食管鱗癌組織中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達及臨床意義

姚冬穎

(邢臺市人民醫(yī)院病理科，河北　邢臺　054031)

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食管鱗癌組織中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達及臨床意義

姚冬穎

(邢臺市人民醫(yī)院病理科，河北邢臺054031)

〔摘要〕目的研究Bmi-1、P16和CyclinD1在食管鱗癌中的表達及其臨床意義。方法應用免疫組化EliVision兩步法檢測100例食管鱗癌和30例正常食管黏膜組織中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達。結(jié)果①在食管鱗癌和正常食管組織中，Bmi-1、P16、CyclinD1陽性率差異顯著(P<0.05)。②Bmi-1的表達程度與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關，P16的表達程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關，CyclinD1的表達程度與浸潤深度密切相關(P<0.05)。③Bmi-1和CyclinD1的表達與P16的表達均呈負相關(P<0.05)。結(jié)論Bmi-1、P16和CyclinD1的異常表達參與食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展，聯(lián)合檢測Bmi-1、P16和CyclinD1的表達可作為食管鱗癌早期診斷和治療的參考指標。

〔關鍵詞〕食管鱗癌；Bmi-1；P16；CyclinD1；免疫組化

食管癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)居惡性腫瘤的第6位〔1〕。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多步驟、多階段長期逐步演進的過程，細胞周期調(diào)控與之密切相關。G1/S調(diào)控點是細胞周期中最為重要的調(diào)控點，影響決定細胞周期的時間〔2〕。Bmi-1是一種原癌基因，主要通過P16-CyclinD1/CDK4/6-Rb細胞周期通路來調(diào)節(jié)細胞的增殖和衰老。食管癌最常見的組織類型是鱗狀細胞癌，本研究通過檢測Bmi-1、P16和CyclinD1在食管鱗癌中的表達，探討食管癌可能的發(fā)生、發(fā)展機制。

1材料與方法

1.1材料選取2012年3月至2013年6月期間邢臺市人民醫(yī)院食管癌手術切除標本100例，術后病理證實均為鱗狀細胞癌。男66例，女34例；年齡29～82歲，中位年齡64歲，60歲以下45例，60歲及以上55例；高分化23例，中分化39例，低分化38例；浸潤深度未達纖維膜40例，達到纖維膜60例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例；按2010年美國腫瘤聯(lián)合會(AJCC)制定的TNM分期標準，Ⅰ+Ⅱ期43例，Ⅲ+Ⅳ期57例。另取正常食管黏膜30例作為對照(距腫瘤5 cm以上未受累殘端)。所有患者術前均未接受過放療、化療及中醫(yī)中藥治療。

1.2試劑兔抗人Bmi-1多克隆抗體(稀釋度1∶100)購自美國Abcam公司，鼠抗人P16單克隆抗體(即用型)、兔抗人CyclinD1單克隆抗體(即用型)、DAB顯色劑及免疫組化試劑盒均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3方法兩組標本均常規(guī)取材，10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋。每例選取有代表性的蠟塊做4 μm厚連續(xù)切片，備做HE及免疫組化染色。采用免疫組化Elivision兩步法，實驗過程嚴格按照試劑說明書進行，高溫抗原修復，DAB顯色，PBS(磷酸鹽緩沖液)代替一抗作陰性對照，以試劑公司提供的陽性切片作陽性對照，每例都有HE切片作為對照觀察。

1.4結(jié)果判斷采用半定量標準，每張切片高倍鏡(10×40)下計數(shù)5個視野，每個視野計數(shù)200個細胞，根據(jù)陽性細胞所占百分比和染色強度參考文獻〔3〕進行計分。

1.5統(tǒng)計學分析應用SPSS19.0軟件進行χ2檢驗，兩變量之間的相關性采用Spearman等級相關分析。

2結(jié)果

2.1食管鱗癌中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達與臨床病理特征的關系表1可見，Bmi-1的表達水平與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期存在相關性(P<0.05)；P16的表達水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期存在相關性(P<0.05)；CyclinD1的表達水平與

