Apelin在伴有冠心病高血壓患者中的檢測意義

毛積分，黃建新，呂裕霞，馬春梅,趙鳳翎，宋曉萍

(1.武警總醫院,a 干部病房一科,b 采購中心,c 體檢中心，d 檢驗科，北京 100040；2.武警北京市總隊第二醫院特檢科)

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·論著·

Apelin在伴有冠心病高血壓患者中的檢測意義

毛積分1a，黃建新2，呂裕霞1b，馬春梅1c,趙鳳翎1d，宋曉萍1a

(1.武警總醫院,a 干部病房一科,b 采購中心,c 體檢中心，d 檢驗科，北京 100040；2.武警北京市總隊第二醫院特檢科)

目的探析在伴發冠心病的高血壓患者發病機制中Apelin的作用。方法分析98例原發性高血壓者的臨床資料，依據冠狀動脈造影的檢查結果把入選者劃分成單純高血壓組(對照組，44例)和伴發冠心病的高血壓組(觀察組，54例)兩組。比較兩組的基線資料、常規檢測指標、Apelin表達水平等。結果兩組的基線資料、常規檢測指標差異均無統計學意義(P>0.05)。兩組的Apelin表達水平、對照組中不同級別的高血壓患者間以及觀察組中不同臨床類型者間的Apelin水平差異均有統計學意義(P均<0.01)。觀察組患者Apelin表達水平與Gensini積分存在負相關性(r=-0.61，P<0.01)。結論Apelin表達水平的下降可以促進伴發冠心病的高血壓患者的病情進展，能成為該類患者判斷預后以及危險分層的一個有效指標。

高血壓；冠心病；肽類; 預后; 危險性評估

血管活性肽屬于肽類物質，有著保護循環系統的作用，目前新發現的Apelin屬于血管活性肽，是孤兒G蛋白偶聯受體(APJ)的天然配體，在心血管系統疾病中兩者組成的Apelin-APJ系統扮演著重要的角色[1]。早期關于Apelin的研究主要是集中在心力衰竭、高血壓以及糖尿病等方面，關于其在伴發冠心病的高血壓患者中的研究目前尚很少。本研究旨在通過伴發冠心病的高血壓患者發病機制中Apelin作用的研究，探討Apelin的臨床應用價值。

1　對象與方法

1.1研究對象分析2013年8月至2015年2月在武警總醫院接受治療的98例原發性高血壓者的臨床資料，患者均由于胸悶或胸痛入院。依據冠狀動脈造影的檢查結果把入選者劃分成單純高血壓組(對照組，44例)和伴發冠心病的高血壓組(觀察組，54例)兩組。對照組中有13例為高血壓1級者，19例為高血壓2級者；12例為高血壓3級者，且血壓分級及其定義依據世界衛生組織(WHO)/國際血液學學會(ISH)于1999年制定的標準[2]。觀察組中20例穩定型心絞痛者，21例為不穩定型心絞痛患者，13例為急性心肌梗死患者。排除標準：近期使用激素者；嚴重的如惡性腫瘤、晚期肝硬化等的慢性疾病患者；存在代謝性和內分泌疾病的患者；結締組織、免疫缺陷性或自身免疫疾病或使用免疫抑制劑的患者；肝和(或)腎功能嚴重不全的患者；慢性或急性的感染性疾病患者；存在嚴重肺實質性疾病的患者；心功能嚴重不全者或者是合并如孤立性心房顫動、心肌炎等其他心臟疾病者；陳舊性心肌梗死者；最近一個月內有服用調脂藥物史的患者等。

1.2研究方法對所有受試者實施尿常規、血常規、肝功能、腎功能、血糖、血脂、胸部X線平片以及心臟多普勒超聲、心電圖等的檢查。

參照標準的Judkins法給入選者實施冠狀動脈造影的檢查，參照美國心臟病協會(AHA)的標準評判冠狀動脈的狹窄程度。依據造影的結果，并參照評價冠狀動脈分段的標準，通過Gensini積分法積分評估其管腔病變程度。

