抑制環氧合酶對苯腎上腺素所致大鼠主動脈收縮的影響

楊逸童，房龍梅，李亞君，王 燕，牛龍剛，劉 宇，張明升

抑制環氧合酶對苯腎上腺素所致大鼠主動脈收縮的影響

楊逸童，房龍梅，李亞君，王 燕，牛龍剛，劉 宇，張明升

目的 通過觀察環氧合酶(COX)抑制劑和血栓素A2(TXA2)受體阻斷藥對苯腎上腺素(PE)所致大鼠胸主動脈收縮的影響，探討前列腺素類物質及TXA2受體激動在PE所致收縮中的作用。方法 采用Powerlab 血管張力記錄系統記錄肌張力，通過比較用不同抑制劑前后血管對PE的收縮反應的差異，探討PE收縮與前列腺素類物質的關系。結果 吲哚美辛(10-5mol/L)可顯著抑制PE(10-8mol/L～10-6mol/L)的收縮作用，最大抑制收縮百分比為(46.26±2.54)%，且此作用無內皮依賴性；而對KCl(20 mmol/L～108 mmol/L)的收縮則無顯著影響。COX-1抑制劑(SC-560，10-5mol/L)對PE的縮血管作用無確切抑制作用，而COX-2抑制劑(NS-398，10-5mol/L)則明顯的抑制PE對主動脈的收縮，最大抑制收縮百分比為(61.83±5.57)%。TXA2阻斷劑對PE縮血管作用均無顯著影響。 結論 PE可通過COX，且主要是COX-2，收縮血管。

吲哚美辛；主動脈環；環氧合酶；血栓素A2；苯腎上腺素

前列環素(prostaglandin，PG)是存在于動物和人體中的一類不飽和脂肪酸組成的，具有多種生理作用的活性物質。花生四烯酸(arachidonic acid，AA)是這個大家族的共同前體。AA在生物體內主要在磷脂酶A2和磷脂酶C的作用下分解成游離的AA。游離的AA在環氧合酶(cyclo-oxygenase，COX)作用下，先形成不穩定的環內過氧化物(PGG2和PGH2)，隨后PGG2、PGH2又經不同的下游酶作用生成各種經典型PGs，如PGE2/PGD2和PGF2。除此之外，PGH2還能代謝成為活性更強、生物功能更復雜的兩種類前列腺素，一種是血栓素A2(thromboxanlA2，TXA2)，另一種是前列環素I2(prostacylin，PGI2)[1-2]。

吲哚美辛(Indomethacin，Indo)又名消炎痛，為人工合成的吲哚衍生物，是一種較強的非選擇性COX抑制劑，屬非甾體類抗炎藥，具有抗炎、鎮痛及抗血栓的作用。最初主要用于治療風濕性、類風濕性關節炎、急性痛風等。隨著對吲哚美辛藥理作用研究的深入，逐漸被臨床上用于泌尿系統、心血管系統、消化系統、神經系統等疾病的治療。COX最主要的同工酶是：COX-1、COX-2[3-4]。本課題主要研究Indo是否參與苯腎上腺素(phenylephrine，PE)縮血管作用；如果參與，那么與COX-1、COX-2及其下游產物是否有關。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 吲哚美辛、COX-1抑制劑(SC-560)、COX-2抑制劑(NS-398)、TXA2抑制劑(SQ-29458、ICI-192605)均購自Sigma公司，PE為上海禾豐制藥有限公司生產，其余試劑均為市售分析純。

1.2 實驗動物 健康雄性SD大鼠，體重220 g～280 g，由山西醫科大學實驗動物中心提供。

1.3 實驗儀器 BL-420F生物信號采集分析系統及張力換能器(澳大利亞埃德國際貿易公司)、SartoriusBS124S精密天平(北京賽多利斯生產)、PHS-3C精密pH計(上海雷磁生產)、HSS-1B數字式超級恒溫泵(成都儀器廠)。

1.4 生理性營養液 正常生理鹽水營養液PSS成分為：NaCl 144 mmol/L，KCl 5.8 mmol/L，MgCl21.2 mmol/L，CaCl22.5 mmol/L，Glucose 11.1 mmol/L，HEPES 5 mmol/L。K-PSS成分為：NaCl 89.8 mmol/L，KCl 60 mmol/L，MgCl21.2 mmol/L，CaCl22.5 mmol/L，Glucose 11.1 mmol/L，HEPES 5 mmol/L。上述營養液均用2 mol/L NaOH將pH值調至7.40，預熱至37 ℃。本實驗所述濃度均為浴管內試劑的終濃度。

1.5 實驗方法

1.5.1 大鼠離體主動脈環的制備與基本實驗程序 將雄性大鼠脫臼處死，迅速取出主動脈，將其放入O2飽和的4 ℃PSS液中(pH=7.40)。固定好后剔除血管環周圍組織，并將其剪成2 mm～3 mm的血管環，用兩根不銹鋼微型掛鉤貫穿血管腔，一端固定，另一端與張力換能器相連。其靜息張力調節為2.2 g，經PowerLab生物信號測定系統來記錄血管環張力變化。實驗期間浴管內的5 mL液體為持續通以100%O2、pH值為7.40、37 ℃的PSS。所有動脈環用60 mmol/L KCl多次刺激。當標本對刺激穩定時，即連續2次同樣的刺激所引起的收縮幅度差別<5%時，開始正式實驗。部分血管環去內皮：用與血管內徑相適的棉棒穿過管腔，擦除內皮，用60 mmol/L KCl預收縮血管，收縮達坪值后，加入Ach(10-5mol/L)，血管環張力變化幅度<5%時，可認為內皮去除完全。

