尼可地爾與前列地爾預處理對大鼠心肌缺血再灌注脂質過氧化反應的影響

巴曉紅　唐　欣

(遼寧醫學院附屬第一醫院神經內科，遼寧　錦州　121001)

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尼可地爾與前列地爾預處理對大鼠心肌缺血再灌注脂質過氧化反應的影響

巴曉紅唐欣1

(遼寧醫學院附屬第一醫院神經內科，遼寧錦州121001)

〔摘要〕目的探討尼可地爾與前列地爾聯合應用預處理對大鼠心肌缺血再灌注脂質過氧化反應的影響。方法將48只大鼠隨機分為正常對照組，模型對照組，尼可地爾組，前列地爾組，尼可地爾加前列地爾全劑量給藥(聯合全劑量)組和尼可地爾半量加前列地爾半量給藥(聯合半劑量)組。在模型制備之前前列地爾經腹腔給藥3 d，藥量0.036 ml/200 g，半劑量組給藥0.018 ml/200 g。尼克地爾經口服給藥3 d，藥量0.09 mg/200 g，半劑量組給藥0.045 mg/200 g；正常對照組及模型對照組實驗動物給予等體積的安慰劑(生理鹽水)；連續3 d，模型制備前0.5 h各組分別追加1 d劑量的藥物或安慰劑。除正常對照組外其余各組制備心肌缺血再灌注模型。測定血清中一氧化氮(NO)含量、肌酸激酶(CK)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量；同時TTC染色檢測心肌梗死面積。結果與正常對照組相比，模型對照組CK和MDA含量減少，SOD和NO含量增加，與模型對照組及其他給藥組相比，聯合半劑量組CK和MDA含量明顯減少，SOD和NO含量明顯增加，心肌梗死面積均明顯降低(均P<0.05)。結論尼可地爾和前列地爾的聯合用藥半劑量組能夠減少心肌組織氧自由基含量，減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷 。

〔關鍵詞〕尼可地爾；前列地爾；心肌缺血再灌注損傷；脂質過氧化反應

1遼河油田總醫院

第一作者：巴曉紅(1968-)，女，碩士，教授，主任醫師，碩士生導師，主要從事腦血管病研究。

心肌缺血再灌注損傷(IRI)越來越受到關注。前列地爾是一種具有廣泛生物活性的內源性物質，可通過提高細胞內環磷腺苷(cAMP)水平來抑制炎癥介質的釋放，減少氧自由基的產生，抑制白細胞對內皮細胞的黏附，擴張血管，抑制血小板聚集，穩定生物膜和細胞保護作用。尼可地爾具有雙重作用機制，一是抗心絞痛作用，二是心肌保護作用，通過開放線粒體的KATP通道導致心肌的預適應〔1，2〕。目前已有動物實驗證實尼可地爾預處理對心肌IRI具有保護作用。關于尼可地爾和前列地爾聯合應用，對心肌IRI的保護作用鮮有報道。本實驗探討尼可地爾和前列地爾聯合應用對心肌IRI的保護作用。

1材料和方法

1.1實驗動物、試劑、儀器雄性SD大鼠48只，6周齡，體重220～250 g，清潔級，由大連醫科大學實驗動物中心提供〔許可證號SCXK(遼)2008-0002〕。對動物處置方法符合科學技術部發布的《關于善待實驗動物的指導性意見》。尼可地爾(默克雪蘭諾)；前列地爾(北京泰德制藥股份有限公司)；NO檢測試劑和盒(化學法)；微量MDA檢測試劑盒；SOD檢測試劑盒；CK檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2方法

