綠盲蝽卵的染色方法及其在棉花和苜蓿上的分布

李耀發，黨志紅，安靜杰，高占林，苑子夜，柳春紅，袁文龍，潘文亮

（1.河北省農林科學院植物保護研究所，河北省農業有害生物綜合防治工程技術研究中心，農業部華北北部作物有害生物綜合治理重點實驗室，河北保定071000；2.河北省植保植檢站，河北石家莊050011）

綠盲蝽卵的染色方法及其在棉花和苜蓿上的分布

李耀發1，黨志紅1，安靜杰1，高占林1，苑子夜1，柳春紅1，袁文龍2，潘文亮1

（1.河北省農林科學院植物保護研究所，河北省農業有害生物綜合防治工程技術研究中心，農業部華北北部作物有害生物綜合治理重點實驗室，河北保定071000；2.河北省植保植檢站，河北石家莊050011）

為了明確綠盲蝽在棉花和苜蓿植株上的產卵特性，采用改進的酸性品紅染色法，調查了綠盲蝽在棉花和苜蓿植株不同部位上的產卵情況。結果表明：綠盲蝽在棉花植株上的產卵部位與其趨嫩特性密切相關，主要產卵部位是嫩葉和腋芽，其次是幼蕾和嫩葉柄，這4個幼嫩部位上的產卵量占棉花植株總卵量的79.57%，而在其他部位上的產卵量較少；但是在苜蓿植株上，綠盲蝽的主要產卵部位是剛收割后的新茬和嫩尖，2個部位的產卵量分別占苜蓿植株總卵量的43.90%和25.30%，并且在舊茬上也有11.59%的產卵量，而在嫩葉上產卵量卻很少（僅占總卵量的0.91%）。綠盲蝽在植株上的產卵部位與其趨嫩習性有關，但也會因寄主種類的不同而存在差異。

綠盲蝽；產卵部位；酸性品紅染色法；棉花；苜蓿

綠盲蝽（Apolygus lucorum）屬半翅目盲蝽科，自21世紀以來，首先在棉田由次要害蟲演變成了主要害蟲[1，2]。綠盲蝽具有寄主植物種類多、成蟲飛行擴散能力強等特點，其為害從棉田逐漸波及到同一種植區內的其他多種農作物、果樹和蔬菜[2～5]。近年來，科研人員對綠盲蝽的人工飼養技術、個體發育與繁殖、食性、寄主選擇行為、取食行為、性信息素通訊行為、交配與產卵行為、飛行與擴散能力、滯育與越冬習性、年生活史等生物學習性進行了較為系統的研究[6~13]，但是對綠盲蝽的產卵習性更多的是關注于綠盲蝽越冬卵的研究，而對綠盲蝽在棉花和苜蓿2種主要寄主植物上的產卵部位研究報道卻較少。

酸性品紅染色法是一種常見的昆蟲染色方法，該方法可操作性強、易于掌握，且鑒定結果準確性較高。高源等[14]研究發現，在對較大群體大豆孢囊線蟲進行鑒定時，與塑料缽柱法相比，采用酸性品紅染色法更加便捷，且鑒定結果準確可靠。張玉茹等[15]在研究儲糧害蟲感染菜豆象的檢測時發現，酸性品紅染色法操作簡便易行，適于現場快速檢測。王殿軒等[16]也應用酸性品紅溶液染色進行了儲糧米象卵的檢測。綠盲蝽的卵產于植物組織內，只有卵蓋露在組織外，因此，很難用肉眼進行鑒定和調查。基于此，作者初步介紹了適用于綠盲蝽卵檢測的改進的酸性品紅染色法，并應用該方法調查了綠盲蝽卵在棉花和苜蓿植株上的分布情況。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試劑有酸性品紅（天津市科密歐化學試劑有限公司）和冰乙酸（天津市光復科技發展有限公司）。

供試作物為紫花苜蓿（鄭州華豐草業科技有限公司）和棉花（品種為魯研棉21，山東苗寶種業有限公司）。

供試綠盲蝽采自河北省滄州市獻縣棉田，在養蟲室［溫度（26±1）℃，相對濕度60%～80%］內，以豇豆為飼料進行飼養。成蟲羽化后5 d，選取生理狀態一致的成蟲進行試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 酸性品紅染色的方法取0.1 g酸性品紅溶于95 mL蒸餾水中，然后加入5 mL冰乙酸，配制成0.1%酸性品紅溶液。將待染色材料放入40～60℃溫水中浸泡5 min，浸泡幼嫩組織如生長點時水溫要低一些（溫度過高，會造成幼嫩葉子變色，影響觀察效果）。將處理好的材料放入0.1%酸性品紅溶液中浸泡15 min。染色完成后，用蒸餾水將多余的染料沖洗干凈，用吸水紙吸干多余的水分。

