待孕婦女年齡和獲卵數對卵胞漿內單精子注射治療結局的影響

待孕婦女年齡和獲卵數對卵胞漿內單精子注射治療結局的影響*

**通信作者 E-mail:337191373@qq.com

網絡出版時間：2015-10-13網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20151013.1301.046.html

徐文杰， 黃官友， 周從容**

(貴州醫科大學附院 生殖中心， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 探討卵胞漿內單精子注射(ICSI)治療中待孕婦女年齡和獲卵數對胚胎質量及臨床結局的影響。方法: 接受ICSI助孕治療的520名待孕婦女，(1)根據年齡分為≤25歲組(A組)、26～30歲組(B組)、31～34歲組(C組)和≥35歲組(D組)，(2)根據獲卵數分為≤4枚組(Ⅰ組)、5～10枚組(Ⅱ組)、11～15枚組(Ⅲ組)、16～20枚組(Ⅳ組)和≥21枚組(Ⅴ組)；采用ICSI技術受精，比較ICSI治療周期后不同年齡組間異常受精率、胚胎停育率、優質胚胎率、胚胎冷凍率、種植率及臨床妊娠率的變化，比較不同獲卵數組間雌雄原核(2PN)卵裂率、優質胚胎率、胚胎種植率、胚胎冷凍率、胚胎停育率及臨床妊娠率的改變。結果： (1)A組和B組的異常受精率及胚胎停育率顯著低于C組和D組(P<0.05)，優質胚胎率和胚胎冷凍率按照A、B、C及D組依次降低(P<0.05)，A組和B組種植率和臨床妊娠率高于C組和D組(P<0.05)；(2)I組的2PN卵裂率、優質胚胎率和胚胎種植率明顯低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ組(P<0.05)；胚胎冷凍率按照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組及Ⅴ組依次降低(P<0.05)；I組的胚胎停育率顯著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ組(P<0.05)，而臨床妊娠率則明顯低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ組(P<0.05)。結論： 隨著待孕婦女年齡的增長，胚胎質量下降，臨床結局較差；獲卵數在11～15枚之間的胚胎質量較高、臨床結局較好。

[關鍵詞]卵胞漿內單精子注射； 卵子； 胚胎； 年齡； 臨床結局

[基金項目]*貴州省衛計委科學技術

[中圖分類號]R714.8[文獻標識碼] A

Effects of Women's Age and Oocyte Number on the Ttreatment

Outcome of Intracytoplasmic Sperm Injection

XU Wenjie，HUANG Guanyou，ZHOU Congrong

(ReproductiveCenter,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity，Guiyang550004,Guizhou,China)

Abstract[] Objective: To investigate the effect of women's age and the number of retrieved oocytes on embryo quality and clinical outcome after intracytoplasmic sperm injection(ICSI). Methods: A retrospective study was carried out to analyze the clinical data of 520 women receiving ICSI. (1) According to age，they were divided into less than or equal to 25 years old group(group A)，26 to 30 years old group (group B)，31 to 34 years old group (group C) and more than or equal to 35 years old group (group D).(2)According to the oocyte number，they were divided into less than or equal to 4 (group Ⅰ), 5 to 10 (group Ⅱ), 11 to 15 (group Ⅲ)，16 to 20 (group Ⅳ) and more than or equal to 21 (group V). After the period ICSI treatment, abnormal fertilization rate, embryo diapause rate, good quality embryo rate, embryo freezing rate, embryo implantation rate and clinical pregnancy rate between different age group were compared while 2PN cleavage rate, good quality embryo rate, embryo implantation rate, embryo freezing rate, embryo diapause rate and clinical pregnancy rate between different oocyte number group were compared. Results:(1)Abnormal fertilization rate and embryo diapause rate of group A and group B were lower than those of group C and group D (P<0.05). Among the four groups，good quality embryo rate and embryo freezing rate showed a decreasing trend from group A to group D (P<0.05). Embryo implantation rate and clinical pregnancy rate of group A and group B were higher than those of group C and group D (P<0.05). (2)2PN cleavage rate and good quality embryo rate and embryo implantation rate of group Ⅰ were lower than those of the other groups (P<0.05). Between the five groups，embryo freezing rate showed a decreasing trend from group Ⅰ to Ⅴ (P<0.05). Embryo diapause rate of group Ⅰ was higher than that of the other groups (P<0.05)，while clinical pregnancy rate of group Ⅰ was significantly lower than that of the other groups (P<0.05). Conclusion: With the increase of pregnant women's age, embryo quality is decreased and clinical outcome is poor. When the embryo number is between 11 and 15，embryo quality was high and clinical outcome is good.

