乙型肝炎表面抗原弱反應性標本檢測及解決方法

摘要：目的 探討乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱反應性標本的檢測及解決方法。方法 酶聯免疫吸附實驗（ELISA）法篩查出本院2011年～2012年間39例HBsAg弱反應性標本如下：①S/CO值0.6～1.3，11例；②S/CO值1.3～2.5，15例；③S/CO值2.5～5.0；13例，以上標本均做酶聯免疫吸附試驗（ELISA），美國雅培公司ARCHITECTi2000SR儀器定量及雅培確認實驗，并比較結果的差異。結果 本研究結果可見：①11例S/CO值在0.6～1.3區間，ELISA檢測陽性6例，陰性5例；雅培發光定量和確認實驗檢測陽性5例，陰性6例，差異有統計學意義（P<0.05）；②15例S/CO值在1.3～2.5區間，ELISA檢測陽性13例，雅培發光定量和確認實驗檢測陽性13例；③13例S/CO值在2.5～5.0區間，ELISA檢測陽性15例，雅培發光定量和確認實驗檢測陽性15例。結論 ELISA檢驗HBsAg容易出現假陽性，臨床對于ELISA結果有懷疑的應進行確認試驗驗證，以保證檢驗結果的可靠性。

關鍵詞：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）；弱反應性；酶聯免疫吸附實驗（ELISA）；確認試驗

Detection and Solution of Hepatitisb Surface Antigen Weak Reactive Specimens

SHEN Yun1，FANG Xiao-hui1，JIANG Li2，ZHANG Jin3，CHEN Xiao-bin4

（1.Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Suzhou 215006，Jiangsu，China；2.Gusu District Disease Prevention and Vontrol Venter，Suzhou 215000，Jiangsu，China；3.Suzhou Changqiao Hospital，Suzhou 215000，Jiangsu，China；4.Wuzhong District Health Supervision Institute，Suzhou 215000，Jiangsu，China）

Abstract：Objective To evaluate the detection and solution of hepatitis surface antigen weak reactive specimens.Methods We picked up 39 weak reactive samples of HBsAg From 2011 to 2012 by Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） as follown：①S/CO 0.6～1.3，11 cases；②S/CO 1.3～2.5，13 cases；③S/CO 2.5～5.0，15 cases，retested the above samples by ELISA and Abbott ARCHITECT i2000SR quantitative confirmation experiment ，then compare the difference between the results.Results From this study，we got following.Results ①11cases of S/CO values in the 0.6 to 1.3 range，ELISA tested positive in 6 cases，negative 5 cases；Abbott luminescence assay quantification and confirmation tested positive in 5 cases，negative 6 cases，between which the difference was statistically significant（P<0.05）.②15 cases of S/CO values ？？in the 1.3 to 2.5 range，ELISA tested positive in 13 cases，Abbott luminous quantitative and experimental tested positive in 13 cases.③13cases of S/CO values in the 2.5 to 5.0 range，ELISA tested positive in 15 cases，Abbott luminescence assay quantification and confirmation tested positive in 15 cases.Conclusion It is very common of 1 positive in HBsAg serum by using ELISA.Therefore，For the ELISA results of clinical suspicion should be confirmed by confirmatory test to ensure the reliability of test results.

Key words：HepatitisBsurfaceantigen（HBsAg）；Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）；HBsAg confirmatory test；Weak reactive

乙型肝炎是一種全球傳染性疾病，易于慢性化，重癥化。乙肝表面抗原（HBsAg）是目前判斷乙型肝炎病毒感染最直接的病原標志，其檢測的準確性和可靠性對于受檢者至關重要，也對乙肝的早期診斷及早期治療具有十分重要的意義，然而實際檢驗中因為實驗操作的問題，試劑污染或者實際敏感度等原因會造成一定程度的漏診和誤診，甚至引發醫療糾紛。因此，提高弱反應性樣本的正確檢出率具有非常重要的臨床意義。

