山枝仁炒制前后槲皮素的含量測定及質量標準研究

龔曉猛，張美，吳珊珊，李夢琪，胡麒， 胡昌江

·炮制制劑·

山枝仁炒制前后槲皮素的含量測定及質量標準研究

龔曉猛，張美，吳珊珊，李夢琪，胡麒， 胡昌江

目的：測定山枝仁炒制前后槲皮素含量，擬建立生山枝仁和炒山枝仁質量標準。方法：按照藥典相應項目下規定，測定山枝仁炮制前后的水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量；并采用高效液相色譜法，測定槲皮素含量。結果：生山枝仁水分不得超過12％，總灰分不得超過6.0％，酸不溶性灰分不得超過0.7％，浸出物不得少于10.0％，含槲皮素量均不得少于0.10％；炒山枝仁水分不得過11％，總灰分不得超過6.0％，酸不溶性灰分不得過0.8％，浸出物不得少于11.0％，槲皮素含量不得少于0.13％。結論：建立了山枝仁炒制前后的質量標準，并測定了炮制前后槲皮素含量，其操作方法簡便，具有良好的精密度和重復性，可作為本產品的質量控制方法。

生山枝仁；炒山枝仁；質量標準；槲皮素；含量測定

山枝仁為海桐花科海桐花屬植物皺葉海桐Pittosporumcrispulum Gagnep.或海金子Pittosporum illicioides Mak.的干燥種子。秋后果實成熟時采收，除去果殼及雜質，干燥。本品歷代本草未見記載，但在四川有較長使用歷史。主產于四川省大邑縣、宜賓市、瀘州市、富順縣、樂山市等地。具有清熱利濕、生津止咳、收斂止瀉的功效。用于虛煩心熱，口渴咽痛，痢疾，腸炎，白帶，體倦乏力等［1～2］。山枝仁在臨床使用，品種來源不清，導致品種混亂，影響臨床療效［3］。目前，山枝仁收載于《四川中藥材標準》2010年版一部，收載了海金子，皺葉海桐植物形態描述、產地分布，薄層鑒別，水分，總灰分，酸不溶性灰分，浸出物含量，但缺少對山枝仁化學成分含量測定［2］。《四川省中藥材標準》2010年版已收載炒山枝仁飲片規格，但無該飲片標準，考慮到炒山枝仁在市場有流通，因此，本文對山枝仁炮制前后槲皮素含量測定進行研究，還擬定了炒山枝仁水分，總灰分，酸不溶性灰分，浸出物限量，為進一步制定山枝仁炮制前后的質量標準評價提供科學依據。

1 儀器與材料

山枝仁（10批藥材經成都中醫藥大學蔣桂華教授鑒定為海桐花科海桐花屬植物海金子 Pittosporum illicioides Mak.的干燥種子），Agilent1200高效液相色譜儀，美國Agilent公司，KQ5200DB型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司，電子天平，德國Sartorius公司，色譜純甲醇、水（二次蒸餾水），乙酸乙酯，石油醚（30～60 ℃），其它試劑均為分析純。

2 檢查

2.1水分

按照水分測定法（烘干法）［4］分別測定10批生山枝仁樣品，10批炒山枝仁樣品，結果見表1。生山枝仁飲片10.88～11.91 ％，平均值為11.20 ％，炒山枝仁飲片為9.86～10.48 ％，平均值為10.06 ％。故規定生山枝仁水分不得超過12％，炒山枝仁水分不得過11％，收入標準正文。

2.2總灰分

按照總灰分測定法［4］分別測定10批生山枝仁樣品，10批炒山枝仁樣品，結果見表1。生山枝仁飲片4.51～5.94％，平均值為5.14％，炒山枝仁飲片為3.95～5.33 ％，平均值為4.71 ％。故規定生山枝仁總灰分不得超過6.0％，炒山枝仁總灰分不得超過6.0％，收入標準正文。

2.3酸不溶性灰分

按照酸不溶性灰分測定法［4］分別測定10批生山枝仁樣品，10批炒山枝仁樣品，結果見表1。生山枝仁飲片0.58～0.73 ％，平均值為0.63 ％，炒山枝仁飲片為0.63～0.77 ％，平均值為0.70 ％ 。故規定生山枝仁酸不溶性灰分不得超過0.7％，炒山枝仁酸不溶性灰分不得過0.8％，收入標準正文。

2.4浸出物

以50 ％乙醇為溶劑，按照醇溶性浸出物測定項下熱浸法［4］操作，分別測定10批生山枝仁樣品，10批炒山枝仁樣品，結果見表1。生山枝仁飲片10.97～12.09 ％，平均值為11.57 ％，炒山枝仁飲片為11.05～12.15 ％，平均值為11.64 ％。故規定生山枝仁浸出物不得少于10.0％，炒山枝仁浸出物不得少于11.0％，收入標準正文。

3 槲皮素含量測定方法與結果

3.1對照品溶液及供試品溶液的制備

精密稱取0.0074 g槲皮素標準品，用甲醇配制成濃度為1.48 mg·mL-1的標準品溶液，作為對照品溶液。取本品粉末2 g，加石油醚（30～60 ℃）40 mL，超聲處理15 min，濾過，棄去濾液，殘渣重復處理一次。殘渣加乙酸乙酯50 mL，水浴回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液［5］。

