兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基培養(yǎng)抗酸桿菌應(yīng)用評價

黃菲菲

(蘇州工業(yè)園區(qū)婁葑醫(yī)院檢驗(yàn)科　江蘇　蘇州　215000)

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兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基培養(yǎng)抗酸桿菌應(yīng)用評價

黃菲菲

(蘇州工業(yè)園區(qū)婁葑醫(yī)院檢驗(yàn)科江蘇蘇州215000)

【摘要】目的：探討羅氏培養(yǎng)基與本實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基對抗酸桿菌檢測的效果。方法：本次選取痰標(biāo)本40份，標(biāo)準(zhǔn)菌株10份，同時對羅氏培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基接種，記錄陽性出現(xiàn)時間，陽性率，污染率，生長時間，并展開不同培養(yǎng)基間的對比。結(jié)果：本次送檢的40份痰標(biāo)本中，羅氏培養(yǎng)基陽性和實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基陽性均為7例，占17.5%，無明顯差異(P>0.05)。羅氏培養(yǎng)基污染率為5%，自制培養(yǎng)基污染率為15%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。兩組出現(xiàn)陽性的時間即生長時間無差異(P>0.05)。但10份標(biāo)準(zhǔn)菌株在羅氏培養(yǎng)基上生長的時間明顯短于在自制培養(yǎng)基上生長的時間，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論：臨床針對結(jié)核菌，采用不同的培養(yǎng)基對抗酸桿菌培養(yǎng)，結(jié)果示貝索羅氏培養(yǎng)基在抗酸桿菌檢測效果上優(yōu)于自制，降低了污染率，縮短了培養(yǎng)時間，具有非常重要的應(yīng)用價值，有臨床有廣泛的實(shí)施前景，為結(jié)核病的防治提供了強(qiáng)有力的保障。

【關(guān)鍵詞】羅氏培養(yǎng)基；實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基；抗酸桿菌

結(jié)核病對人類健康構(gòu)成了極大危害，目前診斷時，仍以抗酸桿菌分離培養(yǎng)為金標(biāo)準(zhǔn)，在早期發(fā)現(xiàn)和治療控制疾病上意義顯著。對合適的結(jié)核菌培養(yǎng)基進(jìn)行選擇，對提高陽性率，降低污染率等具非常重要的價值。本次選取相關(guān)痰標(biāo)本，分別采用羅氏培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基檢測效果展開對比，現(xiàn)總結(jié)結(jié)果如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料 選取我院患者痰標(biāo)本40例，H37RV質(zhì)控菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株10份。貝索羅氏培養(yǎng)基，本實(shí)驗(yàn)室自制培養(yǎng)基。主要成份為新鮮雞蛋液、天門冬素、孔雀石綠、馬鈴薯粉。培養(yǎng)前對削尖化液處理，主要成分為氫氧化鈉、檸檬酸鈉、N-乙酰-L-半胱氨酸，依據(jù)《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》配置。

1.2 方法 準(zhǔn)備儀器和設(shè)備，包括曲線控制恒溫培養(yǎng)箱，蒸汽血清凝固器等。用消化液消化痰標(biāo)本15min后，取緩沖液加入中和，行3000r/min離心操作，取沉淀在1支貝索羅氏培養(yǎng)基和1支實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基中接種，為0.2ml接種量；均對標(biāo)準(zhǔn)菌株稀釋1個麥?zhǔn)蠁挝缓螅诜跤?37℃)中放置培養(yǎng)，每日行1次觀察，對菌落肉眼可見的時間記錄。出現(xiàn)菌落生長情況，立即實(shí)施涂片染色鏡檢，對是否為抗酸桿菌進(jìn)行確定，若為抗酸桿菌，即按培養(yǎng)陽性判斷。無菌落生長5d，按陰性統(tǒng)計(jì)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用SPSS13.0版，組間計(jì)量數(shù)據(jù)采用(x±s)表示，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料行X2檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

本次送檢的40份痰標(biāo)本中，羅氏培養(yǎng)基陽性和實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基陽性均為7例，占17.5%，無明顯差異(P>0.05)。羅氏培養(yǎng)基污染率為5%，自制培養(yǎng)基污染率為15%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。兩組出現(xiàn)陽性的時間即生長時間無差異(P>0.05)。但10份標(biāo)準(zhǔn)菌株在羅氏培養(yǎng)基上生長的時間明顯短于在自制培養(yǎng)基上生長的時間，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1　兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)效果比較 (x±s，d)