[Key words] intracytoplasmic sperm injection; oocyte; embryo; age; clinical outcome

1992年Palermo等[1]首次采用卵胞漿內單精子注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI) 技術獲得妊娠成功，該項技術迅速在世界范圍內推廣，成為男性不育治療史上的一座里程碑。ICSI技術是將精子直接注入卵胞漿內完成受精，降低了對精子數量、活動率及受精能力的要求[2]。有研究證實，隨著待孕婦女年齡的增長，會出現卵巢儲備能力下降、激素水平紊亂、超排卵過程中卵泡發育不同步等狀況[3]。本文通過回顧性分析接受ICSI助孕治療的520例待孕婦女的臨床資料，探討待孕婦女的年齡和獲卵數對ICSI治療結局的影響。

1資料與方法

1.1　一般資料

將2013年1月~2014年6月接受ICSI助孕治療的520例待孕婦女進行分組：(1)根據年齡分為≤25歲組(A組)、26～30歲組(B組)、31～34歲組(C組)及≥35歲組(D組)，(2)根據獲卵數分為≤4枚組(I組)、5～10枚組(Ⅱ組)、11～15枚組(Ⅲ組)、16～20枚組(Ⅳ組)及≥21枚組(Ⅴ組)。ICSI治療周期納入標準：代孕婦女丈夫符合以下條件之一者：(1)需行睪丸或附睪穿刺術；(2)所獲精子、精子密度≤1×109/L，或前向運動精子百分比≤1%，或正常形態精子≤1%；(3)精子密度為(1～5)×109/L及前向運動精子百分比≤20%，或精子密度為(1～5)×109/L及正常形態精子≤3%；(4)精子密度為(6～15)×109/L及前向運動精子百分比≤10%，或精子密度為(6～15)×109/L及正常形態精子≤2%；(5)精子密度為≥16×109/L及前向運動精子百分比≤5%，或精子密度為≥16×109/L及正常形態精子≤1%。

1.2　方法

采用黃體期降調節長方案進行超排卵，B超下監測有2個主導卵泡直徑≥18 mm時停用促性腺激素(Gn)，注射6 000~10 000 IU人絨毛促性腺激素(HCG)，36 h后取卵；丈夫于取卵日同時手淫法取精或經睪丸/附睪(TASA/PESA)穿刺取精，通過密度梯度離心法處理精液，采用ICSI技術受精。

1.3　觀察指標

觀察ICSI治療周期后不同年齡組孕婦卵泡的異常受精率、胚胎停育率、優質胚胎率、胚胎冷凍率、種植率及臨床妊娠率的變化，比較不同獲卵數組間雌雄原核(2PN)卵裂率、優質胚胎率、胚胎種植率、胚胎冷凍率、胚胎停育率及臨床妊娠率的改變。優質胚胎評判標準：將第2天≥3細胞、評分評級[4]為Ⅰ~Ⅱ級或第3天≥6細胞評分評級為Ⅰ~Ⅱ級的胚胎定為優質胚胎。

1.4　統計學方法

所有數據均采用SPSS 16.0進行統計分析，計量資料以均數±標準差()表示，采用單因素方差分析，兩兩比較采用t檢驗，計數資料用率(%)表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1　待孕婦女年齡對胚胎質量和臨床結局的影響

A組的獲卵枚數明顯高于B組、C組和D組，B組和C組明顯高于D組，差異有統計學意義(P<0.05)；A組和B組的異常受精率及胚胎停育率顯著低于C組和D組，差異有統計學意義(P<0.05)，A組和B組、C組和D組比較，差異無統計學意義(P>0.05)；優質胚胎率和胚胎冷凍率按照A、B、C及D組依次降低，差異有統計學意義(P<0.05)；在種植率和臨床妊娠率方面，A組、B組種植率和臨床妊娠率高于C組和D組， C組高于D組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　孕婦年齡對胚胎質量和臨床結局的影響

2.2　獲卵數對胚胎質量和臨床結局的影響

Ⅰ組的年齡明顯大于Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組和Ⅴ組(P<0.05)，2PN卵裂率、優質胚胎率和胚胎種植率則明顯低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ組(P<0.05)；胚胎冷凍率按照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ組依次降低，差異有統計學意義(P<0.05)；Ⅰ組的胚胎停育率顯著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ組，而臨床妊娠率則明顯低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

