淺談進行HPV－DNA負荷量及基因型檢測在診斷宮頸病變中的效果

譚夏明 趙鳴春

（廣西桂林市人民醫院 廣西 桂林 541002）

宮頸病變是婦科臨床上的常見病。此病嚴重威脅女性的生命健康。此類疾病主要包括宮頸糜爛、宮頸上皮內瘤變（CIN）和宮頸癌（CC）。研究發現，宮頸病變的發生與HPV感染密切相關[1]。目前，臨床上對宮頸病變患者通常進行HPV－DNA負荷量及基因型的檢測，以明確其宮頸病變的類型及程度，進而對其進行有針對性的治療。為了進一步分析進行HPV－DNA負荷量及基因型檢測在診斷宮頸病變中的效果，筆者進行了本次研究。現報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院于2014年9月～2015年9月期間收治的76例宮頸病變患者，將其作為本次研究的對象。這些患者的平均年齡為（47.5±15.3）歲，其平均體重為（52.8±7.8）kg，其平均病程為（7.9±3.3）年。這些患者均自愿參加本次研究。本次研究排除服用激素進行治療、患有乳腺癌及尖銳濕疣的患者。對這76例患者均進行陰道鏡活檢。其中，有2例宮頸糜爛患者，有7例CINⅠ患者，有11例CINⅡ患者，有25例CINⅢ患者，有31例宮頸癌患者。

1.2 檢測方法 對這76例患者均進行HPV－DNA負荷量及基因型的檢測。具體的檢測方法如下：①使用第二代雜交捕獲實驗技術 (HC2) 對這些患者宮頸的分泌物進行HPVDNA負荷量的檢測。當標本中HPV-DNA的含量＜1 pg/ml即RLUS/CO值 ＜1時，說明該檢測結果為陰性，反之為陽性。②用凱普生物化學科技公司生產的HPV核酸擴增分型檢測試劑對這些患者宮頸的分泌物進行HPV基因分型的檢測。用宮頸采樣器收集患者宮頸處的分泌物，通過離心、洗滌、沉淀、酶學處理、雜交等步驟，提取患者的DNA，將其作為PCR的模板。40個周期以后，提取PCR的產物，對其進行反向點雜交處理，加入底物顯色后進行分析。該方法可檢測出21種常見的HPV亞型，其中包括13種高危 型 HPV (HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)、5 種低危型 HPV (HPV 6、11、42、43、44)及3種常見的HPV亞型(HPV 53、66及CP8304)。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對本研究中的數據進行分析，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數資料用（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

對這76例患者進行HPV－DNA負荷量及基因型檢測的結果顯示，在這些患者中，有4例宮頸糜爛患者，有9例CINⅠ患者，有11例CINⅡ患者，有15例CINⅢ患者，有37例宮頸癌患者。這76例患者均出現HPV感染，其感染的類型主要為單一感染，其感染HPV的基因型主要為HPV16?；颊逪PV-DNA 的負荷量越大，其病情越嚴重。詳細數據如表1、表2所示：

表1對這76例患者進行HPV－DNA負荷量檢測的結果（±s）

表1對這76例患者進行HPV－DNA負荷量檢測的結果（±s）

疾病類型 樣本數 陽性率( %)HPV基因型( 例)感染類型( 例/%)低危型 高危型 單一感染 多重感染宮頸糜爛 4 5.3% 1 3 3/75% 1/25%CINⅠ 9 11.8% 4 5 5/55.6% 4/44.4%CINⅡ 11 14.5% 4 7 7/63.6% 4/36.4%CINⅢ 15 19.7% 4 11 9/60% 6/40%宮頸癌 37 48.7% 6 31 25/67.6% 12/32.4%