注：*P<0.05。

3.討論

3.1 結(jié)核病診斷中抗酸桿菌分離培養(yǎng)價值

在痰標(biāo)本中，抗酸桿菌與各種雜菌同時存在，要將抗酸桿菌分離，需將其他痰標(biāo)本中的雜菌殺死，且要盡量多的抗酸桿菌存活。在實(shí)施抗酸桿菌分離培養(yǎng)時，存在污染率情況的高低，與培養(yǎng)基的選擇、前處理方法、操作技術(shù)、標(biāo)本性狀等因素有密切關(guān)聯(lián)。前處理應(yīng)用藥物有較高的濃度，處理時間越長，越可起到較好的殺菌效果，降低了雜菌污染率，但相對的，也可對抗菌桿菌的生長抑制，可能對陽性率產(chǎn)生影響。結(jié)核病診斷中，抗酸桿菌分離培養(yǎng)意義顯著，是早期發(fā)現(xiàn)結(jié)核病的重要措施。雖多項(xiàng)報(bào)道均顯示，相較固定培養(yǎng)基，在抗酸桿菌檢測中，液體培養(yǎng)效果更為明顯，但液體培養(yǎng)基及儀器設(shè)備昂貴，在基層實(shí)驗(yàn)室工作開展中不適合應(yīng)用。本次選取的貝索羅氏培養(yǎng)基，無需配合自動化儀器設(shè)備，價格低，為臨床普及提供了較好條件。結(jié)核病在臨床屬一種慢性傳染性疾病，相較實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基，貝索公司羅氏培養(yǎng)基具污染率低、快速等特點(diǎn)，可對抗酸桿菌生長形態(tài)直觀觀察。

3.2 貝索羅氏培養(yǎng)基特點(diǎn)及優(yōu)勢

抗酸桿菌屬非運(yùn)動性、非孢子生殖、需氧的細(xì)菌，有較慢的生長速度，一代繁殖用時是2h至>20h，品種不同，表現(xiàn)也有差異。故在抗酸桿菌培養(yǎng)基中可用的種類較多，可大致按液體培養(yǎng)基和蛋基培固定養(yǎng)基劃分。以對羅氏培養(yǎng)管屬所含有的蛋基固定培養(yǎng)基特色包括：若確保不蒸發(fā)干化，可較長時間冷藏儲存。因制備時經(jīng)蒸汽滅蛋白質(zhì)和滅菌的過程，不易引起吹件。相較瓊脂培養(yǎng)基，大多數(shù)分枝桿菌在培養(yǎng)基中可更好生長。培養(yǎng)基中含有的雞蛋液和丙三醇配方對結(jié)核分枝桿菌的生長起到了促進(jìn)作用，并提供給機(jī)體最佳的養(yǎng)分和環(huán)境，且孔雀石綠對結(jié)構(gòu)分枝桿菌生長未造成影響，可對其它雜菌的生長有效抑制。而臨床針對液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，多為自動化培養(yǎng)，可就抗酸桿菌生長的更好的條件和環(huán)境進(jìn)行提供，但對儀器設(shè)備有較高的要求。此外，本次貝索羅氏培養(yǎng)基在感染率上，低于實(shí)驗(yàn)室自制培養(yǎng)基，這可能與樣本數(shù)較小相關(guān)，而貝索培養(yǎng)基污染率較實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基低，表明有較強(qiáng)的抗污染能力。

3.3 貝索羅氏培養(yǎng)基檢測結(jié)果

傳統(tǒng)培養(yǎng)抗酸桿菌的方法是需行4-8周培養(yǎng)才可生長。本次研究中，針對痰標(biāo)本培養(yǎng)，貝索羅氏培養(yǎng)基與自制培養(yǎng)基在培養(yǎng)陽性平均速度上無明顯差異，但在對標(biāo)準(zhǔn)菌株培養(yǎng)時，貝索羅氏培養(yǎng)基速度明顯快于自制培養(yǎng)機(jī)，陽性出現(xiàn)的時間分別為(6.1±1.2)d、(15.2±2.1)d。分析培養(yǎng)結(jié)果，雖兩種培養(yǎng)基在陽性結(jié)果和陽性率上一致，但陽性出現(xiàn)的時間有一定差異性。陽性出現(xiàn)的平均時間貝索羅氏培養(yǎng)基相較實(shí)驗(yàn)室自制羅氏培養(yǎng)基明顯提高。可能與貝索羅氏培養(yǎng)基在含量及成份上均與自制羅氏培養(yǎng)基有所區(qū)別，加之其工藝控制較好，規(guī)模化生長，也為其獲得較好的培養(yǎng)結(jié)果提供了理想的條件；同時也可能與抗酸桿菌對抗生素的拮抗作用、生長環(huán)境及遺傳特性等多因素相關(guān)。而在培養(yǎng)痰標(biāo)本時，兩組有表現(xiàn)相當(dāng)?shù)纳L時間，可能與樣本量選取的偏少相關(guān)。蔡興珊等報(bào)道，針對7583例送檢標(biāo)本采用羅氏培養(yǎng)基增培養(yǎng)，陽性出現(xiàn)的時間為24.6d，接近于本次研究。

綜上，臨床針對結(jié)核菌，采用不同的培養(yǎng)基對抗酸桿菌培養(yǎng)，結(jié)果示貝索羅氏培養(yǎng)基在抗酸桿菌檢測效果上優(yōu)于自制，降低了污染率，縮短了培養(yǎng)時間，具有非常重要的應(yīng)用價值，有臨床有廣泛的實(shí)施前景，為結(jié)核病的防治提供了強(qiáng)有力的保障。

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【中圖分類號】R825.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B

【文章編號】1009-6019(2015)23-0062-02