠筆分類的研究[C].中國化學會有機分析及生物分析學術研討會會議，2007.

[3]李心倩，王彥吉，史曉凡，等.圓珠筆油墨字跡色痕的高效液相色譜分析方法[J].分析化學，2004（5）：657-660.

Research on the Detection of the Contamination of Crystal Violet in Aquatic Products by Commercial Marking Pen

Li Xuan, Zeng Lizhu, Zhang Hao
(Yangjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Yangjiang 529500, China)

This paper studied the content of crystal violet (including leucocrystal violet) in three diferent colors marking pen(black ,blue and red) by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC/MS/MS). The results showed that the black and blue marking pen were detected in the crystal violet (including leucocrystal violet), while the red marking pen in the crystal violet (including leucocrystal violet) content is low or not detected. In the process of aquatic product inspection, the sample should avoid direct contact with the marking pen, in order to prevent the background pollution and false positive.

UPLC/MS/MS; Crystal violet; Leucocrystal violet; Oil pen

TS207

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.24.038