1.2.2 綠盲蝽在棉株不同部位的產卵情況調查試驗在河北省農林科學院植物保護研究所棉花試驗田進行。7月中旬，用40目的紗網罩（1 m×1 m×1 m）將棉株（蕾鈴期）罩住，以防其他昆蟲為害。每個紗網罩內接入綠盲蝽雌、雄成蟲各15頭，3次重復。產卵3 d后，取棉株各組織（嫩葉、腋芽、幼蕾、嫩葉柄、老葉脈、老葉柄、葉脫處），采用酸性品紅染色法染色，在體視顯微鏡下目測觀察并統計棉株不同部位上的綠盲蝽卵數量。

1.2.3 綠盲蝽在苜蓿不同部位的產卵情況調查試驗在河北省農林科學院植物保護研究所養蟲室內進行。10月中旬，將收割2茬后的紫花苜蓿用花盆栽培于溫室內，1株/盆，苜蓿舊茬高4 cm左右（割后40 d）、新茬高5 cm左右（割后5 d）、新苗高10 cm左右。室內光照時間18∶6（L∶D），平均溫度27℃，相對濕度60%～70%。用紗網罩（直徑20 cm，高30 cm）將苜蓿罩住。每個紗網罩內接入綠盲蝽雌、雄成蟲各15頭，3次重復。產卵3 d后，取苜蓿各組織（舊茬、新茬、嫩莖、嫩尖、嫩葉），采用酸性品紅染色法染色，在體視顯微鏡下目測觀察并統計苜蓿植株不同部位上的綠盲蝽卵數量。

1.3 數據分析

根據公式，分別計算綠盲蝽卵在棉花、苜蓿植株上的分布率：

卵分布率=植株某組織卵數/每籠或盆植株總卵數×100%

利用DPS v6.55軟件，采用Duncan’s新復極差法進行結果的顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 綠盲蝽卵染色

根據綠盲蝽的產卵特點及其卵的特性，篩選確定用于染色的酸性品紅的適宜濃度為0.1%，并根據寄主植物棉花和苜蓿植株部位的不同，確定染色溫度為40～60℃，且根據植株組織材料的幼嫩程度不同進行適當的溫度調整。從染色結果（圖1）來看，采用0.1%酸性品紅染色后，露在棉花和苜蓿植株表面的綠盲蝽卵蓋均被染成淺粉紅色，且清淅可見，易于肉眼觀察。

2.2 綠盲蝽卵在棉株不同部位上的分布情況

調查結果（表1）顯示，綠盲蝽卵在棉株不同部位上的分布數量差異較大，其中，嫩葉上的產卵量最多，嫩葉和腋芽上的產卵量顯著＞其他部位。嫩葉、腋芽、幼蕾和嫩葉柄上4個部位的產卵量占棉株總產卵量的79.57%，這與該蟲的趨嫩特性相符合。該蟲在老熟組織上的產卵量相對較少，即使將卵產在老葉上，也是產在相對較幼嫩的部位如葉脈或葉片基部葉柄上部。此外，有少數卵產在莖稈的葉片脫落處或傷口處。

2.3 綠盲蝽卵在苜蓿不同部位上的分布情況

調查結果（表2）顯示，在紫花苜蓿生長期，綠盲蝽非越冬代的卵主要分布在苜蓿新茬、嫩尖、嫩莖以及上次收割時留下的舊茬等部位。其中，苜蓿剛收割時所產生新茬上的產卵量最多，占總產卵量的43.90%；其次是苜蓿嫩尖，所占比例為25.30%；在舊茬上也發現有11.59%的卵，說明干枯的苜蓿舊茬也是綠盲蝽的產卵場所。

圖1 酸性品紅染色后植株組織上的綠盲蝽卵Fig.1A.lucorumeggs dyed by acid fuchsin in plant tissue

表1 綠盲蝽卵在棉株不同部位上的分布情況Table1 Distribution ofA.lucorumeggs in different parts of cotton plant

