miR－21與miR－375在食管鱗狀細胞癌組織中的表達及意義

miR-21與miR-375在食管鱗狀細胞癌組織中的表達及意義

冷超，張晶晶

(南華大學附屬第一醫(yī)院，湖南衡陽 421001)

摘要：目的觀察食管鱗狀細胞癌(ESCC)癌組織中miR-21、miR-375的表達，分析兩者與ESCC患者臨床病理特征及預后的關系。方法選擇39例ESCC患者的癌組織及其正常食管黏膜組織標本，采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應法檢測miR-21、miR-375。隨訪至患者死亡或截止2015年4月1日，采用Kaplan-Meier法分析miR-21、miR-375表達與 ESCC患者預后的關系，采用Cox比例風險回歸模型分析影響ESCC患者預后的因素。結(jié)果 ESCC癌組織、癌旁組織中miR-21的表達分別為0.697±0.412、0.449±0.337，miR-375的表達分別為0.322 ±0.215 、0.484 ± 0.341，癌組織中miR-21的表達高于癌旁組織、miR-375的表達低于癌旁組織(P均<0.05)。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期者miR-21表達較高(P均<0.05)。miR-21高表達者的3年生存率低于低表達者，miR-375高表達者的3年生存率高于低表達者(P均<0.05)。miR-21高表達和miR-375低表達患者生存預后較差，是影響ESCC患者預后的獨立因素(P均<0.05)。結(jié)論 ESCC患者癌組織中miR-21表達增高，且發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期較高者miR-21表達較高。miR-21高表達、miR-375低表達的ESCC患者預后較差。

關鍵詞：食管鱗狀細胞癌；微小RNA；生存分析；預后

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.42.022

中圖分類號：R730.2；R735.1 文獻標志碼：B

收稿日期：(2015-08-03)

食管癌是臨床常見的消化道惡性腫瘤，食管鱗狀細胞癌(ESCC)是其主要的病理類型。尋找能夠用于早期診斷和判斷腫瘤轉(zhuǎn)移的生物標志物對于ESCC的治療具有重要意義[1]。近年研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA(miRNAs)參與了多種腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，不同的miRNAs在不同的腫瘤組織中可表現(xiàn)為異常增高或降低，可作為抑癌基因或癌基因行使功能[2]。因此，研究與ESCC相關的miRNAs對于ESCC的診斷、治療及預后判斷具有重要意義。近年來，我們對39例ESCC患者的癌組織中miR-21、miR-375的表達進行了檢測，分析兩者與患者臨床病理特征及預后的關系，為ESCC的早期診斷、治療及預后判斷提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2008年12月～2011年10月于我院胸外科手術切除的39例ESCC患者的癌組織及其正常食管黏膜組織標本。男31例、女8例，年齡(53.7±8.6)歲。病變位于胸上段5例、胸中段24例、胸下段10例。低分化6例，中分化27例，高分化6例。均經(jīng)病理檢查確診。患者手術前后均未接受放化療及生物免疫治療。所有患者簽署知情同意書。

1.2miR-21、miR-375表達檢測采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應法。按試劑盒說明書提取組織總RNA，采用15 μL反應體系，包括反應體系混合物7 μL、Taqman引物3 μL及RNA樣本5 μL。擴增過程為95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 1 s循環(huán)40次，最后60 ℃ 1 min。以U6 snRNA作為內(nèi)參，參考文獻[3]描述的2-ΔCt法計算相對表達量，ΔCt=(CtmiRNA-CtU6snRNA)。根據(jù)miR-21、miR-375表達的中位數(shù)，將39例標本分為高表達、低表達。

1.3隨訪方法 通過門診復查、電話及信訪方式，隨訪患者有無腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移等，隨訪至患者死亡或截止2015年4月1日。

