影響不同組織常規(guī)制片質(zhì)量的因素探討

王記紅　王曉蘭

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影響不同組織常規(guī)制片質(zhì)量的因素探討

王記紅1王曉蘭2

【摘要】本文主要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)分析影響肝臟、胰腺、淋巴結(jié)、骨髓及皮膚組織病理常規(guī)制片的因素，探討如何提高不同組織的制片質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】常規(guī)制片；質(zhì)量；因素

Discussion on Factors Influencing Routine Section Quality of Difierent Tissues WANG Jihong1WANG Xiaolan2, 1 Department of Pathology, Luohe Medical College, Luohe 462002, China, 2 Department of Histology and Embryology [Abstract] The paper aimed to investigate how to improve routine section quality of difierent tissues by analyzing factors infiuencing routine section quality of liver, pancreatic gland, lymph node, bone marrow and skin tissue, on the basis of experiences and literature review.

[Key words]Routine section, Quality, Factor

石蠟切片是病理科常規(guī)技術(shù)之一，病理切片的質(zhì)量直接影響臨床病理診斷的準(zhǔn)確性。因其制作過(guò)程復(fù)雜，步驟較多，每個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題都會(huì)影響切片的質(zhì)量。因不同組織的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)不同，需有制片過(guò)程中不同程度的改變，以制作出高質(zhì)量的組織切片。現(xiàn)根據(jù)日常工作經(jīng)驗(yàn)及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)將影響肝臟、胰腺、淋巴結(jié)、骨髓及皮膚組織制片質(zhì)量的因素分析如下。

1　肝臟

肝組織以實(shí)質(zhì)細(xì)胞為主，間質(zhì)細(xì)胞偏少，細(xì)胞間隙較大，且肝硬化時(shí)實(shí)質(zhì)細(xì)胞與纖維組織共存，處理不恰當(dāng)會(huì)引起組織切片變脆、裂隙增多、產(chǎn)生皺褶等問(wèn)題[1]。肝組織制片過(guò)程中需注意：（1）縮短組織在無(wú)水乙醇及石蠟中的時(shí)間，可改善切片出現(xiàn)碎屑、褶皺等現(xiàn)象，而透明時(shí)間一般控制在50 min內(nèi)，切片組織脆性明顯改善[2]。（2）根據(jù)計(jì)數(shù)處理組織塊的數(shù)量更換福爾馬林、乙醇和二甲苯，可保證試劑純度有效改善切片質(zhì)量。且可通過(guò)固定后過(guò)水清除福爾馬林產(chǎn)生的鹽類結(jié)晶，保護(hù)后續(xù)試劑。（3）制作切片時(shí)蠟塊冷凍溫度不能過(guò)低，以-5℃為佳，否則蠟塊過(guò)硬、切片過(guò)程中組織出現(xiàn)裂隙。

2　淋巴結(jié)

淋巴結(jié)細(xì)胞多、間質(zhì)少，被覆致密纖維結(jié)締組織包膜，這些特點(diǎn)使得淋巴結(jié)制片難度增加。淋巴結(jié)制片中要注意：（1）取材時(shí)避免擠壓，否則組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)會(huì)受到影響。（2）切片不宜太厚，2～3 μm為佳；刀片需銳利，最好用一次性刀片，這樣切出的組織薄；烤片溫度不宜過(guò)高，否則引起細(xì)胞變形[3-4]。（3）固定液多用10%緩沖福爾馬林，也有應(yīng)用B5固定液取得較好效果[5]，B5固定液沉淀蛋白但與蛋白結(jié)合不夠緊密，需現(xiàn)用現(xiàn)配，還可致汞污染，需要特殊的處理（碘處理）。固定時(shí)間不得少于12 h，固定時(shí)間不足，易出現(xiàn)“灰染”或“發(fā)白”現(xiàn)象。（4）浸蠟溫度過(guò)高組織易碎。（5）需根據(jù)切片厚度及蘇木精染液的新舊程度調(diào)整染色時(shí)間，并在顯微鏡下嚴(yán)格控制分色程度，蘇木素著色過(guò)深或過(guò)淺均影響細(xì)胞核內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)的觀察。

3　骨髓

骨髓組織含大量鈣鹽，質(zhì)硬，且含有一定量的脂肪，用常規(guī)石蠟切片技術(shù)制作易導(dǎo)致組織切片不完整、結(jié)構(gòu)破壞及細(xì)胞模糊不清。骨髓組織制片中需注意：（1）固定12 h者切片質(zhì)量較好。（2）脫鈣及除酸：有研究顯示用鹽酸脫鈣液脫鈣1～2 h者切片完整、HE染色良好、核漿對(duì)比分明[6]。也有研究顯示含有鹽酸、甲醛、甲酸、氯化鋁、冰乙酸和生理鹽水的混合脫鈣液脫鈣效果較好[7]，該脫鈣液有固定作用，且其中的冰醋酸能抵消甲醛引起的組織收縮和硬化，脫鈣時(shí)間大約2～3 h，如室溫較低，可在37℃恒溫培養(yǎng)箱里加溫。脫鈣終止時(shí)間的確定傳統(tǒng)用針刺法，也可用目測(cè)法，即浸在脫鈣液中的骨髓組織一旦離開(kāi)瓶底，處于懸浮狀態(tài)即終止，該法避免了針刺對(duì)組織的破壞。除酸方法一般為流水沖洗，耗時(shí)長(zhǎng)，有研究用1%氫氧化鈉溶液處理5 min，再用流水沖洗10 min能有效去酸，且HE染色效果較好[8]。（3）包埋時(shí)使骨髓長(zhǎng)軸與包埋框邊緣呈45°，以減少切片阻力。展片的水溫控制在48℃左右，水溫較高容易散開(kāi)。（4）骨髓切片HE染色時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)。也有研究認(rèn)為骨髓HE染色并不理想，應(yīng)用改良的蘇術(shù)素-Giemsa-伊紅（HE）染色結(jié)果可清晰顯示骨髓各類細(xì)胞[9]。