目前臨床應用最多的是酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測乙肝表面抗原，它具有簡便、快速的特點，但其影響因素也較多，如試劑、實驗操作、標本因素等。對處于Cutoff值周圍的臨床意義可疑的“灰區”標本及弱反應性標本則不盡人意，尤其是S/CO值在0.6～1.3，1.3～2.5，2.5～5.0左右的樣本，經反復檢測，還無法進行定性，容易誤診，影響疾病的診斷、治療，甚至影響到醫患關系。而且國產試劑的靈敏度一般在0.5ng/ml，對HBsAg臨界樣本的檢測正確率并不理想[1]。因此必須找到一種更準確、快速的方法來檢測HBsAg。

本研究通過ELISA和雅培ARCHITECTi2000SRCMIA化學發儀確認試驗結果進行比較分析后，探討如何對乙肝表面抗原弱反應性性標本檢測結果判定，以便能減少漏診和誤診。

1資料與方法

1.1一般資料 2011年～2012年從蘇州市中醫醫院住院和門診患者及體檢人員檢測HBsAg定性結果中，篩選出S/CO值在0.6～5.0之間的標本血清39例，標本要求無溶血、黃疸、脂血，并放置-80℃冰箱保存：其中S/CO值在0.6～1.3的樣本11例，S/CO值在1.3～2.5的樣本13例，S/CO值在2.5～5.0的樣本15例。

1.2試劑和儀器 乙型肝炎病毒表面抗原ELISA診斷試劑盒（由上海科華生物技術有限公司生產，批號為20080917），所有試劑均在有效期內，儀器為美國雅培公司ARCHITECTi2000SR儀器。

1.3方法

1.3.1ELISA檢測 HBsAg采用單克隆抗-HBs包被反應板，加入待測標本，同時加入多克隆抗-HBs-HRP.當標本中存在HBsAg時，該HBsAg與包被抗-HBs結合并與抗-HBs-HRP結合形成抗-HBs-HRP-抗-HBs-HRP復合物，加入TMB底物產生顯示反應，反之則無顯色反應。檢測的同時設陰、陽性對照各2孔，弱陽性質控1孔（為HBsAg標準品），結果判斷：以S/CO≥1.0為陽性。

1.3.2雅培ARCHITECTi2000SRCMIA化學發儀，用順磁性微粒作為固相載體，通過兩步免疫測定法，定量檢測HBsAg，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）定量≥0.05IU/ml為陽性。

2結果

2.1ELISA檢測HBsAg弱反應性結果統計 ELISA測得結果（S/CO），各區間：0.6～1.3為（0.98±0.19）；（1.3～2.5）為（1.96±0.36）；（2.5～5.0）為（3.86±0.79），見表1。

2.2雅培ARCHITECTi2000SRCMIA化學發儀檢測HBsAg弱反應性結果統計 各區間：0.6～1.3為（0.08±0.07）；（1.3～2.5）為（0.65±0.81）；（2.5～5.0）為（2.87±2.76），見表2。

2.3兩種方法檢測HBsAg弱反應性結果比較 本次試驗比較兩種方法檢測結果陽性率是否有差別，采用χ2檢驗，由表3看出：①1例血清S/CO0.6-1.3，ELISA檢測為陽性，而雅培發光定量確認實驗則為陰性。這說明弱反應標本結果的不穩定性。ELISA法檢測存在一定的假陽性；②S/CO在1.3～2.5，2.5～5.0區間，ELISA法與雅培發光定量確認實驗兩者符合率高，則認為ELISA檢測的陽性結果可靠，見表3。

2.4ELISA與雅培發光定量確認實驗檢測HBsAg弱反應標本結果相關性比較，見表4。

3討論

乙型肝炎是一種全球傳染性疾病，易于慢性化，重癥化。據衛生部2010年發布的最新乙肝調查結果顯示，全國有HbsAg攜帶者9300萬人，其中1～59歲人群HbsAg攜帶者為7.18%，比1992年9.75%下降26.36%，且年齡越小，降幅越大。其中5～14歲人群為2.42%，15～59歲人群HBsAg攜帶率為最高，為8.57%。城市和農村人群乙型肝炎表面抗原（HBsAg）攜帶者差異不顯著，西部地區高于東部地區。

