乳腺癌分子病理診斷中檢測ERCC2基因多態性的應用研究

甄時建（湖南中醫藥高等專科學校附屬第一醫院 病理科，湖南 株洲 412000）

乳腺癌分子病理診斷中檢測ERCC2基因多態性的應用研究

甄時建
（湖南中醫藥高等專科學校附屬第一醫院 病理科，湖南 株洲 412000）

目的 探討分析乳腺癌分子病理診斷中檢測ERCC2基因多態性的應用效果。方法 選取我院收治的80例乳腺癌患者（觀察組），以及80例健康志愿者（對照組）作為觀察對象，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性。結果 觀察組和對照組之間的rs1799793位點野生基因型、等位基因比較無顯著差異（P＞0.05）；觀察組和對照組之間的rs238416位點在基因型、等位基因比較具有顯著差異（P＜0.05）。結論 ERCC2基因rs1799793和rs238416位點多態性與腫瘤大小、三陰性乳腺癌、PR狀態的表達有一定的關聯，在乳腺癌的早期診斷和預后中，具有可觀的應用價值。

乳腺癌；分子病理診斷；ERCC2基因多態性

乳腺癌是臨床上常見的惡性腫瘤疾病，近年來，惡性腫瘤在中國女性腫瘤的發病率呈現上升趨勢［1］。隨著醫學技術的發展與不斷成熟，近年來，有相關研究表明，在癌癥的易感性多分布有ERCC2基因多態性的分析，多個位點與癌癥的易感性相關的有乳腺癌、肺癌、胃癌等［2］。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取我院2012年1月至2015年4月收治的80例乳腺癌患者（觀察組），以及與患者生活環境相似、年齡相似的同民族健康人群（對照組）作為觀察對象。觀察組患者年齡28～65歲，平均年齡（46.2± 3.8）歲，對照組27～65歲，平均年齡（47.2±4.6）歲。兩組觀察對象均為女性，且均簽署知情同意書。組間年齡對比無顯著差異（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 采用的儀器有PCR儀、凝膠成像系統、瓊脂糖、電泳系統、Universal genomic DNA Extraction Kit VER.3.0以及2×GoTaq Green Master Mix、限制性內切酶Taql和Csp61。先用試劑盒提取兩組標本的抗凝血中的外周基因組DNA，在-85 ℃的溫度中將其保存。利用Tagger程序，根據最小等位基因頻率≥0.05，以及連鎖不平衡系數≥0.8的標準，來進行ERCC2基因多態性的初級篩選，再使用Fast SNPs軟件篩選出最典型的Tag SNPs，即是rs1799793和rs238416來進行試驗。

1.2.2 PCR反應體系是2×GoTaq Green Master Mix 20 μL，其總體積是35 μL，將PCR進行5分鐘的95 ℃的預變，在71 ℃時進行20 s的延伸，將其擴增至33個循環后，再在72 ℃中延伸10 min。接著分別用內切酶Taql以及csp61進行15 μL rs1799793和rs238416的PCR產物的酶切，在用2%瓊脂糖凝膠電泳對酶切產物進行鑒定。

1.2.3 選用免疫組化SP法，對乳腺癌術后組織切片的ER、HER-2以及PR的表達進行檢測。

1.3 觀察指標：核陽性細胞數＞10%、Allred評分≥3，ER、PR為陽性；HER-2的陽性判斷標準是：+++是膜強染色細胞數＞30%；++是膜強染色細胞數在10%～30%；+是膜不持續染色的細胞數在10%以上；-是膜染色細胞數在10%以下。

1.4 統計學分析：本研究數據以SPSS20.0軟件進行分析，計量資料以（±s）表示，比較以t檢驗；計數資料的比較經χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

ERCC2基因rs1799793和rs238416位點在對照組之間的分布符合平衡規律，也就是說該試驗對象具有群體代表性。通過野生基因型和等位基因作參考，觀察組和對照組之間的rs1799793位點野生基因型、等位基因比較無顯著差異（P＞0.05）；觀察組和對照組之間的rs238416位點在基因型、等位基因比較具有顯著差異（P＜0.05）。缺失雜合突變基因型、缺失純合突變基因型GA與rs238416基因型GG相比，其個體患乳腺癌的風險要高。通過研究結果發現，以rs1799793位點中的GG基因型為參考，PR陰性者多攜帶的GA基因型頻率要高于PR陽性者；而三陰性乳腺癌患者所攜帶的CT基因型頻率要高于非三陰性乳腺癌患者。rs238416和rs1799793位點的多態性分布與乳腺癌患者的臨床病癥、ER、HER-2D的表達沒有顯著差異（P ＞0.05），不具統計學意義。

3 討 論

腫瘤的出現是細胞分化，再到增殖，最后到死亡機制的一個非常復雜的異常過程。在DNA被損傷之后，沒有進行及時的修復，等到了一定的程度就會使細胞遺傳出現不穩定升高，引起細胞增殖和分化的失控，最后就會造成腫瘤的出現。所以導致腫瘤易感性的主要因素之一就是DNA修復能力的差異［3-5］。所以ERCC2在乳腺癌發病的過程中有著重要的作用。本研究通過對rs1799793和rs238416位點多態性分布與乳腺癌的發生進行相關的分析，通過研究發現，rs1799793與乳腺癌的發生沒有關系，其中的純合突變基因AA沒有被檢測出來；而rs238416位點的內含子增強子功能，會受到雜合基因型GA的缺失受到阻礙，同時其也會對ERCC2基因mRNA的轉錄水平造成影響，并降低DNA修復能力，影響基因組多部分損傷的修復功能，在加上各種致癌原因、年齡增加以及基因位點突變等，最后就會造成癌癥的出現。

［1]張靈小.多基因單核苷酸多態與三陰性乳腺癌預后及療效的關聯研究［D］.北京:北京協和醫學院，2012.

［2]王濤，張永東，郭歡，等.檢測ERCC2基因多態性在乳腺癌分子病理診斷中的應用［J］.臨床與實驗病理學雜志，2015，12（3）:277-281.

［3]張偉，李志剛，張蕾，等.Hcy及CBS T833C基因多態性與新疆漢族乳腺癌的關系［J］.實用醫學雜志，2016，32（6）:897-899.

［4]劉新蘭，張海霞，劉堯邦，等.C1236T、G2677T/A和C3435T基因多態性與乳腺癌分子分型的關系及意義［J］.天津醫藥，2016，44（4）:389-393.

［5]張靈小，馬飛，王佳玉，等.ERCC2rs1799793多態性與三陰性乳腺癌鉑類化療療效的關系［J］.中國癌癥雜志，2012，22（5）:358-362.

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1671-8194（2016）18-0048-01