表2 綠盲蝽卵在苜蓿植株不同部位上的分布情況Table2 Distribution ofA.lucorumeggs in different parts of alfalfa plant

3 結論與討論

綠盲蝽的越冬寄主種類繁多，大約80種，包括紫花苜蓿、紅豆草等多種多年生牧草，棗、蘋果等果樹[17]，以及某些田間雜草。目前，在果樹上已經明確的主要越冬產卵部位為傷口、剪枝殘茬、鱗芽、皮縫或病殘體上[18，19]。綠盲蝽的卵產在植物組織內，在非越冬寄主上多為散產。董吉衛等[20]研究了綠盲蝽的產卵行為和產卵習性，并選取鈴期田間長勢良好的棉株，于室內采用1%曙紅溶液染色，調查了綠盲蝽的產卵部位，認為在棉株上綠盲蝽的產卵部位多集中在第4～7果枝上，但其對試驗棉株上綠盲蝽的發生情況、試驗田情況介紹不甚詳細。

酸性品紅染色法是一種較為常見的昆蟲卵的染色方法，尤其針對產于植物組織內部的卵的染色和鑒別，該方法因寄主植物種類或昆蟲種類的不同而有所調整，如品紅含量的變化、處理溫度的選擇等。作者根據綠盲蝽的產卵特點及其卵的特性，篩選確定了酸性品紅染色的適宜濃度為0.1%；并根據寄主植物棉花和苜蓿植株部位的不同，確定了染色溫度為40～60℃，且根據植株組織材料的幼嫩程度不同進行適當的溫度調整。采用酸性品紅染色法對綠盲蝽在2種主要寄主作物棉花和苜蓿不同部位上的產卵情況進行調查，結果顯示，綠盲蝽在棉花植株上的產卵部位與其趨嫩特性密切相關，主要產卵部位是嫩葉和腋芽，其次是幼蕾和嫩葉柄，這4個幼嫩部位上的產卵量占棉株總產卵量的79.57%，而在其他部位上綠盲蝽產卵量較少；但是在苜蓿植株上，綠盲蝽的主要產卵部位是剛收割后的新茬和嫩尖，2個部位上的產卵量分別占總卵量的43.90%和25.30%，在舊茬上也有11.59%的產卵量，但是在嫩葉上產卵量（僅占總卵量的0.91%）卻很低。由于綠盲蝽的卵產在植株組織內，因而可以看出，綠盲蝽產卵除趨嫩外，對植株的組織部位也有不同的需求。綜合來看，綠盲蝽在不同寄主植物上的產卵部位不同，本研究結果為不同作物田內綠盲蝽的防治提供了不同的防治思路。

［1］Wu K M，Lu Y H，Feng H Q，Jiang Y Y，Zhao J Z. Suppression of cotton bollworm in multiple crops in China in areas with Bt toxin-containing cotton［J］.Science，2008，321（5896）：1676-1678.

［2］Lu Y H，Wu K M，Jiang Y Y，Xia B，Li P，Feng H Q，Kag W，Guo Y Y.Mirid bug outbreaks in multiple crops correlated with wide scale adoption of Bt cotton in China［J］.Science，2010，328（5982）：1151-1154.

［3］陸宴輝，吳孔明.棉花盲蝽象及其防治［M］.北京：金盾出版社，2008.

［4］金銀利，封洪強，張言芳，呂中偉，王琦，邱峰，侯有明.河南冬棗和葡萄上綠盲蝽種群的季節性發生規律［J］.植物保護，2015，41（2）：149-153.

［5］李耀發，黨志紅，高占林，王吉強，袁立兵，申妍妍，袁文龍，潘文亮.河北省滄州棉區綠盲蝽在不同寄主上的動態分布［J］.植物保護，2009，35（5）：118-121.

［6］陸宴輝，吳孔明.我國棉花盲蝽生物學特性的研究進展［J］.應用昆蟲學報，2012，49（3）：578-584.

［7］李耀發，高占林，康云鳳，黨志紅，潘小花，王亞欣，潘文亮.寄主植物花器揮發性物質分析及其對綠盲蝽成蟲的引誘作用［J］.河北農業大學學報，2014，37（4）：95-100.

［8］李耀發，高占林，黨志紅，王吉強，楊繼坤，潘文亮.綠盲蝽對不同波段光譜選擇性地初步測定［J］.河北農業科學，2011，15（5）：57-60.

