ELISA方法篩查TORCH感染的質量控制方法探討

遲紹琴,陳奕微，師宏詞，孫宇飛，鄭立新

(1.深圳市龍崗區計劃生育服務中心，廣東深圳 518172；2.廣東省計劃生育科學研究所，廣東廣州 510000)

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ELISA方法篩查TORCH感染的質量控制方法探討

遲紹琴1,陳奕微1，師宏詞1，孫宇飛1，鄭立新2

(1.深圳市龍崗區計劃生育服務中心，廣東深圳 518172；2.廣東省計劃生育科學研究所，廣東廣州 510000)

摘要:目的探討實驗室定性檢測TORCH感染指標(風疹病毒IgG、巨細胞病毒IgG和IgM、弓形蟲IgG和IgM，簡稱五項)的室內質量控制方法。方法采用統計學方法，正態分布數據，用ELISA方法檢測的陽性率比值和標準差，設定1+2s為失控規則，繪制半Lerey-Jennings質控圖；非正態分布數據、小概率事件，則采用直接概率計算法，回顧分析57批次的檢測數據。結果風疹病毒IgG陽性率為86.66%、巨細胞病毒IgG/IgM的陽性率為98.87%和0.13%、弓形蟲IgG/IgM陽性率為2.43%和1.71%，五項指標在臨界值范圍的分別有151、3、5、176、27個標本數據。失控次數為巨細胞病毒IgG 1次，弓形蟲IgG/IgM分別是1次和4次。 結論ELISA定性檢測TORCH感染指標的室內質控，可以采用日常檢測陽性率或陰性率數據監控假陽性。臨界值范圍的標本應當進一步復檢或確認實驗。

關鍵詞:酶聯免疫吸附試驗;定性檢測;TORCH;室內質控

經典的TORCH感染在圍生醫學中稱為TORCH綜合征，是一組以胎兒中樞神經系統受損為主，多器官受累的臨床綜合征，包括小頭畸形、腦積水、腦內鈣化、遲發性中樞神經系統障礙、耳聾、白內障、視網膜脈絡膜炎、先天性心臟病、肝脾腫大、骨髓抑制、胎兒宮內發育遲緩等，是孕前優生健康檢查的常規項目[1]。ELISA方法定性免疫測定被廣泛應用于孕前TORCH感染的篩查，然而，關于TORCH感染指標(風疹病毒IgG、巨細胞病毒IgG和IgM、弓形蟲IgG和IgM)的室內質控方面，除了做好測定前、后的質量控制外，測定中進口質控品的昂貴，國內還沒有合適的質控品，導致此項目的室內質控處于比較尷尬的地步。因此，建立一個室內質控方法，對于甄別實驗的假陽性、保證檢測質量尤為重要。

1資料與方法

1.1一般資料來源于本實驗室2013年4～12月共57批次ELISA方法定性檢測的TORCH感染指標：風疹病毒IgG、巨細胞病毒IgG和IgM、弓形蟲IgG和IgM陽性或陰性數據。

1.2方法ELISA定性檢測TORCH試劑盒為德國維潤賽潤研發有限公司研發，密封的患者樣品可在冰箱中2～8 ℃保存7 d，小于或等于-20 ℃可保存更久，避免樣品反復凍融。已稀釋的樣品可在2～8 ℃保存一星期。操作嚴格按說明書進行。臨界值判定標準見表1。

表1　　臨界值判定標準

*PC：標準血清OD值。

1.3統計學處理采用SPSS17.0統計軟件進行數據處理，正態分布數據，建立半Lerey-Jennings質控圖。P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

統計分析ELISA方法檢測TORCH感染指標的57批次4 684份標本。風疹病毒IgG的陽性率為86.66%，其陽性率經Kolmogorov-Smimov 檢驗均值為0.868 7±0.040 9、呈正態分布。巨細胞病毒IgG陰性率為1.13%(陽性率為98.87%)，巨細胞病毒IgM陽性率為0.13%、弓形蟲IgG的陽性率為2.43%，弓形蟲IgM陽性率1.71%、差異均有統計學意義(P<0.05)。五項處于臨界值范圍的分別有151、3、5、176、27個標本數據。

風疹病毒IgG：以陽性率均值0.868 7，標準差0.040 9，繪制半Lerey-Jennings質控圖。結果所有數據均小于0.950 5界限值，第51批次的結果為0.95，但沒有超出+2s，全部在控。見圖1。

圖1　　風疹病毒IgG陽性率質控圖

直接概率計算法：巨細胞病毒IgG第55次，P=0.004 5<0.05，為1次失控，3個陰性標本需要重做；巨細胞病毒IgM無失控；弓形蟲IgG第57次，P=0.026 6，為1次失控，6個陽性標本重做；弓形蟲IgM第28、29、31、36次的P值為0.005 58、0.005 58、0.001 21、0.022 3，4次均為失控，相應批次的24個陽性標本重新檢測。其余所有批次P>0.05，為合格批次即在控。