表2 對這76例患者進行HPV－DNA負荷量檢測的結果（±s）

表2 對這76例患者進行HPV－DNA負荷量檢測的結果（±s）

1000以上（RLU/CO）宮頸糜爛 4 2/50% 1/25% 1/25% 0/0 CINⅠ 9 2/22.2% 4/44.4% 2/22.2% 1/11.1%CINⅡ 11 2/18.2% 2/18.2% 3/27.3% 4/36.4%CINⅢ 15 1/6.7% 3/20% 4/26.7% 7/46.7%宮頸癌 37 1/2.7% 5/13.5% 9/24.3% 22/59.5%HPV-DNA 的負荷量( 例/%)1 ～ 100（RLU/CO）樣本數疾病類型101～500（RLU/CO）501～1000（RLU/CO）

3 討論

HPV是一種球形DNA病毒。此病毒會引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮細胞出現增生。宿主一旦感染此病毒，會終身攜帶。HPV主要是通過性接觸進行傳播。相關調查的結果顯示，在所有頻繁進行性行為的成年人中，超過50%的人至少感染過一種HPV。其中，女性感染HPV的幾率明顯高于男性。當機體免疫系統的能力不足，但可以抑制病毒的復制時，HPV病毒和機體的免疫系統相互制約，可以達到一種平衡的狀態[2]。此時，宿主體內的HPV病毒不表達。在所有的HPV感染者中，約有10%的HPV感染者其發病原因為機體的免疫力低下。此類感染者的機體既不能有效地清除HPV，也無法抑制HPV的復制，這導致其HPV感染不斷加重。隨著患者病情的不斷發展，HPV持續侵犯其機體正常的組織和器官，當到達一定的程度時，患者會出現HPV感染的癥狀。

宮頸癌是臨床上一種常見的惡性腫瘤。此病的發病率位于女性生殖道惡性腫瘤的首位。近年來，此病的發病率逐漸升高，且患者的年齡呈年輕化表現。從宮頸癌前病變發展為宮頸癌是一個漫長的過程（時間多在10年以上），因此，對宮頸癌前病變患者進行早期篩查，為其采取有效的方法進行治療，可以避免其病情發展為宮頸癌[3]。研究發現，HPV感染是誘發宮頸癌前病變及宮頸癌的重要原因。HPV感染的發生機制為：HPV侵犯機體后，其裸露的DNA利用機體的堿基等資源開始進行復制、轉錄及翻譯，從而產生蛋白質E1、E2、E4、E5、E6、E7及其亞型，這些表達產物入駐患者宮頸的上皮細胞，進而生成癌基因，并產生癌蛋白。機體的原癌基因和抑癌基因開始表達，正常的細胞周期被破壞，細胞分裂開始不受機體的控制，并出現惡性增殖和基因突變的情況，其分化程度呈多樣性，其表達的產物隨之發生改變。因此疾病的發生和發展均與基因的表達密切相關，所以臨床上多通過檢測病毒的表達產物來對宮頸病變患者的病情進行診斷。

宮頸癌患者主要感染的是高危型HPV，即對此病患者宮頸的分泌物進行HPV-DNA檢測時，可以檢測到HPV 16、18、31等15種病毒亞型，其中以HPV 16最為常見。HPV 感染的類型主要包括單一感染和多重感染，臨床上以單一感染最為常見。微生物因素和微生態環境因素均是誘發HPV感染的重要原因。本次研究的結果顯示，CIN 及宮頸癌患者HPV 感染的類型主要為單一感染，但不排除多重感染的可能，初步判斷HPV 感染的發生與患者陰道內的菌群失調有關。

總之，對宮頸病變患者進行HPV－DNA負荷量及基因型的檢測，可以明確地判斷出患者宮頸病變的類型及程度。此檢測方法具有較高的臨床應用價值。

[1] 季冰,何浪馳,郭芝亮，等. HC2-HPV-DNA檢測在宮頸癌病變中的臨床分析[J].實用癌癥雜志,2015,30(6):843-845.

[2] 陳霞,楊靜秀,吳曉燕.HPV不同亞型在中重度宮頸上皮內瘤變與宮頸癌中的分布及臨床意義[J].中國婦幼保健,2014,29:3402-3403.

[3] 傅景萍. HPV感染結合負荷量檢測對宮頸癌及上皮內瘤變的診斷價值[J].中國微生態學雜志,2015,27(2):205-208.