1.2.1實驗動物分組及動物模型制備48只大鼠，隨機分6組，每組8只，分別為正常對照組，模型對照組，尼可地爾給藥組，前列地爾給藥組，尼可地爾加前列地爾全劑量給藥(聯合全劑量)組和尼可地爾半量加前列地爾半量給藥(聯合半劑量)組。根據比較醫學原則計算出大鼠用藥量。在模型制備之前前列地爾經腹腔給藥3 d，藥量0.036 ml/200 g，半劑量組給藥0.018 ml/200 g。尼克地爾經口服給藥3 d，藥量0.09 mg/200 g，半劑量組給藥0.045 mg/200 g；正常對照組及模型對照組實驗動物給予等體積的安慰劑(生理鹽水)；連續3 d，模型制備前半小時各組分別追加1 d劑量的藥物或安慰劑。參考文獻〔3〕除正常對照組外其余各組制備心肌IRI模型。大鼠術前12 h禁食，不禁水。以烏拉坦(1 g/kg)腹腔注射麻醉，行氣管插管術，上微型呼吸機，描記肢體Ⅱ導聯心電圖。自左側3～4肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，充分暴露心臟及其表面的血管，結扎冠狀動脈前降支，結扎之前在預結扎的冠狀動脈前降支處放置一根長約0.5 cm，直徑1.5 mm的乳膠管，造成缺血。缺血30 min后松解結扎線，再灌注60 min。冠脈斷流及再通成功與否依心電圖肢體導聯的ST段抬高及恢復為標準。

1.2.2檢測大鼠血清一氧化氮(NO)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量血清標本的收集：實驗動物除正常組直接采血外，其他各組在再灌注60 min后通過心臟采血，抽取5 ml血加入已預先冷凍的抗凝試管中(內含7.5 mg EDTA和2 500 U抑肽酶)，3 000～4 000 r/min，離心10 min，取血清置于-80℃低溫冰箱保存，供檢測用。

1.2.3檢測并計算大鼠心肌梗死面積腹主動脈采血后，迅速剪下心臟，橫向將心臟切5～6片，每片厚約1.5～2 mm，放人1%氯化三苯基四氮(TTC)磷酸緩沖液(pH7.4)，37℃水浴10 min，損傷的心肌細胞因細胞膜損傷脫氫酶釋放丟失，因而不被染色;正常心肌含有脫氫酶可被染為紅色。應用B12000軟件處理系統計算各部分面積，以各片非染色區面積之和與各片室壁面積之和的百分比反映心肌梗死范圍。

1.3統計學方法采用SPSS17.0軟件行單因素方差分析。

2結果

2.1大鼠心肌IRI模型的心電圖表現觀察大鼠的心電圖，如果發現肢體Ⅱ導聯R波下降及ST段改變(抬高或壓低)T波改變(高聳或倒置)，證明模型制備成功，見圖1。

2.2血清CK、MDA、NO、SOD活性檢測結果正常對照組CK活性最低，模型對照組CK活性最高，其他治療組也較正常對照組升高，說明IRI均能引起CK活性升高，導致機體損傷。聯合半劑量組療效優于聯合全劑量組(P<0.05)；聯合全劑量組療效優于尼可地爾組(P<0.05)；尼可地爾組療效優于前列地爾組(P<0.05)。正常對照組NO、SOD含量最高，與其他各組比較差異均有統計學意義(P<0.05)；模型對照組NO、SOD含量最低，與其他各組比較差異均有統計學意義(P<0.05)；其他各組NO、SOD含量分別是：聯合半劑量組>聯合全劑量組>尼可地爾組>前列地爾組，且各組間比較差異均有統計學意義(P<0.05)。正常對照組MDA含量最低，與其他各組比較差異均有統計學意義(P<0.05)；模型對照組MDA含量最高，與其他各組比較差異均有統計學意義(P<0.05)；其他各組MDA含量分別是：聯合半劑量組<聯合全劑量組<尼可地爾組<前列地爾組，且各組比較差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.3對心肌損傷范圍影響與正常對照組比較，模型對照組心肌梗死面積〔(43.20±6.5)% vs(30.20±2.3)%〕明顯增大(P<0.01)，表明大鼠心肌IRI模型建立成功。與模型對照組相比，聯合半劑量組能明顯縮小梗死面積〔(32.26±4.8)%,P<0.05〕。與聯合半劑量組比較，聯合全劑量組梗死面積較大〔(36.56±3.5)%，P<0.05〕。