3討論

室內質量控制由實驗室工作人員采取一定的方法步驟，連續評價實驗室工作的可靠性程度，旨在監測和控制本室常規工作的精密度，提高本室常規工作中批內、批間標本檢驗的一致性，以確定測定結果是否可靠、可否發出報告的一項工作[4]。利用控制物進行質量控制的方法是最廣泛應用的質量質控形式，然而，有一些局限性，如控制物昂貴，控制物可能顯示出不同于患者標本的特征。由于通常在檢測過程的分析階段使用控制物，不能檢出導致誤差的分析前因素，它們可能存在于標本的收集、標記、運輸和處理的各個環節中[5]。全國免費孕前優生健康檢查項目TORCH，女性項目為風疹病毒IgG、巨細胞病毒IgG和IgM、弓形蟲IgG和IgM，自2010年開展此項檢測以來，臨床實驗室較多采用ELISA方法檢測人血清中特異性IgG和IgM抗體，以判斷受到感染的情況。但是，TORCH感染指標的進口質控物價格高，國內還沒有合適的質控品，加之環境、人員、試劑盒、儀器設備的差異，同為孕前婦女人群，各地報道的感染率亦不同[6-8]，陳建軍等[6]報道的五項陽性率為95.4%、92.8%、0.44%、2.26%、6.59%，胡萍等[7]報道弓形蟲、巨細胞病毒感染率為2.42%，徐小芳等[8]報道的TORCH-IgM為0.94%。本研究的檢測結果為：風疹病毒IgG的陽性率為86.66%，巨細胞病毒IgG陽性率98.87%，巨細胞病毒IgM陽性率為0.13%、弓形蟲IgG的陽性率為2.43%，弓形蟲IgM陽性率1.71%。

1965年，Hoffmann和Waid描述了使用患者數據的均值(正態均值)對測定結果進行質量控制的方法。之后，國外學者在臨床生化定量方面運用日常檢測結果來進行室內質控[ 9-10]，李金明等[2]、陳曲波等[3]建立了定性免疫測定HBsAg基于日常測定結果的室內質控方法，在ELISA定性免疫檢測方面給予了改進，但在TORCH監控中還未見報道。本研究使用標本數據進行質控將節省成本，直接控制標本的結果，而不是間接地推斷分析過程的質量[5]，在沒有合適質控物的情況下，是統計質控方法的補充，可以提高檢驗質量。孕前檢測風疹病毒IgG、巨細胞病毒IgG，主要是關注結果陰性的婦女，提示孕前接種疫苗和避免孕期感染，所以，用半Lerey-Jennings質控圖，采用12S規則，監控假陽性的發生。當小概率事件發生時(失控)，分析其原因是：第28、29次由于當天工作量加大，可能是洗版不徹底，第31次是沒有新鮮配制洗液，導致弓形蟲IgM失控。第55次巨細胞病毒IgG失控是洗板機管路不通暢。第36次和第57次弓形蟲IgG/IgM失控，排除上述原因外是否與群體侍養寵物比例高有關，待查。失控后相關標本一定重新檢測。因此，積極探討室內質控方法，并且控制好所有實驗條件，才能保證檢測結果的準確，因為加樣、洗板、溫育等對ELISA方法均有影響。試劑盒的性能也需要進一步的驗證，因為風疹病毒IgG和弓形蟲IgG在臨界值范圍的標本較多。所以，鑒于目前的方法學，巨細胞病毒IgM、弓形蟲IgM陽性和弓形蟲IgG/IgM兩項均為陽性的標本，以及所有處于臨界值范圍的標本，應當查找原因、復檢或進一步做確認實驗。

參考文獻

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·論著·

Study on quality control of ELISA method for screening TORCH infection

ChiShaoqin1,ChenYiwei1,ShiHongci1,SunYufei1,ZhengLixin2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,LonggangDistrictFamilyPlanningServiceCenter,Shenzhen,Guangdong

518172,China;2.GuangdongProvincialResearchInstituteofFamilyPlanningScience,Guangzhou,Guangdong510000,China)

Abstract:ObjectiveOnto investigate the indoor quality control method for qualitatively detecting the laboratory indicators of TORCH infection (rubella virus IgG,cytomegalovirus IgG and IgM,toxoplasma IgG and IgM).MethodsThe statistical method,normal distribution data,ratio and standard deviation of positive rate detected by the ELISA method were adopted,1+2swas set as the out of control rules,the semi Lerey-Jennings quality control chart was drawn;the direct probability calculation method was adopted for the non-normal distribution data and small probability event.The testing data of 57 batches were retrospectively analyzed.ResultsThe positive rate of rubella virus IgG was 86.66%,cytomegalovirus IgG/IgM positive rates were 98.87% and 0.13%,toxoplasma gondii IgG/IgM positive rates were 2.43% and 1.71%,the data of 151,3,5,176,27 samples had the critical value range of five indicators.The number of out of control was once for cytomegalovirus IgG,once and 4 times for Toxoplasma gondii IgG/IgM.ConclusionThe indoor quality control for the ELISA qualitative detection of TORCH infection can adopt the data of daily detection positive rate or negative rate for monitoring the false positive.The critical value range of specimens should be further conducted the recheck or confirmation experiment.

Key words:enzyme linked immunosorbent assay;qualitative detection;TORCH;indoor quality control

收稿日期：(2015-06-12)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.017A

文章編號：1673-4130(2015)24-3550-02