S100P與Ki-67在腎盂尿路上皮癌中的表達(dá)及意義

李　云， 李勝水，許　華，韓曉春，劉海霞，王麗麗，張鳳梅，李雙標(biāo)，趙　倩

(1.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，河北　滄州　061001；2.河北省滄州市婦幼保健院 病理科,河北　滄州　061001；3.河北省吳橋縣中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北　吳橋　061800)

S100P與Ki-67在腎盂尿路上皮癌中的表達(dá)及意義

李云1， 李勝水1，許華1，韓曉春1，劉海霞2，王麗麗3，張鳳梅1，李雙標(biāo)1，趙倩1

(1.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，河北滄州061001；2.河北省滄州市婦幼保健院 病理科,河北滄州061001；3.河北省吳橋縣中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北吳橋061800)

[摘要]目的:觀察S100P與Ki-67蛋白在腎盂尿路上皮癌組織中的表達(dá)，分析其與腎盂尿路上皮癌臨床病理特征的關(guān)系及探討兩者與腎盂尿路上皮癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性。方法:采用免疫組織化學(xué)SP法檢測52例腎盂尿路上皮癌與46例正常腎盂黏膜組織中S100P、Ki-67的表達(dá)情況。結(jié)果：S100P在腎盂尿路上皮癌組織中的陽性表達(dá)率(86.5% 45/52)明顯高于正常對照組(30.4% 14/46)(P<0.05)，同樣Ki-67在腎盂尿路上皮癌組織中的陽性表達(dá)率(80.8% 42/52)明顯高于正常對照組(26.1% 12/46)(P<0.05)；S100P、Ki-67在腎盂癌組織中的陽性表達(dá)與患者的性別、年齡無關(guān)(P>0.05)，卻與病理分級、臨床分期有關(guān)(P<0.05)；在腎盂癌組織中，S100P與Ki-67表達(dá)呈正相關(guān)，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：S100P與Ki-67過表達(dá)提示其在腎盂尿路上皮癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，因此聯(lián)合檢測兩者可能有助于判斷腎盂尿路上皮癌生物學(xué)行為及預(yù)后評估。

[關(guān)鍵詞]腎盂尿路上皮癌；S100P；Ki-67；免疫組織化學(xué)

Abstract：ObjectiveTo Investigate the expressions of S100P protein and Ki-67 in urothelial carcinoma of the renal pelvis,and analyze their expression correlation and clinical significance in urothelial carcinoma of the renal pelvis.MethodThe expressions of S100P and Ki-67 were analyze by immunohistochemical in 52 cases of urothelial carcinoma of the renal pelvis and 46 cases of normal pelvis mucosa.ResultsThe positive rate of S100P protein in urothelial carcinoma of the renal pelvis(86.5% 45/52)was significantly higher than that in normal pelvis mucosa(30.4% 14/46)(P<0.05)，Similarly，The positive rate of Ki-67 protein in urothelial carcinoma of the renal pelvis(80.8% 42/52)was significantly higher than that in normal pelvis mucosa(26.1% 12/46)(P<0.05)；The expression of S100P、Ki-67 was not associate with patient′ gender and age(P>0.05)，but was associate with pathological degree andclinical stages(P<0.05)；meanwhile there was a positive correlation between expression of S100P and Ki-67.ConclusionThe over-expression of S100P、Ki-67 is important for the development and progression of renal previc carcinoma，and It is helpful to detect the two markers together for predicting urothelial carcinoma of the renal pelvis biological behavior and prognosis.