4　皮膚

皮膚組織結(jié)構(gòu)復(fù)雜，質(zhì)韌，且各層組織致密度也不同，按常規(guī)技術(shù)制作的切片常出現(xiàn)褶皺、厚薄不均、真皮組織松散、或淺層組織碎裂等問(wèn)題。皮膚組織制片需注意：（1）可用10%緩沖福爾馬林、FAA固定液及Bouin固定液。FAA固定液中的冰醋酸可抵消甲醛對(duì)組織的硬化作用；Bouin固定液中的苦味酸對(duì)皮膚有軟化作用，可降低組織硬度[10]；（2）為避免表皮脫水后變硬、脆，且保證皮下組織及真皮充分脫水，可延長(zhǎng)組織在95%乙醇中的時(shí)間，而適當(dāng)縮短在無(wú)水乙醇的時(shí)間。（3）包埋、攤片及切片：包埋時(shí)石蠟溫度應(yīng)與組織溫度相近，包埋后快速冷卻以形成一個(gè)整體，防止組織與周圍石蠟脫裂。為避免組織在攤片時(shí)破碎可先在30%酒精中漂片，因酒精張力低，然后在溫水中攤片。包埋時(shí)表皮與切面垂直，切片時(shí)表皮在上，速度均勻，不能太快，以防出現(xiàn)皺褶、碎裂等現(xiàn)象[11]。（4）因皮膚表層細(xì)胞核較多，故可適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。

如上所述，要想做出高質(zhì)量的病理常規(guī)切片不僅要考慮到影響制片的普遍因素：是否及時(shí)固定、取材大小、脫水和透明的時(shí)間、試劑的更換及環(huán)境溫度等，還要注意不同組織的特殊性，根據(jù)不同組織的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)在反復(fù)實(shí)踐的基礎(chǔ)上做出適當(dāng)調(diào)整以做出優(yōu)質(zhì)的組織切片。

參考文獻(xiàn)

[1] 董偉，俞花，冼志紅，等． 肝臟組織脫水流程及試劑更換改進(jìn)方法[J]． 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2014，30（9）：1060-1062．

[2]王德田，董建強(qiáng)． 實(shí)用現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)[M]． 北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2012：218-220．

[3]唐源，李俸媛，劉衛(wèi)平． 淋巴結(jié)常規(guī)制片技術(shù)體會(huì)[J]． 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2008，24（2）：235- 236．

[4]游慶朋． 提高常規(guī)活檢淋巴結(jié)制片質(zhì)量的方法探討[J]． 中國(guó)誤診學(xué)雜志，2007，7（3）：508-509．

[5]蔡瓊珍． 提高淋巴結(jié)組織切片質(zhì)量的體會(huì)[J]． 廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，23（6）：695-696．

[6]朱小蘭，張威，駱新蘭，等． 216例骨髓脫鈣時(shí)間的探討[J]． 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2003，19（6）：663．

[7]呂榮，南耘，胡蘊(yùn)玉． 骨切片固定液和脫鈣劑的篩選及效果觀察[J]． 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，1992，8（3）：228-229．

[8]甘啟煥，楊清緒，沈琴，等． 提高骨髓石蠟切片質(zhì)量的幾點(diǎn)體會(huì)[J]． 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2011，27（1）：107-108．

[9]胥維勇． 骨髓活檢組織石蠟切片制作的改進(jìn)及特殊染色的應(yīng)用[J]． 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，1994，10（3）：233-234．

[10]王玨，湯顯斌，劉濤． 皮膚切片制作時(shí)組織標(biāo)本的處理方法[J]．山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38（5）：451．

[11]田玉旺，李琳，朱紅艷，等． 提高皮膚組織制片質(zhì)量的技術(shù)探討[J]． 診斷病理學(xué)雜志，2012（4）：314-315．

綜述的格式和寫(xiě)法

綜述一般都包括題名、著者、摘要、關(guān)鍵詞、正文、參考文獻(xiàn)幾部分。其中正文部分又由前言、主體和總結(jié)組成。前言用200～300 字的篇幅，提出問(wèn)題，包括寫(xiě)作目的、意義和作用，綜述問(wèn)題的歷史、資料來(lái)源、現(xiàn)狀和發(fā)展動(dòng)態(tài)，有關(guān)概念和定義，選擇這一專題的目的和動(dòng)機(jī)、應(yīng)用價(jià)值和實(shí)踐意義，如果屬于爭(zhēng)論性課題，要指明爭(zhēng)論的焦點(diǎn)所在。主體主要包括論據(jù)和論證。通過(guò)提出問(wèn)題、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題，比較各種觀點(diǎn)的異同點(diǎn)及其理論根據(jù)，從而反映作者的見(jiàn)解。為把問(wèn)題說(shuō)得明白透徹，可分為若干個(gè)小標(biāo)題分述。

·論著·

doi：10．3969/j．issn．1674-9308．2016．03．037

【文章編號(hào)】1674-9308（2016）03-0057-02

【中圖分類號(hào)】G642

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

作者單位： 1 462002 漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校病理教研室；2 組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室