hTERC、ASPP2mRNA在子宮內膜癌變過程中的表達變化及意義

段清，尹利榮，田晶(天津醫科大學第二醫院，天津300211)

hTERC、ASPP2mRNA在子宮內膜癌變過程中的表達變化及意義

段清，尹利榮，田晶
(天津醫科大學第二醫院，天津300211)

摘要:目的探討hTERC、ASPP2mRNA在子宮內膜癌變過程中的表達變化，并探討其臨床意義。方法收集正常子宮內膜、子宮內膜增生(單純增生、復合增生、不典型增生)、子宮內膜癌組織，分別采用熒光原位雜交法、半定量RT-PCR法檢測hTERC、ASPP2mRNA，分析二者相關性及其與子宮內膜癌臨床病理特征的關系。結果在正常子宮內膜、子宮內膜單純增生、復合增生、不典型增生及子宮內膜癌中hTERCmRNA表達依次升高、ASPP2mRNA表達依次降低，除hTERC在正常子宮內膜與單純增生之間、ASPP2mRNA在不典型增生與子宮內膜癌之間的表達差異無統計學意義(P均＞0.05)外，其余兩兩比較差異均有統計學意義(P均＜0.05);不同子宮內膜組織中hTERC、ASPP2mRNA的表達呈負相關(r =－0.625，P＜0.05); hTERC、ASPP2mRNA表達與子宮內膜癌組織學分級、癌浸潤深度、淋巴結轉移有關(P均＜0.05)，hTERCmRNA表達與臨床分期無關(P＞0.05)，ASPP2mRNA表達與臨床分期有關(P＜0.05)。結論在子宮內膜癌變過程中，hTERCmRNA表達上調、ASPP2mRNA表達下調或缺失，二者有助于子宮內膜癌的早期診斷和預后判斷。

關鍵詞:子宮內膜癌;端粒酶;子宮內膜增生; hTERC基因; ASPP2基因

子宮內膜癌的發病過程復雜，多種因素參與其中。端粒酶激活可促進腫瘤的發生，hTERC基因在端粒酶活性的上調中起重要作用［1］。ASPP2是一種抑瘤基因［2］，ASPP2缺陷可導致腫瘤的發生。本研究通過觀察hTERC、ASPP2mRNA在子宮內膜癌變過程中的表達變化，探討二者對子宮內膜癌早期診斷和預后判斷的價值。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集天津醫科大學第二醫院病理科2003～2013年手術切除經病理確診的子宮內膜癌45例，術前均無放、化療治療史;另取正常子宮內膜20例及子宮內膜單純增生28例、復合增生29例、不典型增生26例，均來自因子宮肌瘤或功能失調性子宮出血而行子宮切除者，術前均無激素治療史。

1.2hTERCmRNA檢測采用熒光原位雜交(FISH)技術。以TERC/CSP3dNA雙色探針，分別標記TERC基因(3q26.3)及3號染色體著絲粒(3p11.1-q11.1)，熒光信號分別為紅色和綠色。將石蠟標本切成4 μm厚切片，65℃烘烤2 h，變形雜交，洗滌玻片，自然風干后對FISH熒光信號進行判讀。以單個間期細胞核中紅色及綠色信號各為2個為正常細胞，單個間期細胞核中紅色信號＞2個且綠色信號≥2個為hTERC基因擴增異常細胞。計數100個細胞，計算異常細胞所占比例，以此表示hTERCmRNA相對表達量。

1.3 ASPP2mRNA檢測采用RT-PCR法。按照Genebank報道的人類ASPP2及β-actinmRNA的基因序列設計PCR引物，以合成的cDNA為模板進行PCR擴增反應。擴增條件: 93℃40 s，64℃40 s，72 ℃50 s，循環30次;最后72℃8min。取6 μL PCR擴增產物行瓊脂糖凝膠電泳，用Imagestore-5000系統對所獲得的條帶做半定量分析，以ASPP2與βactin條帶吸光度比值作為ASPP2mRNA相對表達量。

1.4統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以珋x±s表示，各組總體均數比較用方差分析，組間兩兩比較用q檢驗;相關性分析采用Spearman's Rho法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1不同子宮內膜組織中hTERC、ASPP2mRNA相對表達量比較見表1。

