猴頭菌中甾醇物質的研究

摘要：猴頭菌被報道含有豐富的甾醇物質，具有良好的保健功能，和藥用價值。本文采用高效液相色譜、紫外掃描光譜、紅外光譜法和液質聯用等現代化分析手段，鑒定了猴頭菌中含有豐富的活性物質——麥角甾醇。

關鍵詞：猴頭菌；活性物質；甾醇

中圖分類號：R917 文獻標識碼：A

Abstract：Hericium erinaceus was reported to contain rich sterol， has good health care function， and medicinal value. In this paper， by using high performance liquid chromatography， UV scanning spectrum， infrared spectrum and LC-MS modern analytical means， Hericium erinaceus was shown to contain rich activated material -- ergosterol

Key words：Hericium erinaceus；Active substances；Sterol

猴頭菌肉嫩味美，營養豐富。猴頭菌包括豐富的蛋白質、脂肪、纖維素、多糖，還含有16種氨基酸，其中有8種人體必需氨基酸，而且各種氨基酸的比例與人體需要接近[1]。猴頭菌不僅食用價值高，而且在醫學上具有極高的藥用價值。猴頭菇中含有豐富的甾醇物質，近年來國外有研究表明，甾醇類物質對胃粘膜有很好的保護作用[2]，此外由于麥角甾醇在人體內可轉化為維生素D2，維生素D2在調節生命代謝功能上有重要作用[3]，所以猴頭菌中的甾醇類活性物質具有很好的生理保健功能。

本研究的目的是采用現代的分析檢測方法證實猴頭菇中的甾醇物質的存在。

1 資料與方法

1.1資料、試劑與儀器 無水乙醇、鹽酸、甲醇、石油醚（30～60℃）、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氫氧化鉀（以上均為國產分析純）；甲醇（色譜純）。

HPLC色譜儀，美國waters公司；UV-1700，紫外掃描儀，日本島津公司；WD-9403，紫外分析儀，北京市六一儀器廠；Agilent，1100 LC/MSD Trap液質聯用儀，美國安捷倫公司；多功能粉碎機，永康市帥通工具有限公司； GZX-9240 MBE數顯鼓風干燥箱，上海博訊有限公司醫療設備廠；HH-2恒溫水浴鍋，金壇市瑞杰爾電器有限公司。

1.2測定方法[4] 甾醇類物質的提取工藝：準確稱取猴頭菌粉末0.5g，加入pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液2.5ml和15%的KOH-乙醇溶液6ml，混勻，80℃水浴加熱皂化60min，離心，向上清液中加入6mL的石油醚（30～60℃）提取3次，合并提取液，加水6mL洗滌2次，石油醚層于60℃水浴蒸干，溶于1ml甲醇中待測。

1.2.1甾醇提取物的紫外吸收光譜測定 甾醇提取液用甲醇稀釋到10ml，在250～350nm進行紫外掃描，觀察在270～300nm之間的紫外吸收。

1.2.2甾醇提取物的紅外光譜測定 甾醇提取液用甲醇稀釋到10ml，吸取100μL均勻涂在紅外液體模具窗片上，晾干后采用紅外光譜儀掃描分析，波長范圍為4000cm-1～400cm-1，觀察吸收峰，確定其基團類型。

1.2.3猴頭菌甾醇提取物的HPLC測定

1.2.3.1HPLC色譜儀 美國Waters公司；色譜柱：Hypersil BDS C18色譜柱（4.6mm×200mm，5μm）；流動相：甲醇；檢測波長：282nm；流速：0.8mL/min；柱溫：30℃。

1.2.4主要色譜峰的HPLC-MS測定

1.2.4.1HPLC儀器型號 Agilent 1100 series LC；流動相：甲醇-水（95-5）；流速：0.4ml/min；檢測波長：282nm；進樣量：5μL。

1.2.4.2MSD儀器型號 Agilent 1100 series LC/MSD Trap；離子源：電噴霧電離（ESI）；正離子檢出模式；干燥器流速：8L/min；干燥器溫度：300℃；噴霧壓力：30.0psi；毛細管電壓：4000V；分子量掃描范圍：300amu～700amu。

2 結果與分析

麥角甾醇作為猴頭菌中一種重要的活性物質，本實驗對猴頭菌甲醇提取物進行了液相色譜、紫外吸收光譜、紅外光譜檢測以及液質聯用分析。

2.1猴頭菌甾醇化合物HPLC的鑒定 以甲醇為溶劑，制備猴頭菇甾醇提取液，采用HPLC法進行檢測，結果見圖1所示。

由圖1可知，甲醇提取液在16min的時候出峰，且整個運行過程中沒有雜峰出現。經與其他文獻對比，基本上可以確認16min的這個峰應該是甾醇。

2.2猴頭菌甾醇化合物紫外圖譜的鑒定 猴頭菌甲醇提取液，采用紫外光譜的方法進行鑒定，甾醇提取物的紫外吸收光譜結果如圖2所示：

由圖2中可以看出，在271、282和293nm處有典型吸收峰，其中最強特征吸收峰在282nm處，與麥角甾醇的文獻報道一致[5]，符合麥角甾醇的紫外吸收光譜特征。

2.3猴頭菌甾醇化合物紅外圖譜的鑒定 猴頭菌甲醇提取液，采用紅外光譜的方法進行鑒定，甾醇提取物的紅外吸收光譜結果如圖3所示：

由圖3看出，3301cm-1為活潑質子羥基（O-H）伸縮振動的特征吸收，2941、1448cm-1為-CH3的吸收，符合甾醇吸收峰的特征。

2.4猴頭菌甾醇化合物液質聯用圖譜的鑒定 猴頭菌甲醇提取液，采用液質聯用的方法進行鑒定，猴頭菇提取物主要色譜峰的HPLC-MS測定結果見圖4、圖5所示。

由圖4、5可以知道，甲醇提取物有幾種化合物組成，其中保留時間為2.195～2.726min的峰值最高。質譜數據分析其分子量為579，可以認為是由麥角甾醇酯化一個葡萄糖分子，并且帶一個鈉離子組成（395+162+22）。由此可以認為保留時間為2.195～2.726min的峰是麥角甾醇酯化合物。

3 結論

近年來國外有研究表明，甾醇類物質對胃粘膜有很好的保護作用，本文通過HPLC、紫外掃描、紅外、液質聯用等現代的分析方法，共同證明了猴頭菌中含有豐富保健的活性物質～麥角甾醇。

參考文獻：

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[2]Prats N， Lopez S， Domingo M，et al. Prolonged Persistence of Listeria Monocytogengs After Intragastric Infection In Corticosteroid-Treated Mice[J].Vet Microbiol，1997，58（l）：79.

[3]何秀萍，張博潤.微生物麥角甾醇研究進展[J].微生物學通報，1998，25（3）：166.

[4]李潔莉.猴頭菌藥效成分研究和猴頭菌屬的分子生物學鑒定[D].南京師范大學學位論文，2002：04.

[5]高虹，谷文英.三波長光度法測定姬松茸中麥角甾醇含量[J].分析化學研究簡報，2007，（4）：586-588.

編輯/馮焱