乙肝疫苗接種后新生兒乙型肝炎表面抗原一過性陽性的研究

劉　華，　王穎智，　沈云岳，　莊亦暉，　康　懿，

王雯靜，　吳樹英，　蔣　煒，　高　鋒

(上海交通大學附屬第六人民醫院檢驗科，上海 200233)

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乙肝疫苗接種后新生兒乙型肝炎表面抗原一過性陽性的研究

劉華，王穎智，沈云岳，莊亦暉，康懿，

王雯靜，吳樹英，蔣煒，高鋒

(上海交通大學附屬第六人民醫院檢驗科，上海 200233)

摘要：目的回顧性分析并探討接種乙型肝炎(簡稱乙肝)疫苗與新生兒乙型肝炎表面抗原(HBsAg)一過性陽性的關系。方法對進行HBsAg檢測的178例新生兒資料進行回顧性分析，對疫苗接種后的HBsAg陽性發生率、“乙肝二對半”模式、HBsAg濃度及與接種時間的關系等進行了統計分析，通過膽紅素干擾試驗排除新生兒黃疸對HBsAg檢測的影響，根據新生兒血容量進行乙肝疫苗體外稀釋,檢測其HBsAg濃度。結果178例新生兒共檢測184次，檢出HBsAg陽性16例，其中11例為乙肝疫苗引起的HBsAg陽性，3例為母嬰垂直傳播引起的HBsAg陽性，2例不確定。新生兒乙肝疫苗接種后HBsAg陽性主要發生于接種疫苗后0～7 d，與疫苗接種后8～14 d及15～31 d比較，HBsAg的陽性率差異有統計學意義(P值分別為0.046、0.032)。疫苗接種后的HBsAg濃度為0.12(0.07～0.25)IU/mL，屬低值水平。接種疫苗后0～2 d，HBsAg濃度最高，之后逐漸下降。乙肝疫苗接種后11例以HBsAg單項陽性為主，其中3例同時伴乙型肝炎表面抗體(HBsAb)陽性，不同于乙肝病毒感染后常見血清模式。將乙肝疫苗1∶600稀釋后檢測HBsAg為0.13 IU/mL，與乙肝疫苗引起的HBsAg陽性濃度[0.12(0.07～0.25)IU/mL]近似。干擾試驗顯示383.9 μmol/L總膽紅素、29.9 μmol/L直接膽紅素不影響HBsAg檢測。結論接種乙肝疫苗2周內的新生兒發生HBsAg一過性陽性的可能性較大，建議HBsAg檢測在乙肝疫苗接種2周后再進行。

隨著檢驗技術的進步，化學發光法檢測乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)的靈敏度已達到0.15 ng/mL。近幾年來，我們在臨床檢驗工作中就遇到不少新生兒HBsAg一過性陽性的情況，而他們的母親多數不是乙型肝炎(簡稱乙肝)患者。這引起了我們的極大關注。因此，我們對檢測HBsAg的新生兒的相關病史進行了回顧性分析，同時分析了乙肝疫苗引起的HBsAg一過性陽性發生時間、頻率、濃度、乙肝標志物模式，將乙肝疫苗按新生兒血容量進行體外稀釋，模擬體內疫苗濃度并檢測HBsAg含量，通過膽紅素干擾試驗排除新生兒黃疸對HBsAg檢測的影響，為臨床合理解釋新生兒HBsAg陽性結果提供實驗室依據，也為臨床合理掌握檢測HBsAg節點提供指導性建議。

材料和方法

一、研究對象

收集2010年1月至2013年8月上海交通大學附屬第六人民醫院兒科住院部新生兒檢測HBsAg的病例178例，男100例，女78例，年齡1～31 d。對178例新生兒病史資料進行回顧性分析。其中，147例新生兒在出生24 h內接受了乙肝疫苗接種，根據疫苗接種時的年齡將這147例新生兒分為0～7 d組、8～14 d組和15～31 d組分別進行統計。