圖1　大鼠模型建立過程中的心電圖

組別CK活性(U/ml)NO含量(μmol/L)MDA含量(nmol/ml)SOD活性(U/ml)正常對照組2.4685±0.230246.3165±0.520326.4444±1.448768.4819±1.0528模型對照組13.3621±0.44391)27.6633±0.52031)104.2222±2.13721)32.5158±1.57111)前列地爾組8.7079±0.41691)2)34.4108±0.62631)2)94.2222±3.63451)2)49.5579±0.91871)2)尼可地爾組5.7327±0.41271)2)3)37.9394±0.64171)2)3)73.1111±5.46591)2)3)51.9974±0.58571)2)3)聯合全劑量組4.7092±0.40111)2)3)4)42.8148±1.16481)2)3)4)54.4444±2.35701)2)3)4)53.9142±0.80421)2)3)4)聯合半劑量組3.2119±0.52331)2)3)4)5)44.0539±0.67741)2)3)4)5)47.9595±3.04241)2)3)4)5)59.2464±0.87991)2)3)4)5)

與正常對照組比較：1)P<0.05；與模型對照組比較：2)P<0.05；與前列地爾組比較：3)P<0.05；與尼可地爾組比較：4)P<0.05；與聯合全劑量組比較：5)P<0.05

3討論

心肌缺血/再灌注時，大量自由基產生，細胞膜脂質過氧化反應增強，膜流動性和通透性發生變化，導致電生理活動異常，誘發和促進心律失常的產生；心肌細胞脂質過氧化反應增強〔5〕，導致細胞膜的結構和功能受損。心肌細胞損傷時CK溢出增加，使其在血清中活性提高；缺血心肌的組織損傷，致使心肌缺血區的過氧化產物MDA含量增多、心肌組織中SOD減少；NO具有很強的生物學活性，是一種生物信使。CK、MDA、NO和SOD的變化均可反映心肌受損的程度。心肌缺血/再灌注整個過程中都存在細胞凋亡。

尼可地爾具有清除氧自由基和調節中性粒細胞的作用〔6〕；為了防止活性氧(ROS)引起組織損傷，所有細胞本身都存在防御機制，包括SOD、過氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶等；其作為鉀離子(K+)通道開放劑，當開放心肌線粒體上的KATP通道時，可以模擬缺血預適應，提供心肌的耐缺氧能力，引起血管平滑肌的松弛，保護心肌。前列地爾為天然前列腺素(PG)類物質，具有舒張血管、抗血小板聚集等多種作用，其不僅能擴張正常的冠狀動脈，還可使因血管阻塞發生缺血的心肌區域血流增加。

本實驗通過預先給予藥物尼可地爾、前列地爾或兩者聯合，可使兩種藥物的藥理作用在各自發揮作用的同時，互相彌補不足，達到有效降低大鼠心肌缺血再灌注中細胞凋亡的發生及減少氧自由基的生成，且兩者半劑量聯合的效果更優。以此在臨床中可采用尼可地爾和前列地爾聯合預給藥，保護心肌，降低心肌缺血再灌注的損傷程度，提高預后。

4參考文獻

1李新立，盧新政.鉀通道激動劑尼可地爾用于高危穩定型心絞痛患者的療效〔J〕.世界臨床藥物，2005；26(4)：209-11.

2劉永泉，劉寧.尼可地爾在冠心病治療中的臨床應用進展〔J〕.臨床和實驗醫學雜志，2009；8(9)：132-3.

3齊志敏，王倩，張瑩.大鼠心肌缺血再灌注損傷實驗模型開胸方法的研究〔J〕.中國臨床康復，2004；8(30)：6620-1.

4趙麗紅，卜麗梅，于艷華，等.清開靈注射液對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用〔J〕.中國老年學雜志，2012；32(2)：552-4.

5Zhao ZQ，Nakamura M，Wang NP，etal.Reperfusion induces myocardial apoptotic cell death〔J〕.Cardiovasc Res，2000；45(3)：651-60.

6朱玉峰，劉大勇，林曉明.尼可地爾治療不穩定型心絞痛療效觀察〔J〕.人民軍醫，2012；55(3)：234-6.

〔2014-09-17修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

〔中圖分類號〕R541.4

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015)22-6350-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.014