采集標本：受試者均需禁食>8 h，第2天清晨抽取5 mL空腹靜脈血，將依地酸二鈉抗凝劑注入盛有血標本的抗凝管中，均勻、充分混合10 min后進行離心處理(15 min，3000 r/min)，提取血漿，保存于-20 ℃的冰箱中備測。接著用酶聯免疫吸附法(ELISA)對血漿中Apelin的表達水平進行檢測：設立標準品孔10個，將100 μL的標準品分別加至第1、2孔內，接著將50 μL的標準品稀釋液分別加入其中，混合均勻；從第1、2孔內各自提取液體100 μL分別加入第3、4孔內，再將50μL的標準品稀釋液分別加入其中，充分混合；從第3、4孔內分別提取50μL的液體丟棄，然后分別提取50 μL的液體注入第5、6孔內，接著將50 μL的標準品稀釋液分別加入兩孔內，混合均勻；從第5、6孔內分別提取液體50 μL加至第7、8孔內，然后分別注入標準品稀釋液50 μL，以此類推直至第9、10孔，稀釋后的各孔加樣量均是50 μL，濃度為125～1500 pg/mL。

檢測血漿Apelin的表達水平：①加樣：不加酶標試劑及樣品的孔，其他操作步驟和其他孔操作相同，即設立空白對照孔以及待測樣品孔，先把40 μL的樣品稀釋液注入在酶標包被板上待測樣品孔內，后把待測樣品10 μL注入其中，最終樣品的稀釋倍數達至5倍。②溫育：封板膜封板之后，把酶標板放在恒溫箱(37 ℃)內進行30 min的溫育處理。③配液：將30倍蒸餾水注入30倍的濃縮洗滌液內稀釋備用。④洗滌：將封板膜揭去，丟棄酶標包被板上液體，甩干后在每孔內加滿洗滌液，30 s靜置后棄掉，以此不斷反復洗滌(5次)后拍干。⑤加酶：在各個孔內(除空白孔外)注入酶標試劑50 μL。⑥避光顯色反應后用終止液終止反應，檢測其表達水平：把空白孔調零作為對照，在450 nm波長下依序檢測各個孔的OD值(吸光度)。以標準物濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪制標準曲線。參照樣品OD值在標準曲線上查出對應的濃度，乘以稀釋的倍數即可獲得實際濃度值。

1.3統計學處理采用SPSS19.0軟件分析數據，計量資料比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1基線資料對照組與觀察組在年齡、性別、吸煙史比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.2兩組常規檢測指標的比較兩組SBP、DDP、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、LVEF、LVEDD比較，差異均無統計學意義(均P>0.05)。

2.3兩組血漿中Apelin表達水平的比較觀察組的血漿Apelin表達水平是(1.39±0.56)μg/L，對照組是(1.81±0.52)μg/L，差異有統計學意義(P<0.01)。

2.4對照組中不同級別者血漿Apelin表達水平的比較對照組中高血壓1級者的血漿Apelin表達水平是(2.31±0.40)μg/L，2級者為(1.91±0.22)μg/L，3級者為(1.20±0.27)μg/L，兩兩組間比較，差異均有統計學意義(P<0.01)。

2.5觀察組中不同臨床類型患者的血漿Apelin表達水平的比較觀察組中急性心肌梗死患者的血漿Apelin的表達水平是(0.81±0.13)μg/L，不穩定型心絞痛者為(1.35±0.40)μg/L，穩定型心絞痛者為(1.77±0.50)μg/L，兩兩組間比較，差異均有統計學意義(P<0.01)。

2.6Gensini積分與Apelin水平相關性分析觀察組患者Apelin表達水平與Gensini積分存在負相關性(r=-0.61，P<0.01)。

3　討論

Apelin表達主要集中在腎上腺、腎臟、肺臟和心臟的血管內皮細胞內，在血管內皮細胞內呈高表達狀，但在心臟神經纖維、結締組織、心肌細胞以及血管平滑肌細胞中卻很少表達，提示其對心血管功能具有一定的調節作用，產生于旁分泌途徑，由內皮細胞中釋放，對血管平滑肌細胞及心肌細胞起作用，有著調節血管張力以及收縮心肌的作用。

有研究[3-4]顯示，Apelin水平的降低可能是一個引發原發性高血壓的重要原因。有資料顯示[5]，Apelin能降低動脈血壓是由于一氧化氮的介導。研究通過對APJ受體缺陷性的小鼠的研究發現，AngⅡ縮血管的作用明顯增強，而Apelin降壓作用卻明顯消失，說明Apelin有可能具備一定的拮抗AngⅡ升壓的作用[5]。通過上述的研究資料，我們推測Apelin降壓的機制可能為：通過血管內皮細胞的產生，Apelin得到釋放，活化同時結合附近的所有APJ受體，將血管內皮細胞中內皮型的一氧化氮合酶激活，并促進了其的分泌和合成過程，從而使血管擴張效應發揮極致，達到降壓的效果。本實驗結果顯示，血壓分級越高，Apelin表達水平則越低，此與其相應的擴張血管作用遭受抑制，降低了內皮細胞的分泌量，致使其降壓作用及含量降低可能相關。