3.2色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱： DiamonsilC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇-0.4 ％磷酸溶液（47∶53）為流動相，檢測波長為360 nm，柱溫：35 ℃，進樣量：10 μL，在上述色譜條件下，槲皮素的保留時間約為7.6 min，分離度大于1.5，理論塔板數不低于2500。

3.3方法學考察

3.3.1線性關系考察 精密稱取0.0074g槲皮素標準品，用甲醇配制成濃度為1.48 mg·mL-1的標準品溶液，按1，2，3，4，5，10 μL體積進樣，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標，以槲皮素進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。經計算得到槲皮素的回歸方程為Y= 992.1X- 3.3677，相關系數r= 0. 9999，表明槲皮素在 0.148～1.48 μg范圍內具有良好線性關系。

3.3.2重復性考察 取同一批次的山枝仁6份，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，進樣測定結果樣品中槲皮素含量（n=6）為0.998 ％，RSD為0.89 ％，表明本法的重復性良好，符合要求。

3.3.3精密度考察 按照“2.1”項下的方法制備供試品溶液，同一樣品精密吸取10 μL，連續進樣6次，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，依法測定結果槲皮素在樣品中的百分含量（n=6）為0.998 ％，RSD為1.8 ％，表明精密度良好。

3.3.4加樣回收率考察 精密稱取對照品槲皮素含量（0.998 ％） 約30 mg，共6份，分別精密加入供試品溶液1 mL，按2.1項下方法制備供試溶液，依法測定，計算結果平均回收率（n=6）為97.9 ％，RSD為0.89 ％，表明本法準確性良好。

3.3.5穩定性考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，間隔一定時間（0，2，4，8，16，24 h）進樣測定，結果表明供試品溶液在24 h內基本穩定，RSD（n=6）為1.2 ％。

3.3.6含量測定 照高效液相色譜法（附錄Ⅵ D）測定。以槲皮素作為生山枝仁，炒山枝仁的含量指標；參考《中華人民共和國藥典》2010年版相關飲片品種下槲皮素含量測定方法，制定山枝仁飲片含量測定方法和相關規定。取生、炒山枝仁各10批，分別按照“2.1”項下制得供試品，注入液相色譜儀，測定槲皮素的峰面積，根據槲皮素的峰面積，從回歸方程求出各樣品中槲皮素的含量，生山枝仁為0.1600～0.1800％，平均含量為0.1712 ％；炒山枝仁0.1535～0.1693％，平均含量為0.1591 ％。故規定槲皮素分別不得少于0.10％和0.13％，收入標準正文，結果見表1。

4 結論

根據10批生山枝仁的測定結果，生山枝仁水分不得超過12％，總灰分不得超過6.0％，酸不溶性灰分不得超過0.7％，浸出物不得少于10.0％，含槲皮素量均不得少于0.10％；炒山枝仁水分不得過11％，總灰分不得超過6.0％，酸不溶性灰分不得過0.8％，浸出物不得少于11.0％，槲皮素含量不得少于0.13％。可作為本產品的質量控制方法。為進一步研究山枝仁不同炮制品化學成分含量差異的科學內涵奠定基礎。

［1］ 羅達尚主編.新修晶珠本草［M］.成都：四川科學技術出版社，2004：513.

［2］ 四川省衛生廳：四川省中藥材標準2010年版，四川出版集團，四川科學技術出版社，2011.

［3］ 張俊.川產山枝仁及其近緣種的生藥學研究［D］.成都中醫藥大學，2011.

［4］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［5］ 李祥勝，汪興生，周亞球，等.HPLC法測定復方金錢草排石顆粒中槲皮素和山柰素的含量［J］.安徽醫藥，2011，15（12）：1510.

［6］ 崔濤，夏偉軍，彭玲芳，等.七葉蓮提取物中總黃酮和槲皮素的含量測定［J］.藥物分析雜志，2011，31（11）：54.

（責任編輯：李蕓霞）

Quercetin content determination and quality standard research of raw and processed Shanzhiren /

GONG Xiao-meng，ZHANG Mei，WU Shan-shan， LI Meng-qi， HU Lin， HU Chang-jiang//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To detect quercetin content in raw and processed Shanzhiren， and research the quality standards of raw and processed Shanzhiren. Method: According to Chinese pharmacopoeia， the content of moisture， total ash， acid-insoluble ash and extracts were determined. High performance liquid chromatography （HPLC） method was used to determine quercetin content. Result: The quality of raw shanzhiren included： water less than 12 ％， total ash content less than 6.0％， acid insoluble ash content less than 0.7％， extract more than 10.0％， and quercetin content more than 0.10％. The quality of processed shanzhiren included：water less than 11 ％， total ash content less than 6.0％， acid insoluble ash content less than 0.8％， extract more than 11.0％， and quercetin content more than 0.13％. Conclusion: The quality standards of raw and processed Shanzhiren are established. The determination method of quercetin content is simple with good precision and reproducibility， which can be used for quality control of the product.

Raw Shanzhiren； processed Shanzhiren； quality standard； quercetin； content determination

R 284.1

A

1674-926X（2016）03-006-03

成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 611137

龔曉猛（1990-），男，碩士在讀，主要從事中藥炮制學方向研究Tel：13880687572 Email：gongjin20080621@126.com

胡昌江（1952-），男，教授，博士生導師，主要從事中藥炮制原理與質量標準方向研究Tel：13980980796 Email：hhccjj@hotmail.com

2015-08-02