通訊作者：李勝水

[收稿日期：2015-02-12編校：鄭英善]

Expressions of S100P and Ki-67 in urothelial carcinoma of the renal pelvis and their clinical significanceLIYun1，LISheng-shui1,XUHua1,etal(1.CangzhouHospitalforIntegratedChineseandWesternMedicine，Cangzhou061001,China；2.Departmentofpathology,Cangzhoumaternalandchildhealthcare，Cangzhou061001,China;3.Departmentofgynaecologyandobstetrics,WuqiaoHospitalforIntegratedChineseandWesternMedicine，Wuqiao061800,China)

Key Words:Urothelial carcinoma of the renal pelvis；S100P；Ki-67；Immunohistochemistry

尿路上皮癌是泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，研究發(fā)現(xiàn)有5%發(fā)生在上尿路，其中腎盂尿路上皮癌相對多見，且近年來有逐年升高的趨勢。腎盂尿路上皮癌易發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移，較膀胱癌相比預(yù)后較差。因此對尿路上皮癌的發(fā)生、發(fā)展的研究已成為熱點和重點[1]。近年來有文獻(xiàn)報道S100P可以參與細(xì)胞增殖、分化、免疫反應(yīng)的活動，與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[2]。Ki-67作為增殖細(xì)胞相關(guān)核抗原，是界定細(xì)胞凋亡和增殖的有價值的生物標(biāo)記物，能準(zhǔn)確反應(yīng)腫瘤細(xì)胞增生情況，可以判斷腫瘤惡性程度及預(yù)后[3]。本文應(yīng)用免疫組化SP法檢測S100P、Ki-67在腎盂癌中的表達(dá)及兩者的相互關(guān)系，研究其與腎盂尿路上皮癌臨床病理因素的關(guān)系。

1資料與方法

1.1標(biāo)本：選自河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院2009年5月~2014年5月腎盂尿路上皮癌52例手術(shù)切除的標(biāo)本，其中男35例，女17例，年齡42~86(平均59)歲。術(shù)后經(jīng)病理明確診斷為腎盂尿路上皮癌，所有患者術(shù)前均未接受放療、化療等治療。標(biāo)本分別在無壞死癌灶及遠(yuǎn)端正常黏膜組織取材，其中正常腎盂黏膜組織46例作為對照組。

1.2主要試劑：兔抗人S100P多克隆抗體(即用型，香港Abcam公司)，鼠抗人Ki-67多克隆抗體(即用型)、SP免疫組化試劑盒、DAB顯色劑均購于福州邁新公司。

1.3方法：采用免疫組化SP方法染色，將切片脫蠟后進(jìn)行微波修復(fù)，用山羊血清封閉后，滴加S100P抗體置于4℃冰箱過夜。用已知陽性組織做陽性對照，以PBS替代一抗做陰性對照。 次日加入二抗孵育，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。

1.4免疫組織化學(xué)結(jié)果判定：S100P主要定位于胞漿中，少數(shù)在胞核或胞膜表達(dá)，呈棕黃色或棕褐色。光鏡下隨機選擇5~10個視野，計數(shù)100~200個癌細(xì)胞，胞漿及胞核黃染者為陽性，計算出陽性細(xì)胞百分率。結(jié)果評分標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分，5%~25%為1分，26%~50%為2分，51%~75%為3分，> 75% 為4分；染色強度判定，無色為0分，淡黃色為1分，黃色或棕黃色為2分，棕褐色或褐色為3分。染色強度與陽性細(xì)胞百分比的乘積<1分為陰性，1~3分為弱陽性，4~6分為陽性，>6分為強陽性。Ki-67表達(dá)于細(xì)胞核，染色為棕黃色。隨機選取5個高倍視野，共計數(shù)1 000個細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)值并以百分?jǐn)?shù)確定，根據(jù)著色強度、范圍和分布分為4級，無明顯陽性細(xì)胞為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)<25%為弱陽性，陽性細(xì)胞數(shù)25%~50%為陽性，陽性細(xì)胞數(shù)>50%為強陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析：應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，使用χ2檢驗進(jìn)行率的比較，相關(guān)關(guān)系采用Spearman等相關(guān)分析，P<0.05表示具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1正常腎盂組織與腎盂尿路上皮癌組織中S100P、Ki-67兩種蛋白表達(dá)情況：S100P、Ki-67兩種蛋白在正常對照組與腎盂尿路上皮癌組表達(dá)均有顯著性差異(P<0.05)。S100P在腎盂尿路上皮癌組織中的陽性表達(dá)率(86.5% 45/52)明顯高于正常對照組(30.4% 14/46)，同樣Ki-67在腎盂尿路上皮癌組織中的陽性表達(dá)率(80.8% 42/52)明顯高于正常對照組(26.1% 12/46)。