二、儀器與試劑

ABBOTT i2000全自動免疫發光分析儀及配套HBsAg化學發光定量檢測試劑、HBsAg稀釋液(美國雅培公司)；HBsAg弱陽性混合血清；Sysmex干擾檢測試劑盒；日立7600全自動生化分析儀及配套膽紅素檢測試劑(日本日立公司)；重組乙肝疫苗(劑量：0.5 mL/支，含重組HBsAg 10 mg)。

三、方法

1．乙肝指標檢測乙肝指標包括HBsAg、乙肝表面抗體(anti-hepatitis B surface antigen antibody, HBsAb)、乙肝e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)、乙肝核心抗體(anti-hepatitis B core antigen antibody, HBcAb)、乙肝e抗體(anti-hepatitis B e antigen antibody, HBeAb)，合稱為“乙肝二對半”。以上指標均采用微粒子化學發光法。依據操作規程做好定標和室內質量控制，結果以HBsAg>0.05 IU/mL判定為有反應性，所有有反應性的樣本均已按復檢要求復檢為陽性。常見的“乙肝二對半”模式見表1。

表1　常見“乙肝二對半”模式

2．總膽紅素(total bilirubin, TBil)和直接膽紅素(direct bilirubin, DBil)檢測采用礬酸氧化法檢測TBil和DBil，按要求做好定標工作和室內質量控制，TBil參考區間為0～18 μmol/L，DBil參考區間為0～6 μmol/L。

4．重組乙肝疫苗制品HBsAg檢測使用HBsAg稀釋液按1∶200、1∶600、1∶1 000、1∶2 000分別對重組乙肝疫苗進行稀釋，然后檢測HBsAg濃度。如果按新生兒平均體重3 000 g，血容量300 mL，注射一支疫苗(0.5 mL/支)計算，相當于將疫苗1∶600稀釋。

四、統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統計分析。HBsAg濃度以中位數(范圍)表示，率的比較采用卡方檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

結果

一、178例新生兒HBsAg陽性結果分析

178例新生兒中有147例在出生24 h內接種了乙肝疫苗，疫苗接種率為82.6%；其中有12例新生兒在接種后1周內檢測HBsAg呈陽性，濃度為0.12(0.07～0.25)IU/mL。這12例新生兒中有6例進行了第2次HBsAg隨訪檢測，其中4例確認為陰性結果。查閱這12例HBsAg陽性新生兒母親病史，其中11名無肝炎史，排除母嬰垂直傳播的可能性；另1例新生兒母親病史資料及患兒HBsAg隨訪資料缺失。見表2。

另外31例未接種乙肝疫苗的新生兒中有4例HBsAg呈陽性，且其中3例在出生后1 d的“乙肝二對半”結果即顯示為“大三陽”模式，其母親均為乙肝“大三陽”患者，存在母嬰垂直傳播的可能性；另1例新生兒出生后5 d檢測HBsAg呈陽性(0.16 IU/mL)，且“乙肝二對半”結果為HBsAg單項陽性，其母親肝炎史不詳，該新生兒也未能進行HBsAg隨訪。見表3。

178例新生兒HBsAg檢測結果的分類統計流程圖見圖1。

表2　12例接種乙肝疫苗的HBsAg陽性新生兒的一般資料

注：“+”表示HBsAg陽性；“-”表示HBsAg陰性

表3　未接種乙肝疫苗的HBsAg陽性新生兒資料

圖1　新生兒不同時間內檢測HBsAg結果分類統計流式圖

二、乙肝疫苗接種后新生兒HBsAg陽性的濃度及“乙肝二對半”模式分析

未接種組的HBsAg陽性濃度[1.11(0.16～2.65) IU/mL]明顯高于接種乙肝疫苗組[0.12(0.07～0.25)IU/mL]。乙肝疫苗接種后HBsAg陽性的濃度值多<0.5 IU/mL，而未接種疫苗的4例中有2例HBsAg陽性結果>2 IU/mL，見圖2。

乙肝疫苗接種后HBsAg陽性的“乙肝二對半”模式以HBsAg單項陽性為主，其中3例同時伴HBsAb低值陽性，見表2；而未接種疫苗的HBsAg陽性的“乙肝二對半”模式以“大三陽”為主，見表3。