［9］張尚卿，高占林，黨志紅，李耀發，潘文亮.綠盲蝽對四種揮發性物質的觸角電位和行為反應［J］.華北農學報，2011，26（3）：189-194

［10］黨志紅，李耀發，高占林，潘文亮.綠盲蝽成蟲對幾種寄主植物花器的趨性研究［J］.河北農業科學，2010，14（8）：82-83.

［11］張俊宇，林克劍，黃欣蒸，耿亭，魏洪義，張永軍.綠盲蝽對七種錦葵科植物揮發物的EAG和趨向行為反應［J］.中國生物防治學報，2016，32（2）：135-141.

［12］曹盼盼，路常寬，王曉勤.綠盲蝽性誘劑在葡萄園誘捕效果及種群動態監測［J］.植物保護學報，2016，43（3）：523-524.

［13］畢擁國，耿林，武小愷，王志剛.綠盲蝽對寄主植物及蜜源——糖醋液的趨性研究［J］.河北林果研究，2016，31（1）：49-53.

［14］高源，常瑋，韓英鵬，李文濱.2種大豆胞囊線蟲鑒定方法比較及分析［J］.大豆科學，2012，31（2）：274-277.

［15］張玉茹，劉永平，張生芳.菜豆象的染色檢出法試驗［J］.植物檢疫，1997，7（3）：165-166.

［16］王殿軒，劉浩，楊毅，閆東閣.3種染色劑檢測大米中米象蟲卵感染效果比較［J］.糧食與飼料工業，2015，（4）：10-13.

［17］陸宴輝.盲蝽蟓生態適應性研究［D］.北京：中國農業科學院植物保護研究所，2008.

［18］吳靜.冬棗園綠盲蝽發生消長規律及藥劑防治研究［D］.泰安：山東農業大學，2008.

［19］高梅秀，田小衛，劉濤，李躍紅，范會鮮.綠盲蝽越冬卵在棗園的分布及影響因素研究［J］.中國果樹，2009，（3）：17-20.

［20］董吉衛，陸宴輝，楊益眾.綠盲蝽成蟲的產卵行為與習性［J］.應用昆蟲學報，2012，49（3）：591-595.

Egg Dyeing Method and Oviposition Site in Cotton and Alfalfa of Adult Female Apolygus lucorum

LI Yao-fa1，DANG Zhi-hong1，AN Jing-jie1，GAO Zhan-lin1，YUAN Zi-ye1，LIU Chun-hong1，YUAN Wenlong2，PAN Wen-liang1
（1.Plant Protection Institute of Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences，IPM Center of Hebei Province，Key Laboratory of Integrated Pest Management on Crops in Northern Region of North China，Ministry of Agriculture，P.R.China，Baoding 071000，China；2.Plant Protection and Quarantine Station of Hebei Province，Shijiazhuang 050011，China）

In order to clear the oviposition behavior ofApolygus lucorumin cotton and alfalfa.The distribution of A.lucorum laid eggs in different parts of cotton and alfalfa plants were investigated by using acid magenta dyeing methods.The oviposition site of A.lucorum in cotton was closely related to its’behavior of tendency to the tender.In cotton plants，the main oviposition sites of A.lucorum were the tender leaf and axillary buds，followed by the young buds and the petioles.The amount eggs of the four parts was more than 79%of the total amount eggs.But in alfalfa plants，the new stubbles and tender tips were the main oviposition parts，the amount eggs of the two parts was respectively 43.90%and 25.30%of the total amount eggs.The amount eggs in old stubble was 11.59%，but the eggs in tender leaves was the lowest one，which was only 0.91%.The spawning site in host plants of A.lucorum was related to the behavior of tendency to tender，but it could also be changed as the different kinds of host plants.

Apolygus lucorum；Oviposition site；Acid magenta dyeing method；Cotton；Alfalfa

S433.3

：A

：1008-1631（2016）06-0062-04

2016-02-03

公益性行業（農業）科研專項（201103012）

李耀發（1977-），男，河北高碑店人，副研究員，博士，主要從事農業昆蟲與害蟲防治研究。Tel：0312-5915665；E-mail：liyaofa@126.com。

潘文亮（1958-），男，河北霸州人，研究員，博士，主要從事農業昆蟲與害蟲防治研究。Tel：0312-5915191；E-mail：pwenliang@163.com。