表1　食管鱗癌中Bmi-1、P16、和CyclinD1的表達與臨床病理特征的關系〔n(%)〕

第一作者：姚冬穎(1980-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事腫瘤病理學研究。

浸潤深度存在相關性(P<0.05)。

2.2食管鱗癌和正常食管黏膜組織中Bmi-1、P16和CyclinD1的表達Bmi-1蛋白主要表達于細胞核，少量表達于細胞質(zhì)，在食管鱗癌中陽性率為52.0%，明顯高于正常對照組26.7%，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.015)。P16蛋白主要表達于細胞核，在食管鱗癌中陽性率為49.0%，明顯低于正常對照組83.3%，差異有統(tǒng)計學意義 (P=0.001)。CyclinD1蛋白主要表達于細胞核，在食管鱗癌中陽性率為68.0%，明顯高于正常對照組23.3%，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)，見圖1。

2.3食管鱗癌中Bmi-1、P16和CyclinD1表達的相關性Bmi-1和P16蛋白表達呈負相關(r=-0.219，P=0.028)。P16和CyclinD1蛋白表達呈負相關(r=-0.271，P=0.006)。

Bmi-1

P16

CyclinD1

3討論

Bmi-1基因異常表達與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關，并且促進惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴散。Bmi-1作為一種原癌基因，主要是通過抑制抑癌基因INK4a/ARF兩個轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的表達，通過P16INK4a-CyclinD1-Rb和P14ARF-Mdm2-P53兩條通路來調(diào)節(jié)細胞的增殖和衰老〔4〕。本研究結(jié)果顯示，Bmi-1在食管鱗癌組織中的陽性率顯著高于對照組正常黏膜，其表達水平隨分化程度的降低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)及臨床分期的進展明顯升高，這與He等〔5〕研究結(jié)果一致，提示CyclinD1的基因擴增參與了食管鱗癌的發(fā)生，還可能促進食管鱗癌的惡性轉(zhuǎn)化和遠處轉(zhuǎn)移。

P16是抑癌基因INK4a/ARF編碼兩個蛋白之一，是細胞周期負向調(diào)控因子，有抑制細胞惡性增殖轉(zhuǎn)化的作用。P16通過與CyclinD1競爭結(jié)合細胞周期素依賴激酶CDK4，抑制CDK4的激酶活性，使低磷酸化或非磷酸化的Rb積聚，阻止細胞從G1期進入S期，抑制細胞無限增殖惡性轉(zhuǎn)化〔6〕。當P16因基因缺失、突變、甲基化等原因引起表達產(chǎn)物缺失或結(jié)構(gòu)異常，就失去對細胞生長的負調(diào)控作用，可引起細胞增殖失控，發(fā)生癌變〔7〕。已有學者發(fā)現(xiàn)，P16在食管癌組織中低表達，且與腫瘤的臨床分期有關〔8〕。本實驗發(fā)現(xiàn)，P16在食管鱗癌中的表達低于正常黏膜，且伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期晚的患者表達率更低。推測P16蛋白的低表達或表達缺失導致細胞周期調(diào)控失常，促進了食管鱗癌的發(fā)生，并且使腫瘤具有更強的遠處轉(zhuǎn)移能力。

CyclinD1是細胞周期素家族中的重要成員，異常表達可致細胞失控性生長，最終引發(fā)腫瘤形成。在正常細胞周期中，CyclinD1與CDK4形成復合物CyclinD1-CDK4，使Rb蛋白磷酸化，釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，啟動DNA合成，促使細胞周期從G1期進入S期，完成細胞增殖。CyclinD1過度表達使細胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換時間縮短，促進細胞周期轉(zhuǎn)換速度加快，導致細胞無限增殖，癌變?yōu)閻盒阅[瘤〔9〕。以往研究表明，CyclinD1的高表達參與食管鱗癌的發(fā)生過程，是早期事件，其在浸潤轉(zhuǎn)移中的生物學機制尚待進一步探討〔10〕。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CyclinD1蛋白在食管鱗癌中的陽性率明顯高于正常組織，且浸潤深度達纖維膜者明顯高于未達纖維膜者，分析CyclinD1高表達可能不僅促進細胞增殖，還會增強細胞的侵襲力。

本研究提示，Bmi-1的高表達抑制了P16的表達，進而促使CyclinD1對細胞周期的調(diào)控失常，細胞惡性增殖形成腫瘤。所以，Bmi-1、CyclinD1的高表達及P16的低表達與食管鱗癌的發(fā)生和惡性生物學行為有關。

4參考文獻

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〔2014-07-30修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

〔中圖分類號〕R735.1

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015)22-6352-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.015