胃癌組織中p53與Ki-67蛋白的表達變化及意義

胃癌組織中p53與Ki-67蛋白的表達變化及意義

林丹丹，張一橋

(武漢大學人民醫院，武漢 430060)

摘要：目的觀察胃癌組織中p53與Ki-67的表達變化，并探討其意義。方法胃癌組織樣本取自159例胃腺癌患者，另取組織活檢為正常胃黏膜組織標本65例份，均經病理檢查證實診斷。采用免疫組化法檢測癌組織及正常胃黏膜組織中p53與Ki-67蛋白表達，采用Pearson法分析胃癌組織中p53與Ki-67蛋白表達的相關性。結果159例胃癌組織中p53蛋白表達陽性78例，陽性表達率為49.06%；Ki-67蛋白表達陽性110例，陽性表達率為69.18%。而在正常胃黏膜組織中未見p53、Ki-67蛋白表達。腫瘤直徑≥5 cm、高分化、有淋巴結轉移的胃癌組織中p53蛋白陽性表達率顯著高于腫瘤直徑<5 cm、低中分化、無淋巴結轉移的胃癌組織(P均<0.05)。高分化、有淋巴結轉移的胃癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率顯著高于低中分化、無淋巴結轉移的胃癌組織(P均<0.05)。癌組織中p53與Ki-67蛋白表達呈正相關(r=0.724，P<0.05)。結論 胃癌組織中p53蛋白與Ki-67蛋白表達均升高，二者可能協同參與了胃癌的發生、發展。

關鍵詞：胃癌；p53蛋白；Ki-67蛋白；抑癌基因

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.017

中圖分類號：R735.2 文獻標志碼：B

收稿日期：(2015-07-10)

胃癌的發生發展與細胞增殖、部分原癌基因激活、凋亡動力學改變、抑癌基因失活或突變等有關。抑癌基因亦稱為抗癌基因，正常時起抑制細胞增殖和腫瘤發生的作用[1]。p53是一種抑癌基因，在50%以上惡性腫瘤中會出現該基因突變[2]。Ki-67是一種核蛋白，與核糖體RNA轉錄有關。有研究結果證實Ki-67與許多腫瘤分化程度、浸潤、轉移及預后密切相關[3]。2012年7月～2015年2月，我們采用免疫組化法對胃癌組織中p53蛋白與Ki-67蛋白表達進行檢測，探討其與胃癌發生、發展的關系。

1資料與方法

1.1臨床資料胃癌組織樣本取自本院收治的159例胃腺癌患者，另取組織活檢為正常胃黏膜組織標本65例份，均經病理檢查證實診斷。159例胃癌患者中男86例、女73例，年齡<60歲29例，≥60歲95例。腫瘤直徑<5 cm 124例，≥5 cm 35例；病理學分級為低中分化107例，高分化52例；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期77例，Ⅲ、Ⅳ期82例；有淋巴結轉移102例，無淋巴結轉移57例。患者均未給予放化療治療。

1.2p53與Ki-67蛋白表達檢測均采用免疫組化法。標本用10%甲醛溶液固定、石蠟包埋，切片厚5 μm，二甲苯脫蠟、水化、PBS沖洗、修復、PBS沖洗、過氧化氫溫孵育10 min，PBS沖洗，滴加血清工作液，甩干，滴加鼠抗p53單克隆或Ki-67單克隆工作液，4 ℃過夜，PBS沖洗，滴加二抗，37 ℃、15 min，PBS沖洗，滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37 ℃、15 min，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復染，脫水、透明、封片。高倍鏡下觀察取5個視野，每個視野計數細胞100個。染色強度分為無染色計為0分，淡黃色計為1分，棕黃色計為2分，棕褐色計為3分。陽性細胞百分比≤10%計為0分，11%～25%計為1分，26%～50%計為2分，51%～75%計為3分，>75%計為4分。二者分數相加，0～1分為陰性，>1分為陽性。

1.3統計學方法采用SPSS18.0統計軟件。陽性率比較采用χ2檢驗，采用Pearson法分析胃癌組織中p53與Ki-67蛋白表達的相關性。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1胃癌組織與正常胃黏膜組織中p53、Ki-67蛋白表達比較胃癌組織中p53、Ki-67的陽性細胞均定位于細胞核內，呈棕黃色或棕褐色。159例胃腺癌患者癌組織中p53蛋白表達陽性78例，陽性表達率為49.06%；Ki-67蛋白表達陽性110例，陽性表達率為69.18%。而在正常胃黏膜組織中未見p53、Ki-67蛋白表達。胃癌組織中p53、Ki-67蛋白陽性表達率明顯高于正常胃黏膜組織(P均<0.05)。

