HPLC梯度洗脫法測定泮托拉唑鈉腸溶膠囊中的有關物質含量

趙莉莉

HPLC梯度洗脫法測定泮托拉唑鈉腸溶膠囊中的有關物質含量

趙莉莉

目的建立泮托拉唑鈉腸溶膠囊的測定方法,科學測定泮托拉唑鈉腸溶膠囊相關物質含量。方法選用國內3個廠家生產的10個批次的泮托拉唑鈉腸溶膠囊,以20 μl為進樣量,采用高效液相色譜法(HPLC)、梯度洗脫法(色譜柱為Kromasil C1,流動相為0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液-乙腈,柱溫40℃,流速1.0ml/min,波長290 nm),檢測有關物質含量。結果泮托拉唑鈉能被氧化、酸堿以及加熱破壞,而不受輔料干擾,濃度0.56～50.50 μg/ml與峰面積具有良好線性關系,5 h內供試品穩定性良好,樣品平均標示含量為99.8%,相對標準差(RSD)=1.09%,精密度較高,本實驗中主峰與雜質峰分離度良好。結論HPLC梯度洗脫法具有操作簡單、專屬性好、精確度高以及靈敏度佳的優點,可以作為泮托拉唑鈉腸溶膠囊相關物質測定的科學方法。

高效液相色譜法；梯度洗脫法；泮托拉唑鈉腸溶膠囊；有關物質

泮托拉唑作為臨床常用的質子泵抑制劑之一,其作用效果與奧美拉唑、蘭索拉唑相似,主要應用在胃潰瘍、返流性食管炎、十二指腸潰瘍以及卓–艾氏綜合征等疾病的治療中［1］。藥物有關物質檢測對于保障藥物應用的安全性具有重要意義,國內外目前檢測藥物物質含量多采用HPLC洗脫法進行［2］。本實驗中應用HPLC法測定泮托拉唑有關物質含量,旨在建立泮托拉唑鈉腸溶膠囊物質測定方法的同時,檢測其藥物穩定性和安全性,為臨床應用提供參考。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 1260型高效液相色譜儀(美國安捷倫生產),泮托拉唑鈉腸溶膠囊(規格：以泮托拉唑計40mg/粒,生產廠家分別為大連美羅大藥廠、華潤雙鶴藥業股份有限公司以及杭州中美華東制藥有限公司),磷酸氫二鈉,磷酸二氫鈉,乙腈(Merck 公司),超純水(二次重蒸水)以及泮托拉唑鈉對照品(來自于中國食品藥品檢定研究院) 。

1.2 實驗條件

1.2.1 色譜條件參數 磷酸氫二鈉以及磷酸二氫鈉作為分析純,乙腈作為色譜純,色譜柱：Kromasil C18,即(250mm×4.6mm,5 μm),流動相：經磷酸調節后pH=7.0的0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液-乙腈,線性梯度洗脫： 90：10起始(即0 min)→60：40進行30 min→15：85進行45 min；檢測波長: 290 nm；流速：1.0ml/min；色譜柱溫度：40℃；進樣量體積：20 μl。

1.2.2 配置溶液 將泮托拉唑鈉腸溶膠囊的內容物取出后研成細粉,取適量細粉,添加0.001 mol/L氫氧化鈉溶液-乙腈(1：1) 溶液,待細粉溶解后,稀釋到每1毫升溶液中含泮托拉唑0.4mg,經過濾、離心處理之后,取上清液用作供試品溶液。供試品溶液精密量取1ml,置入100ml量瓶之中,添加0.001 mol/L氫氧化鈉溶液混合乙腈溶液(1：1)稀釋至刻度,充分混勻后用作對照溶液。本實驗中所配置的溶液單個雜質均為＞0.5% ,總雜質＜1.5%,在溶液色譜圖分析中,未計入供試品溶液＜0.05倍對照溶液主峰面積的色譜峰。

1.3 實驗方法

1.3.1 破壞性實驗 ①氧化破壞。取適量泮托拉唑鈉腸溶膠囊內容物(約相當于20mg泮托拉唑) 放置在50ml量瓶之中,添加10ml的0.001 mol/L氫氧化鈉溶液-乙腈(1：1)使內容物溶解,在加入1ml的30%過氧化氫溶液,靜置,第2天取出,再次添加氫氧化鈉溶液-乙腈溶劑,直至達到刻度,混勻后,精確量取20 μl樣品,應用高效液相色譜儀分析并記錄色譜圖。②加熱破壞量取適量內容物放置在稱量瓶之中后,在60℃條件下靜置10 d后,從中稱取約20mg泮托拉唑,加入50ml量瓶,添加氫氧化鈉溶液-乙腈溶劑10ml,內容物溶解后,再稀釋至50ml,搖勻,量取20 μl樣品注入到液相色譜儀,分析記錄色譜圖。③酸堿破壞分別取相當于20mg泮托拉唑的內容物分別裝入50ml量瓶中,分別添加10ml分析純溶劑使其溶解,酸破壞實驗量瓶添加0.1ml濃鹽酸后放置1 min再添加1 mol/L氫氧化鈉溶液,堿破壞瓶中添加5ml的1 mol/L氫氧化鈉溶液后再添加1 mol/L鹽酸,之后分別加入分析純稀釋至50ml,充分混勻后,分別取20 μl樣品液進行液相色譜分析。