有報道[6]稱心肌梗死及冠心病心絞痛等與Apelin-APJ存在顯著的關系。有學者[7]認為隱匿性冠心病者比急性冠脈綜合征者的Apelin濃度升高更顯著，且冠心病嚴重程度以及其急性程度與Apelin濃度存在負相關性。此外，Apelin濃度與患者冠狀動脈的狹窄程度也相關[8]。本實驗發現，在冠心病患者的3種臨床類型中Apelin水平均顯著下降，推測原因可能是：心肌缺氧、缺血情況伴隨冠心病者的病情進展而加重，其冠狀動脈的內皮細胞損傷程度加深，而神經的內分泌系統激活程度隨之上升，導致Apelin水平下降程度明顯上升[9]；冠心病進展期間，內皮細胞對于Apelin mRNA的表達受受損的冠脈內膜的直接影響，導致Apelin濃度下降，冠狀動脈病變的狹窄程度伴隨不同的臨床類型而慢慢加重，其內膜的受損程度隨之加重[10]；不管是冠狀動脈管腔由于動脈粥樣硬化而出現阻塞或狹窄的現象，還是如冠狀動脈痙攣等的功能性變化，最后都造成了心肌細胞壞死或(和)缺氧缺血，進而加快了神經內分泌系統的激活[11]。故Apelin-APJ系統對缺血的心肌細胞具有一定的保護作用，將來有可能是重要治療靶點之一[12]。

本實驗結果顯示，伴發冠心病的高血壓患者的Apelin濃度與Gensini積分存在明顯的負相關性，推測可能是該類患者血管內膜損傷，對內皮細胞內Apelin mRNA的表達構成了直接影響，致使血漿中Apelin水平急劇降低；此外激活的神經激素活躍在冠心病整個進展期間，加之AngⅡ，通過AngⅡ-AT1通路上調，導致了Apelin-APJ(生物學作用相反)通路的下調，最終致使冠心病者Apelin水平的下降，其下降的程度能體現冠脈病變嚴重程度。此外，我們發現觀察組比對照組Apelin水平低，說明血漿Apelin水平的改變與伴發冠心病的高血壓患者的病情進展關系密切，Apelin水平能作為該類患者的危險分層和判斷轉歸的一個重要觀察指標。

綜上所述，Apelin表達水平的下降可以促進伴發冠心病的高血壓患者的病情進展，能成為該類患者判斷預后以及危險分層的一個有效指標。

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The significance of plasma Apelin detection in the hypertensive patients with coronary disease

MaoJifen*,HuangJianxin,LvYuxia,MaChunmei,ZhaoFengling,SongXiaoping

(*CadresWardI，GeneralHospitalofArmedPoliceForces，Beijing100040,China)Correspondingauthor:LvYuxia,Email:Lvyuxia7118@163.com

ObjectiveTo analyze the significant of Apelin in the nosogenesis of the hypertensive patients with coronary disease.MethodsClinical data of 98 cases of patients with primary hypertension were collected and analyzed retrospectively.Patients were divided into observed group (hypertensive patients with coronary disease,54 cases) and control group (primary hypertensive patients,44 cases) according to the results of Coronary angiography,.The general information,conventional detection indexes,the levels of Apelin were collected and compared.ResultsThere were no statistical differences in the general information and the conventional detection indexes between the two groups.There were statistical differences in the levels of Apelin between the observed group and control group,and there were still statistical differences in Apelin levels in the different grades hypertension in control group and different clinical styles in observed group.There was negative correlation between the levels of Apelin and Gensini scores in observed group.ConclusionThe decrease of the plasma Apelin levels aggravate the the hypertension progression in hypertensive patients with coronary disease,which could be an efficiency index of the prognosis and risk stratification for the hypertensive patients with coronary disease.

Hypertension;Coronary disease;Peptides;Prognosis;Risk assessment

毛積分，副主任醫師，Email：chenli_tz@126.com

呂裕霞，主治醫師，Email:Lvyuxia7118@163.com

R735.7

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2016.04.007

2015-06-26)