2.2不同子宮內膜組織中hTERC、ASPP2mRNA表達的關系子宮內膜組織中，hTERC、ASPP2mRNA

表達呈負相關(r =－0.625，P＜0.05)。

表1　不同子宮內膜組織中hTERC、ASPP2mRNA相對表達量比較()

表1　不同子宮內膜組織中hTERC、ASPP2mRNA相對表達量比較()

注:與單純增生比較，*P＜0.05;與復合增生比較，#P＜0.05;與不典型增生比較，△P＜0.05;與子宮內膜癌比較，○P＜0.05。

子宮內膜組織　n　hTERCmRNA(%)ASPP2mRNA正常子宮內膜20　4.34±1.84　1.61±0.19單純增生組織　28　5.79±1.96　1.32±0.16*復合增生組織　29　10.34±1.62* #　0.96±0.09* #不典型增生組織　26　15.57±2.19* #△　0.70±0.08* #△子宮內膜癌　45　21.42±4.05* #△○　0.69±0.07* #△

2.3 hTERC、ASPP2mRNA表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系見表2。

表2　hTERC、ASPP2mRNA表達與子宮內膜癌患者臨床病理參數的關系()

表2　hTERC、ASPP2mRNA表達與子宮內膜癌患者臨床病理參數的關系()

臨床病理參數　n hTERCmRNA(%)P　ASPP2mRNA P臨床分期Ⅰ期　23　21.24±3.85　0.91±0.09Ⅱ期　17　24.62±4.32＞0.05 0.77±0.09＜0.05Ⅲ、Ⅳ期　5　26.58±4.91　0.61±0.07分化程度高分化　18　21.52±3.75　0.88±0.08中分化　12　25.01±4.62＜0.05 0.75±0.08＜0.05低分化　15　30.39±5.01　0.64±0.09浸潤深度內膜層　20　20.42±4.24　0.89±0.10 ≤1/2肌層　19　26.15±4.36＜0.05 0.71±0.07＜0.05 ＞1/2肌層　6　31.24±5.27　0.70±0.08淋巴結轉移無37　21.46±4.26　＜0.050.82±0.09＜0.05 有8　30.24±5.05　0.64±0.07

3　討論

hTERC是合成端粒重復序列的模板，是端粒酶活性必需的核心組分之一，能夠延長端粒和保持其穩定，且單一外源性TERC就能增強細胞的增殖潛能及端粒酶的活性，因此hTERC基因在端粒酶活性的上調中起重要作用［3～5］。研究已證實，hTERC基因在宮頸癌組織中異常擴增，但其在子宮內膜癌中的表達情況研究較少。Paul-Salojedny等［6］發現，子宮內膜癌組織中hTERC陽性率(85.7%)高于正常子宮內膜組織(37.5%)。提示hTERC在子宮內膜癌的發生中起重要作用。Yokoyama等［7］發現，用于清除hTERC模板區的36-核酶能抑制子宮內膜癌細胞系的端粒酶活性，導致癌細胞凋亡。提示將hTERC模板區作為核酶的靶分子，降低端粒酶活性，有望成為子宮內膜癌靶向治療的新靶點。本研究顯示，在子宮內膜癌變過程中，hTERC基因表達逐漸增高，提示其在子宮內膜癌發生發展中具有重要作用。

ASPP2是p53結合蛋白家族促凋亡成員，通過增強p53的促凋亡基因啟動子與DNA結合而促進細胞凋亡［8，9］。動物實驗顯示，ASPP2等位基因具有明顯的腫瘤抑制作用，可抑制腫瘤的發生［10，11］。最近研究表明，ASPP2可通過其N端結構，以非p53依賴途徑發揮其生物學功能。ASPP2通過N端與RAS結合，由RAS/RAF途徑促進細胞衰老，從而抑制腫瘤［12，13］。亦可通過其他機制來完成細胞的損傷修復和誘導凋亡［14，15］，如與p53高度同源的p73和p63分子結合。本研究顯示，在正常子宮內膜及子宮內膜單純增生組織、復合增生組織、不典型增生組織、內膜癌的連續病變中，ASPP2基因表達逐漸減少或缺失。支持ASPP2基因突變失活導致ASPP2蛋白低水平表達，從而失去了對細胞生長、增殖的負調控作用，促進腫瘤發生發展的觀點，證實ASPP2低表達是子宮內膜癌的早期分子事件。