(1)與Ⅰ組同指標比較，P<0.05；(2)與Ⅱ組同指標比較，P<0.05；(3)與Ⅲ組同指標比較，P<0.05；(4)與Ⅳ組同指標比較，P<0.05

3討論

雖然ICSI技術在治療男性不育方面獲得了良好的臨床結局，但其安全性仍存在爭議。本文從待孕婦女年齡和獲卵數兩個影響因素入手，通過對比分析相關臨床資料，探討它們對ICSI治療效果的影響。

盡管輔助生殖技術(ART)降低了年齡對妊娠的影響，但錯過最佳孕育年齡的高齡不孕婦女，由于多數存在卵巢功能異常、儲備能力下降、激素水平紊亂、超排卵過程中卵泡發育不同步等因素，可能直接導致獲卵數較低。本研究發現，年齡≤25歲的婦女獲卵數枚明顯高于其它年齡組(P<0.05)，當年齡≥35歲時獲卵數最低。Dain L等[5]認為，卵齡增加可能導致卵母細胞中的蛋白質和mRNA減少，從而增加異常受精率，同時還會影響優質胚胎的形成。本研究數據表明，30歲以下患者的異常受精率顯著低于31歲以上患者(P<0.05)，優質胚胎率和胚胎冷凍率A、B、C及D組依次降低(P<0.05)，提示隨著年齡的增加，可能因為卵母細胞的染色體異常率及非整倍體率升高，加大了異常受精的幾率，卵齡的增加也使卵母細胞質量下降，導致優質胚胎率及胚胎冷凍率減低?，F有研究證實，年齡可影響胚胎質量，而胚胎質量及種植潛能是影響妊娠成功的關鍵因素。Mateo S等[6]認為，妊娠率與胚胎質量和發育速度關系密切。Yan J等[7]研究發現，移植了8細胞且融合度好的優質胚胎，其臨床妊娠率最高。羅燕群等[8]則報道，當有優質胚胎可移植時，高齡患者中較年輕者(35 ~38 周歲)移植胚胎數由3枚降至2枚可能不會降低臨床妊娠率，但可以明顯降低多胎發生率。本文數據顯示，30歲以下患者的胚胎停育率顯著低于31歲以上患者(P<0.05)，而在胚胎種植率和臨床妊娠率方面，恰好與胚胎停育率結果相反(P<0.05)，與上述學者的研究觀點基本一致。

獲卵數過少是否同時伴有卵子質量下降問題目前仍存有爭議。本研究的520例ICSI治療周期中，獲卵數≤4枚組的年齡歲明顯大于其余4組(P<0.05)，而2PN卵裂率、優質胚胎率和胚胎種植率則顯著低于其余4組(P<0.05)，并且5組之間的胚胎冷凍率遞增(P<0.05)，同時，獲卵數≤4枚患者的胚胎停育率顯著高于獲卵數≥5枚的患者(P<0.05)，而臨床妊娠率則明顯低于獲卵數≥5枚的患者(P<0.05)， 提示隨著孕齡增加、卵巢儲備能力下降，獲卵數的降低和卵母細胞質量變差，影響了胚胎結局和臨床結局。

綜上所述，胚胎發育是一個多步驟和多因素影響的動態過程。胚胎質量的優劣關系著ICSI助孕治療的臨床結局。待孕婦女年齡和獲卵數則是影響ICSI治療效果的關鍵因素，與胚胎質量和臨床結局息息相關。

4參考文獻

[1] Palermo G，Joris H， Devroey P，et al． Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte[J]．Lancet， 1992 (8810)：17-18．

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[4] 黃國寧，孫海翔，何方方，等．體外受精-胚胎移植實驗室技術[M]．北京：人民衛生出版社， 2012：240-243.

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[6] Mateo S，Parriego M，Boada M，et al. In vitro development and chromosome constitution of embryos derived from monopronucleated zygotes after intracytoplasmic spem injection[J]. Fetil Steril， 2013(3)：897-902.

[7] Yan J，Li Y，Shi Y，et al. Assessment sex chromosome of human embryos arising from monopronucleated zygotes in In vitro fertilization and intracytoplasmic spem injection cycles of Chinese women[J]. Gynecol obstel， 2010(1)：20-23.

[8] 羅燕群，劉風華，易艷紅，等. 年齡、移植胚胎數量、質量與臨床妊娠率的關系[J]. 生殖醫學雜志， 2014(5)：361-366.

(2015-08-02收稿，2015-09-22修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 劉華