2結(jié)果

2.1癌組織及癌旁組織 miR-21、miR-375表達癌組織、癌旁組織中miR-21的表達分別為0.697±0.412、0.449±0.337，miR-375的表達分別為0.322 ±0.215、0.484±0.341，癌組織中miR-21的表達高于癌旁組織、miR-375的表達低于癌旁組織(P均<0.05)。

2.2miR-21、miR-375表達與ESCC患者臨床病理特征的關系發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期者miR-21表達較高(P均<0.05)。見表1。

表1　 癌組織miR-21、miR-375表達與ESCC患者

2.3miR-21、miR-375表達與ESCC患者預后的關系 Kaplan-Meier法分析顯示,miR-21高表達者3年生存率為42.1%，低表達者3年生存率為75.0%，miR-21高表達者的3年生存率低于低表達者(P<0.05)；miR-375高表達者3年生存率為68.4%，低表達者3年生存率為45.0%，miR-375高表達者3年生存高于低表達者(P<0.05)。miR-21高表達和miR-375低表達者生存預后較差(P<0.05)。 Cox比例風險回歸模型多因素分析示miR-21高表達、miR-375低表達(OR=6.43，95%CI為1.25～14.49，P<0.01)是影響ESCC患者預后的獨立因素。

3討論

miRNAs是長度為20～25 nt、具有調(diào)控功能的非編碼RNA，其主要功能是參與基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控。近年來，miRNAs在腫瘤發(fā)病中的作用受到廣泛關注。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs表達變化對于腫瘤診斷和預后判斷具有潛在價值[4～6]。人類許多miRNAs基因位于染色體上的腫瘤相關區(qū)域，如脆性區(qū)域、癌基因或抑癌基因斷裂區(qū)域等，在癌癥發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用[7,8]。miRNAs表達異常能影響腫瘤相關的重要生物學行為，如腫瘤細胞的分化、遷移、增殖等。因此，篩查腫瘤組織的miRNAs表達譜，對腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制研究具有重要意義[9]。

miR-21是較早發(fā)現(xiàn)的具有致癌基因作用的人類miRNAs之一，位于17q23.2染色體FRA17B脆性區(qū)域，且具有自主轉(zhuǎn)錄單位的miRNA，通過調(diào)節(jié)RAS/MEK/ERK通路從而抑制凋亡基因的表達[10]。Komastsu等[11]研究發(fā)現(xiàn)，ESCC患者血漿miR-21表達增高，并與腫瘤的侵襲和術后復發(fā)有關。研究發(fā)現(xiàn)，miR-21在多種腫瘤中表達增高，可調(diào)控p53、PTEN或PI3K/AKT/mTOR等基因或通路，發(fā)揮癌基因的作用[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，ESCC組織miR-21表達增高，且存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、較晚臨床分期的患者miR-21表達較高，miR-21高表達者的3年生存率低于低表達者，miR-21高表達是影響ESCC患者預后的獨立因素，提示miR-21高表達與ESCC的發(fā)生、發(fā)展密切相關。

miR-375位于2q2.3，擁有獨立的啟動子并受轉(zhuǎn)錄調(diào)控信號調(diào)節(jié)，可通過抑制Janus激酶2、胰島素樣生長因子1受體等重要癌基因發(fā)揮抑癌作用[13]。Mathe等[14]研究發(fā)現(xiàn)，ESCC組織中miR-375的表達顯著降低。Harris等[15]研究發(fā)現(xiàn)，頭頸部鱗狀細胞癌患者miR-375低表達者的預后較差，并與癌轉(zhuǎn)移密切相關。本研究發(fā)現(xiàn)，在ESCC癌組織中miR-375的表達降低，且miR-375低表達患者生存預后較差，是影響ESCC患者預后的獨立因素，提示miR-375下調(diào)可能參與了ESCC的發(fā)生發(fā)展，miR-375可能發(fā)揮了抑癌基因作用。

綜上所述，ESCC患者癌組織中miR-21表達增高，且發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期較高者miR-21表達較高，miR-21高表達、miR-375低表達的ESCC患者預后較差。

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