2.2胃癌組織中p53、Ki-67蛋白陽性表達與臨床病理參數的關系腫瘤直徑≥5 cm、高分化、有淋巴結轉移的胃癌組織中p53蛋白陽性表達率顯著高于腫瘤直徑<5 cm、低中分化、無淋巴結轉移的胃癌組織(P均<0.05)。高分化、有淋巴結轉移的胃癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率顯著高于低中分化、無淋巴結轉移的胃癌組織(P均<0.05)。見表1。

表1　 胃腺癌組織中p53、Ki-67蛋白陽性表達

2.3胃腺癌組織中p53與Ki-67蛋白陽性表達的關系胃腺癌組織中p53與Ki-67蛋白表達呈正相關(r=0.724，P<0.05)。

3討論

胃癌的發病率一直居高不下，是臨床常見的惡性腫瘤，其發生發展是多基因、多階段的發展過程。癌基因和抑癌基因對細胞的生長發育和終末分化有正負調控作用。抑癌基因亦稱為抗癌基因，正常時起抑制細胞增殖和腫瘤發生的作用[4]。早在1969年，哈里斯將癌細胞與同種正常成纖維細胞融合，所獲雜種細胞的后代只要保留某些正常親本染色體時就可表現為正常表型，但隨著染色體的丟失又可重新出現惡變細胞。

p53是一種抑癌基因，該基因編碼一種相對分子質量為53 kD的蛋白質，命名為p53[5]。正常情況下對細胞分裂起減慢或監視的作用，50%以上惡性腫瘤中會出現該基因突變，因此檢測胃癌組織中p53的基因突變率對研究胃癌發生發展有重要意義。p53基因的失活對腫瘤形成起重要作用。p53基因突變后，由于其空間構象發生改變，失去了對細胞生長、凋亡和DNA 修復的調控作用，p53基因由抑癌基因轉變為癌基因[6～8]。本研究采用免疫組化法對胃癌組織中的p53蛋白進行檢測，結果顯示胃癌組織中p53蛋白陽性表達率為49.06%，而在正常胃黏膜組織中未見p53蛋白表達。此與楊玲娣等[9]結果一致。本研究中腫瘤直徑≥5 cm、高分化、有淋巴結轉移的胃癌組織中p53蛋白陽性表達率升高。而呂旭等[10]研究認為胃癌組織中p53、Ki-67表達與胃癌是否伴有淋巴結轉移無相關性，具體原因尚需進一步探討。但劉偉等[11]研究結果顯示，高中分化胃癌p53和Ki-67蛋白表達顯著高于低分化胃癌，p53蛋白在胃食管連接部和無遠處轉移的胃癌中表達顯著高于胃部和有遠處轉移的胃癌，Ki-67蛋白表達隨著浸潤深度的增加而增高,有淋巴結轉移者顯著高于無淋巴結轉移者，說明p53參與了胃癌侵襲及轉移過程。Ki-67是一種核蛋白，與核糖體RNA轉錄有關。胡海霞等[12]研究結果顯示,Ki-67參與胃癌的發生發展，并可作為判斷胃癌惡性程度及評估預后的指標。本研究中Ki-67蛋白陽性表達率為69.18%，在正常胃黏膜組織中未見Ki-67蛋白表達，且高分化、有淋巴結轉移的胃癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率顯著高于低中分化、無淋巴結轉移的胃癌組織。可見Ki-67蛋白參與了胃癌的侵襲及轉移過程。經Pearson相關系數分析發現，胃癌組織中p53與Ki-67蛋白表達呈正相關。可見，p53、Ki-67可能協同參與了胃癌的發生、發展。

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[10] 呂旭，姜葉娟，王香，等.p53與Ki-67在胃癌組織中表達與淋巴轉移的關系[J].中華疾病控制雜志，2015，19(4)：407-410.

[11] 劉偉,余英豪,歐陽學農,等.p53和Ki-67在胃癌中的表達及其臨床意義[J].世界華人消化雜志，2011，19(4):367-373.

[12] 胡海霞，黃勇.Ki-67、p53 蛋白在胃癌組織中的表達及臨床意義[J].解放軍醫藥雜志，2012，24(4)：9-11.