表1腎盂尿路上皮癌組織中S100P、Ki-67表達(dá)與病理臨床特征的關(guān)系

生物學(xué)指標(biāo)例數(shù)S100P - + 　 　 Ki-67 - + 　 　 年齡(歲) <602746896687 ≥602537784678性別 男29478107688 女2337673767病理分級① 低級別1653537333 高級別3621012123101211臨床分期② 非肌層浸潤性1453336233 肌層浸潤性3821213114111310

2.2S100P、Ki-67與腎盂尿路上皮癌組織的病理分級及臨床分期的關(guān)系在腎盂尿路上皮癌組織中S100P、Ki-67的陽性表達(dá)與患者的性別、年齡無關(guān)(P>0.05)卻與病理分級、臨床分期之間具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。S100P、Ki-67的陽性表達(dá)率均隨病理分級及臨床分期升高而增高。見表1。

2.3S100P、Ki-67在腎盂尿路上皮癌組織中表達(dá)的相關(guān)性：在腎盂尿路上皮癌中S100P、Ki-67兩種蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，且兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2S100P、Ki-67在腎盂尿路上皮癌組織中表達(dá)的相關(guān)性(例)

S100PKi-67 + - 合計+39645-347合計421052

3討論

3.1S100P蛋白在腎盂尿路上皮癌的表達(dá)及意義：S100P最初從人類胎盤獲得，由95個氨基酸殘基組成，屬于S100蛋白家族的一個亞型[3]。近來研究證實，S100P不僅在許多腫瘤如胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌及卵巢癌等[4]中高表達(dá)，而且與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。S100P是作為一種小型鈣離子結(jié)合蛋白，發(fā)現(xiàn)其與鈣周期結(jié)合蛋白、埃茲蛋白、晚期糖基化終末產(chǎn)物等靶蛋白結(jié)合，參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，進(jìn)而對細(xì)胞異常增生、細(xì)胞惡變、腫瘤細(xì)胞運動性及浸潤力增強具有重要作用[5]。Higgins等采用cDNA微陣列技術(shù)研究了5例尿路上皮癌和5例前列腺癌中基因表達(dá)譜變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)S100P僅出現(xiàn)在尿路上皮癌中[6]。本研究發(fā)現(xiàn)S100P在腎盂尿路上皮癌組織中的表達(dá)明顯高于正常腎盂組織，說明S100P與腎盂尿路上皮癌的發(fā)生有關(guān)，而且也發(fā)現(xiàn)S100P在不同分期和分級的腎盂尿路上皮癌表達(dá)有明顯差異，也說明S100P可能參與腎盂尿路上皮癌的進(jìn)展過程，可作為一個很有價值的新的標(biāo)志物，用于腎盂尿路上皮癌的診斷及預(yù)后評估。

3.2Ki-67蛋白在腎盂尿路上皮癌的表達(dá)及意義：Ki-67作為一種與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，存在于細(xì)胞周期G1后期、S、G2、M期，參與細(xì)胞有絲分裂。Ki-67高表達(dá)是細(xì)胞增生活躍的重要標(biāo)志，提示腫瘤的惡性程度越高越容易侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后較差[7]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67蛋白在腎盂尿路上皮癌組織中的表達(dá)明顯高于正常腎盂組織，且與病理分級和臨床分期有關(guān)，這與其他研究結(jié)果一致[8]。

3.3S100P與Ki-67兩種蛋白表達(dá)的相關(guān)性：通過對兩者的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)在腎盂尿路上皮癌中，我們推測可能細(xì)胞內(nèi)S100P蛋白通過介導(dǎo)Ca2+依賴性的信號傳導(dǎo)途徑，調(diào)節(jié)蛋白磷酸化及部分酶的活性，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期性生長及增殖[9],從而表現(xiàn)為Ki-67蛋白表達(dá)增加，但是情況是否如我們推測，以及具體作用機制仍不明確，需要進(jìn)一步探索研究。

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