1.3.2 干擾試驗 取不同生產企業的處方比例僅混合輔料配置,按照處方精確稱取泮托拉唑鈉制劑所用輔料200mg,放置在100ml 量瓶中,加流動相溶解稀釋至刻度,搖勻,過濾,取 20 μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖。

1.3.3 線性試驗 取20mg泮托拉唑鈉對照品置于50ml量瓶中,添加流動相待對照品溶解后,稀釋至50ml,混勻,精密量取1、3、5、7ml溶液,分別置于4個10ml量瓶,添加流動相稀釋至10ml,混勻,1.2.1色譜條件下,將樣品濃度作為橫坐標,色譜峰面積作為縱坐標,建立回歸方程并算出相關系數。

1.3.4 穩定性試驗 取200mg泮托拉唑鈉細粉,置入100ml量瓶,加入適量流動相后進行超聲溶解后,再次流動相稀釋至100ml,搖勻后,過濾取濾液,每隔1 h取1次樣品(均為20 μl)注入色譜儀,記錄5 h的色譜圖。

1.3.5 精密度試驗 取同一批次的泮托拉唑鈉腸溶膠囊供試品溶液,分別裝入5個量瓶中,在不同日期由不同分析人員對樣品進行測定,計算5次測定結果的平均值和相對標準偏差。

2 結果

破壞性實驗結果顯示,在氧化、酸堿以及加熱情況下,雜質峰與主峰基線均能夠明顯分離,而不用比例混合的輔料對于原料藥物測定物無明顯干擾,說明泮托拉唑鈉原料能夠被酸堿、氧化及加熱破壞。對峰面積(A)和泮托拉唑鈉進樣濃度進行線性回歸方程分析后發現,相關性系數r=0.9994,進樣處于濃度為0.56～50.50 μg/ml,峰面積之和具有良好線性關系。穩定性實驗顯示5 h內峰面積的RSD=0.99%,說明5 h內樣品供試品溶液穩定性良好。精密度實驗顯示平均標示含量99.8%,RSD=1.09%,顯示精密度較高。本實驗中,主峰與雜質峰均能良好分離,說明HPLC色譜系統能夠有效檢測藥物有關物質,具有良好專屬性和耐用性。

3 討論

質子泵是胃酸分泌最終環節,泮托拉唑能夠特異性結合質子泵(H+-K+-ATP酶),而發揮抑制胃酸分泌的作用。雖然泮托拉唑鈉臨床較為廣泛,但是國內外藥典均未將其載入其中。目前泮托拉唑鈉腸溶膠囊的執行標準為國家藥品標準WS1-( X-198) -2004Z和經國家食品藥品監督管理局審批的相關注冊標準,因此改進檢測有關物質方法以及提高雜質限度對于提高泮托拉唑鈉質量、保證藥品安全性和可靠性具有十分重要的意義［3,4］。

綜上所述,通過應用HPLC梯度洗脫法對于泮托拉唑鈉腸溶膠囊的有關物質進行檢測,結果發現雖然輔料并不干擾藥物性質,但是酸堿度改變、加熱以及氧化均能夠破壞藥物有效性,應用HPLC梯度洗脫法能夠將主峰和雜質有效分離,其具有專屬性強、耐用性好、精密度高、操作簡便等優點,可以作為藥物檢測的科學方法。

［1］郭麗.泮托拉唑鈉腸溶片的非臨床生物等效性分析.世界最新醫學信息文摘(電子版),2013,19(21):34-35.

［2］張舒,張昀.HPLC梯度洗脫法測定泮托拉唑鈉腸溶膠囊的有關物質.中國藥師雜志,2015,18(6):943-945.

［3］王婧斯,李桂龍,王成港,等.泮托拉唑鈉有關物質分析方法的比較.藥物評價研究,2012,35(2):109-112.

［4］陳玉玲.HPLC法測定泮托拉唑鈉腸溶微丸膠囊的含量.科技創新與應用,2012,1(上):38.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.05.227

2015-11-03］

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