三、新生兒接種疫苗后HBsAg陽性出現的時間分析

147例接種乙肝疫苗的新生兒中有12例HBsAg呈陽性(>0.05 IU/mL)。HBsAg陽性主要集中于接種后7 d內，接種后8～14 d及15～31 d HBsAg均呈陰性。見圖3。

12例接種乙肝疫苗后HBsAg呈陽性的新生兒其HBsAg濃度隨著乙肝疫苗接種時間的增加而逐漸下降。接種后0～2 d，HBsAg處于較高水平(≥0.2 IU/mL)；接種后3～5 d，HBsAg濃度不斷下降，于6～7 d降至0.1 IU/mL。見圖4。

圖2　接種疫苗組與未接種疫苗組HBsAg濃度比較

注：虛線為HBsAg陽性判定值(0.05 IU/mL)；與0～7 d組比較，*P<0.05

圖3新生兒接種乙肝疫苗后HBsAg陽性的時間及結果

圖4　新生兒接種乙肝疫苗后HBsAg濃度的變化

四、黃疸對HBsAg低值陽性的干擾

對照樣本HBsAg檢測均值為0.200 IU/mL(n=12)，±1.96s范圍為0.184～0.206 IU/mL。TBil干擾實驗樣本的HBsAg檢測均值為0.194 IU/mL(n=7)，DBil干擾實驗樣本的HBsAg檢測均值為0.188 IU/mL(n=5)，均在可接受范圍內。

五、重組乙肝疫苗制品檢測HBsAg結果

重組乙肝疫苗直接檢測HBsAg的結果為7.00 IU/mL，將疫苗分別以1∶200、1∶600、1∶1 000、1∶2 000稀釋后，檢測HBsAg濃度分別為0.31、0.13、0.13和0.06 IU/mL。將疫苗以1∶600稀釋測得的HBsAg濃度與接種疫苗后新生兒HBsAg陽性濃度[0.12(0.07～0.25)IU/mL]相符。

討論

乙肝病毒疫苗含有純化的基因重組HBsAg，在注射疫苗后可能會使HBsAg檢測呈陽性。國外在乙肝疫苗應用初期已發現了這個問題。20世紀90年代之后陸續有研究者發現因注射乙肝疫苗Engerix B 導致新生兒HBsAg一過性陽性的情況[2-4]。但由于新生兒的血液樣本較難得到，因此這些文獻報道中的標本量都相對較少，從十幾例至幾十例，疫苗接種后HBsAg的陽性檢出率也由17%至55%不等，相差懸殊。之后陸續有類似情況的報道，透析患者[5-6]、獻血員[7]及普通成人[8-10]都有涉及。我國于2002年正式將乙肝疫苗納入計劃免疫，起步較晚，因此國內罕有關于新生兒HBsAg一過性陽性的報道。

本研究針對中國人群及國產疫苗，回顧分析了178名新生兒的184次HBsAg檢測結果，樣本量較之前的報道都大，并首次對乙肝疫苗接種后新生兒HBsAg一過性陽性常為低值陽性的原因給出了解釋。由于新生兒樣本量有限，本研究中的陽性標本無法進行中和試驗確認，但所有陽性血清樣本及隨訪標本均按說明書以10 000×g離心10 min后進行重復檢測確認。從總體情況來看，本院乙肝疫苗引起新生兒HBsAg一過性陽性的發生率為8.2%，低于國外早期的研究結果[3-4]，這可能和檢測方法的不同及Cut-off值的設定有關。

從接種時間上觀察，本研究中新生兒接種乙肝疫苗后檢測到HBsAg陽性都集中于接種疫苗后的1周內，這與文獻報道的時間相符[3-5]。但8～14 d檢測到陽性的可能性仍然較高，因此建議HBsAg檢測最好在接種疫苗后至少2周以后再進行。有2例新生兒進行HBsAg第2次隨訪檢測時未能轉陰，可能就是由于隨訪時間在疫苗接種后的1周內，血液中仍然存在可檢出的重組HBsAg。