1.5.2 吲哚美辛對PE縮血管作用的影響 主動脈環穩定2 h后，向浴管中累積加入PE，使浴管內終濃度分別達到10-8mol/L、3×10-8mol/L、10-7mol/L、3×10-7mol/L、10-6mol/L，構建PE濃度-收縮效應曲線。當達最大收縮效應時，用新鮮的PSS沖洗標本3次，30 min后重新構建PE濃度-收縮效應曲線。當連續兩次同樣的刺激所引起的收縮幅度差別<5%時，向浴管內加入Indo，使浴管內終濃度達到10-5mol/L。孵育30 min后，重建PE濃度-收縮效應曲線，觀察Indo對PE縮血管作用的影響。

1.5.3 環氧合酶選擇性抑制劑對PE縮血管作用的影響 向浴管內分別加入COX-1抑制劑SC-560、COX-2抑制劑NS-398，使浴管內終濃度均達到10-5mol/L，孵育30 min后，在此藥物濃度基礎上重建PE濃度-收縮效應曲線，觀察環氧合酶選擇性抑制劑對PE縮血管作用的影響。

1.5.4 TXA2阻斷劑對PE縮血管作用的影響 主動脈環穩定2 h后，向浴管中加入PE，使浴管內終濃度達到10-6mol/L，收縮達坪值后用新鮮的PSS沖洗標本3次，30 min后再次加入同濃度的PE，當連續兩次同樣的刺激所引起的收縮幅度差別<5%時，向浴管內分別加入TXA2阻斷劑SQ-29458和ICI-192605，使浴管內終濃度均達到10-5mol/L。孵育30 min后，在此藥物濃度基礎上再次加入終濃度為10-6mol/L的PE，觀察SQ-29458和ICI-192605對PE縮血管作用的影響。

2 結 果

2.1 Indo對PE縮血管作用的影響 無論是內皮完整還是去內皮，Indo(10-5mol/L)均可顯著抑制PE(10-8mol/L～10-6mol/L)的縮血管作用(P<0.05)，其最大抑制率分別為(46.26±2.54)%和(46.07±11.93)%，兩者之間差異無統計學意義。而Indo對KCl(20 mmol/L～108 mmol/L)的縮血管作用則無顯著影響(P>0.05)。詳見圖1。

注：**P<0.05。

2.2 選擇性COX抑制劑對PE縮血管作用的影響 COX-1抑制劑SC-560(10-5mol/L)對PE縮血管作用并無確切抑制收縮的作用，COX-2抑制劑NS-398(10-5mol/L)則可顯著抑制PE的縮血管作用(P<0.05)，其最大抑制率為(61.83±5.57)%。詳見圖2。

注：**P<0.05。

2.3 TXA2阻斷劑SQ-29458、ICI-192605對PE縮血管作用的影響 TXA2阻斷劑SQ-29458、ICI-192605對PE10-6mol/L所引起的縮血管作用并無顯著的影響(P>0.05)。詳見表1。

表1 SQ-29458、ICI-192605對PE縮血管作用的影響(±s)

3 討 論

本實驗旨在研究COX抑制劑對PE所致大鼠離體胸主動脈環收縮作用的影響。結果表明Indo可抑制PE的縮血管作用，且與血管內皮無關。此結果提示COX參與了PE的縮血管作用。COX有三種同工酶，最主要的是COX-1和COX-2。而Indo是非選擇性COX抑制劑，可同時抑制COX-1和COX-2。那么，COX-1和COX-2是否均參與了PE的縮血管效應呢？本研究進一步利用選擇性COX抑制劑來解釋這個問題。結果表明，NS-398對PE引起的主動脈收縮有抑制作用，而SC-560幾乎無抑制作用。這就提示COX-2參與了PE的縮血管作用。這與文獻[5]中指出的NS-398抑制PE對大鼠主動脈的收縮作用相符，同時他們通過放線菌酮實驗證實了NS-398發揮作用與內皮無關，提示COX-2參與PE的收縮作用時其部位可能位于平滑肌層和主動脈外層，免疫印跡結果也表明在去內皮的血管上也能檢測出COX-2。

COX是前列環素合成的關鍵限速酶，可催化AA生成各種前列環素(如PLC、PLA2、PLD等[6-9])和TXA2。目前認為TXA2和PGI2是這些下游產物中活性最強的物質。本實驗觀察到TXA2的兩種阻斷劑SQ-29458和ICI-192605對PE縮血管作用無顯著影響。PGI2對血管的效應與TXA2的作用相反，但具體對PE收縮大鼠離體主動脈血管環有何影響，仍需通過進一步實驗證實。也應考慮AA的其他代謝產物對PE縮血管作用有無影響。

綜上所述，本實驗提示COX-2參與PE的縮血管作用。本實驗為離體實驗，環氧合酶抑制劑在在體動物上的作用及機制仍需更多實驗研究。

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(本文編輯郭懷印)

山西醫科大學科技創新基金(No.01201104)；山西醫科大學青年基金(No.02200811)；山西醫科大學博士啟動基金(No.03200707)

山西醫科大學(太原 030001)

劉宇，E-mail：solayyt@sina.com

R331

A

10．3969/j．issn．1672-1349．2016．04．009

1672-1349(2016)04-0364-03

2015-09-12)