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的常規方法，大部分陽性標本均可檢出，但造成ELISA法出現假陽性的原因較多，如標本溶血，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）假陽性率達91.7%[1-2]；標本污染；標本放置過久；標本凝集不全；實驗因素；試劑質量及有效期（可通過選擇品牌試劑及減少采購量解決）；邊緣效應；血清標本中內源性物質的影響：大約有30%的人血清標本中含有類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體等非特異性物質，對ELISA測定有干擾作用，易造成假陽性結果[3]。由于鉤狀效應、HBsAg低水平表達、HBV的整合和含HBV的循環免疫復合物的形成，可以導致血清中HBsAg低濃度存在[4-6]。

由于ELISA檢測HBsAg的局限性，對于正確鑒別和診斷乙型肝炎存在一定限制，尤其是S/CO值在0.6～1.3，1.3～2.5，2.5～5.0左右的樣本，經反復檢測，還無法進行定性，容易誤診，影響疾病的診斷、治療，甚至影響到醫患關系。提高HBsAg實驗診斷的準確性，對于提高早期乙型肝炎感染、慢性持續性感染、經藥物治療后血清HBsAg檢出率有重要意義，同時也為流行病學調查、藥物治療評價提供可靠的依據。

本文收集乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱反應性標本39例，分別做定性，定量及確認實驗，比較實驗結果發現。①HBsAg檢測中，S/CO值在0.6～1.3的11例樣本中，ELISA檢測陽性6例，經雅培定量和確認實驗檢測，有5例被檢測為陽性。其中有兩例樣本ELISA檢測結果與雅培定量和確認實驗檢測結果不同，其余樣本均為陰性。從我們的實驗中發現，1例ELISA檢測陽性，雅培定量和確認實驗為陰性（假陽性）。1例ELISA檢測陰性，雅培定量和確認實驗為陽性（假陰性）。這說明ELISA檢測HBsAg的S/CO值在0.6～1.3之間的標本結果與雅培定量存在差異，ELISA檢測這類弱反應性標本有一定的假陽性率。②而S/CO值在1.3～2.5，2.5～5.0的28例樣本與雅培定量和確認實驗結果相同，均為陽性，兩者符合率高。ELISA與雅培定量和確認實驗兩者符合率高，雖標本量較少，但在實際應用中，如無特殊情況，則認為該ELISA檢測的陽性結果可靠。

上述這項結果說明弱反應標本結果的不穩定性。ELISA檢測乙型表面抗原有一定的假陽性率，輕易報告易導致誤診。近年來，臨床上呈弱反應性的標本日益增多，在目前對弱反應性沒有統一判斷標準的情況下。造成了臨床、檢驗工作的困擾，并可能對醫患關系產生一定的影響。對于HBsAg弱反應性結果，尤其是S/CO在0.6～1.3區間的，在實際工作中我們應ELISA復檢（或重新抽血復檢）進行雅培定量檢測，如果結果有差異，可進行確認實驗加以證實。如相應結果仍存在矛盾，無法確診時，可與臨床醫生溝通，患者是否接受過小鼠單抗治療或是否為接受高劑量生物素治療，并在短時間內采集了標本，可建議近期復查觀察變化。也可將標本送至上級醫院或通過其他途徑送至相應單位進行檢測。

對于臨床標本中EIISA檢驗結果為弱反應性的病例，應該引起重視，此類標本必須進一步采用中和確認試驗驗證，才能確保結果的可靠性和真實性，避免和減少檢驗結果的誤報、漏報，為臨床診斷提供更準確的結果。

參考文獻：

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編輯/馮焱