從HBsAg陽性濃度分析，疫苗接種后新生兒HBsAg陽性濃度為低值水平[0.12(0.07～0.25)IU/mL]，一過性HBsAg陽性濃度在接種疫苗后0～2 d較高，之后隨著乙肝疫苗接種時間的增加而呈逐漸下降的趨勢，這與BERNSTEIN等[4]與RYSGAARD等[8]的報道稍有差異，他們發現HBsAg高峰值出現在接種疫苗后的2～3 d，之后逐漸下降。原因可能為一方面研究對象不完全相同，另一方面本研究中0～2 d的例數相對較少，不能完全代表整體水平。從“乙肝二對半”模式上發現，接種疫苗后的模式只分為HBsAg單項陽性(75%)以及HBsAg陽性伴低值HBsAb陽性(25%)2種模式，不同于常規乙肝病毒感染后的模式。干擾試驗證明，本研究中新生兒黃疸對HBsAg檢測無影響，HBsAg陽性與黃疸無關。

綜上所述，我們初步推斷新生兒HBsAg一過性陽性可能與乙肝疫苗接種直接相關。因此提醒臨床醫師盡量在疫苗接種2周后再進行HBsAg檢測，以排除乙肝疫苗對HBsAg檢測的影響。

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(本文編輯：龔曉霖)

關鍵詞：乙型肝炎表面抗原；一過性陽性；乙型肝炎疫苗；新生兒

Research on vaccine-induced transient hepatitis B surface antigen positivity in newborn infantsLIUHua，WANGYingzhi，SHENYunyue，ZHUANGYihui，KANGYi，WANGWenjing，WUShuying，JIANGWei，GAOFeng. (DepartmentofClinicalLaboratory，theSixthHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200233，China)

Abstract:ObjectiveTo retrospectively analyze and study the relationship of vaccination against hepatitis B virus with transient hepatitis B surface antigen(HBsAg) positivity in newborn infants. MethodsThe data of 178 newborn infants were collected and analyzed retrospectively, who were determined for HBsAg. The positive rate of HBsAg, hepatitis B 5 items, HBsAg concentration and vaccination time after vaccine inducing were determined, and the relationships were analyzed statistically. Interference testing was performed to investigate the influence of serum jaundice in HBsAg assay. The hepatitis B virus vaccine was diluted in vitro according to neonatal blood volume, and HBsAg concentration was detected. ResultsA total of 178 newborn infants were determined for 184 times totally, and 16 newborn infants had positive HBsAg. Of these 16 newborn infants， 11 cases could be attributed to vaccination， 3 cases were due to mother-to-child transmission， and 2 cases were with unknown cause. The HBsAg positivity for newborn infants receiving vaccine 0-7d were statistically significant in comparison with those of 8-14 d and 15-31 d (P=0.046 and 0.032). After the vaccine was injected, the concentration of HBsAg was 0.12 (0.07-0.25) IU/mL, which was at low level. The concentration of HBsAg reached the highest level after 0-2d of injection, and then it decreased gradually. There were totally 11 samples which were HBsAg single positive, and 3 samples of them were both HBsAg and anti-hepatitis B surface antigen antibody (HBsAb) positive, which was obviously different from the common serum pattern of hepatitis B virus infection. HBsAg concentration was 0.13 IU/mL at 1∶600 dilution of vaccine， being similar with that of vaccine-induced HBsAg positive [0.12 (0.07-0.25) IU/mL]. Jaundice interference testing showed that 383.9 μmol/L total bilirubin and 29.9 μmol/L direct bilirubin distractors did not affect HBsAg results. ConclusionsTransient HBsAg positivity can occur in newborn infants within 2 weeks post-vaccination. Newborn infants may not be screened for HBsAg within 2 weeks following vaccination against hepatitis B virus.

Key words:Hepatitis B surface antigen；Transient positivity；Hepatitis B virus vaccine；Newborn infant

收稿日期：(2015-03-23)

通訊作者：髙鋒，聯系電話：021-24058702。

作者簡介：劉華，女，1976年生，學士，主管技師，主要從事臨床免疫學檢驗工作。

中圖分類號：

文章編號：1673-8640(2015)11-1107-05R446.62

文獻標志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.11.012