本研究顯示，在子宮內膜組織中，hTERC、ASPP2mRNA表達呈負相關，且二者基因表達與子宮內膜癌的臨床分期、組織學分級有關。表明二者在子宮內膜癌的發生發展中起重要作用，有助于子宮內膜癌的早期診斷和預后判斷。

參考文獻:

［1］Bin H，Ruifang W，Ruizhen L，et al.Detention of HPV L1 capsid protein and hTERC gene in screening of cervical cancer［J］.Iran J Basicmed Sci，2013，16(6): 797-802.

［2］Kampa KM，Acoba JD，Chend，et al.Apoptosis-stimulating protein of p53(ASPP2)heterozygousmice are tumor-prone and have attenuated cellulardamage response thresholds［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2009，106(11): 4390-4395.

［3］Zhao XY，Cui Y，Jiang SF，et al.Human telomerase gene and high-risk human papillomavirus infection are related to cervical intraepithelial neoplasia［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2015，16(2): 693-697.

［4］Kuglik P，Kasikova K，Smetana J，et al.Molecular cytogenetic analyses of hTERC(3q26)andmYC(8q24)genes amplifications in correlation with oncogenic human papillomavirus infection in Czech patients with cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinomas［J］.Neoplasma，2015，62(1): 130-139.

［5］徐靜，李磊，張麗，等.不同CIN分級宮頸病變組織中hTERC基因表達及意義［J］.山東醫藥，2014，54(14): 43-44.

［6］Paul-Samojednym，Witek A，Samojedny A，et al.Human tolomerase RNA as endogenous control in endometrial tissue［J］.Int J Gynecol Cancer，2005，15(2): 343-348.

［7］Yokoyama Y，Wan X，Shinohma A，et al.Hammerheadribozymes tomodulate telomerase activity of endometrial carcinoma cell［J］.Hum Cell，2001，14(3): 223-231.

［8］李士軍，施廣霞，袁宏，等.非小細胞肺癌p53凋亡刺激蛋白家族表達臨床研究［J］.中華實用診斷與治療雜志，2010，24(11): 1060-1062.

［9］Ahn J，Byeon IJ，Byeon CH，et al.Insight into the structural basis of pro-and antiapoptotic p53modulation by ASPP proteins［J］.Biol Chem，2009，284(20): 13812-13822.

［10］Kampa KM，Acoba JD，Chend，et al.Apoptosis-stimulating protein of p53(ASPP2)heterozygousmice are tumor-prone and have attenuated cellulardamage response thresholds［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2009，106(11): 4390-4395.

［11］Notarim，Hu Y，Koch S，et al.Inhibitor of apoptosis-stimulating protein of p53(iASPP)prevents senescence and is required for epithelial stratification［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108(40): 16645-16650.

［12］Wang Z，Liu Y，Takahashim，et al.N terminus of ASPP2 binds to Ras and enhances Ras/Raf/MEK/ERK activation to promote oncogene-induced senescence［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2013， 110(1): 312-317.

［13］Zhou Q，Zhao H，Gong W，et al.Phosphorylation status of ASPP2modulates p53 apoptotic function in oxaliplatin-induced apoptosis of colorectal cancer HCT116 cells［J］.Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2014，36(6): 418-423.

［14］Ethayathulla AS，Nguyen HT，Viadiu H.Crystal structures ofdNA-bindingdomain tetramer of the p53 tumor suppressor familymember p73 bound todifferent full-site response elements［J］.J Biol Chem，2013，288(7): 4744-4754.

［15］Guan X，Zhang N，Yin Y，et al.Polymorphisms in the p63 and p73 genes are associated with ovarian cancer risk and clinicopathological variables［J］.J Exp Clin Cancer Res，2012，31(24): 89.

收稿日期:( 2015-02-28)

通信作者:田晶

文章編號:1002-266X(2015)34-0038-03

文獻標志碼:B

中圖分類號:R737.3

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.34.016