奧美拉唑對大鼠反流性食管黏膜損傷后IL－6及TNF－α的影響

奧美拉唑對大鼠反流性食管黏膜損傷后IL-6及TNF-α的影響

張萌,黃剛,周志剛,楊金良

(河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院胸外科,河北石家莊050051)

摘要：目的：觀察奧美拉唑對反流性食管黏膜損傷后大鼠血漿和食管組織中細胞因子IL-6及TNF-α的影響，探討奧美拉唑治療反流性食管炎的作用機制。方法:選用健康雄性SD大鼠，體重220～250g，隨機將動物分為5組，假手術組、單純胃食管反流動物模型組(模型組)、模型組+奧美拉唑低劑量組、中劑量組、高劑量組。分別取食管標本肉眼觀察黏膜狀況。應用ELISA方法檢測大鼠血漿和食管組織中細胞因子IL-6及TNF-α的變化。結果:假手術組大鼠食管顏色淡紅，有光澤，黏膜光滑。模型組大鼠食管顏色變淡白，黏膜粗糙、增厚、皺襞灰白色斑塊狀增生。與模型組比較，奧美拉唑低、中、高劑量治療組大鼠食管病變明顯減輕。ELISA檢測結果顯示，假手術組大鼠血漿和食管組織有一定IL-6及TNF-α的基礎含量。模型組大鼠血漿和食管組織IL-6及TNF-α含量明顯升高，奧美拉唑治療組大鼠血漿和食管組織IL-6及TNF-α含量明顯降低。結論:奧美拉唑明顯降低反流性食管黏膜損傷后大鼠血漿和食管組織炎癥因子IL-6及TNF-α的含量，可能是其改善食管局部及外周炎癥反應、治療反流性食管炎的重要作用機制。

關鍵詞：胃酸反流;反流性食管損傷;奧美拉唑;IL-6;TNF-α

文章編號：1006-6233(2015)11-1768-03

基金項目：*河北省醫(yī)學科學研究重點課題，(編號：ZD20140515)

通訊作者：*E-mail:jinliangyang1963@sina.com

文獻標識碼：A

Effects of Omeprazole on the Level of IL-6 and TNF-α in the Rats Model

of Esophageal Mucosal Injury Induced by Reflux of Acid

ZHANGMeng,HUANGGang,ZHOUZhigang,etal

(The Third Hospital of Hebei Medical University,

Hebei Shijiazhuang 050051, China)

Abstract：Objective: To observe the effect of omeprazole on the level of IL-6 and TNF-α in the rats model of esophageal mucosal injury induced by reflux of acid. Method: Healthy male SD rats weighing 220 to 250g were randomly divided into 5 groups: sham-operated group(sham), gastroesophageal reflux group (model), omeprazole low dose, middle dose and high dose groups. Rat models of reflux esophagitis were induced by single acid reflux. The contents of IL-6 and TNF-α were detected by ELISA staining. Result: The esophagus of rat was erythroid and lustrous, with glossy mucosal membranes in sham group. Compared with that of the sham group, the esophagus presented light white and the esophageal mucosal membrane became rough, thicken, grey plaque-like proliferation in rats of model group. Compared with that of model group, above the changes were significantly decreased in omeprazole treatment groups. Compared with that of the sham group, the contents of IL-6 and TNF-α were significantly increased in model group. Compared with thats of the model group, the contents of IL-6 and TNF-α were significantly decreased in treatment of omeprazole group. Conclusion: It could be concluded that omeprazole could decrease the esophgeal mucosal injury induced by reflux of acid by decrease the contents of IL-6 and TNF-α.

Key words: Gastric acid reflux;Reflux esophagitis;Omeprazole;IL-6;TNF-α

反流性食管炎(reflux esophagitis, RE)是由于食管廓清能力下降、食管下括約肌功能異常、胃酸以及膽汁等多因素引發(fā)的一種疾病。其中胃酸對食管黏膜的直接或/和間接損害是導致RE的病理基礎[1～3]。我們前期研究表明，奧美拉唑可通過下調細胞增殖相關基因PCNA、CyclinD1和CDK4蛋白表達，上調p21蛋白表達，發(fā)揮治療反流性食管損傷的作用[4]。本研究應用反流性食管黏膜損傷大鼠模型，觀察奧美拉唑對反流食管黏膜損傷的作用，同時觀察其對反流性管黏膜損傷后大鼠血漿和食管組織中細胞因子IL-6及TNF-α的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物及分組:健康雄性SD大鼠75只，體重220～250g，由河北省實驗動物中心提供，動物合格證號：1306088。大鼠購入后適應環(huán)境1周，分籠飼養(yǎng)，自由進食標準飼料及飲水。隨機將大鼠分為5組：假手術組、胃食管反流動物模型組(模型組)、奧美拉唑低、中、高劑量組，每組15只。飼養(yǎng)前將飼養(yǎng)室用紫外線照射消毒，飼養(yǎng)籠用過氧乙酸消毒，室溫保持恒溫(23±2)℃。

1．2藥品與試劑:奧美拉唑膠囊(浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠)。IL-6 ELISA試劑盒(北京義翹神州生物技術有限公司)，TNF-α ELISA試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)。

1．3模型制備及給藥:術前大鼠禁食24h，禁水2h。大鼠腹腔注射10%水合氯醛(30mL/kg)麻醉，固定于手術臺上，備皮消毒后取上腹部正中切口進腹，分離食管下段神經和血管，采用食管下段與胃底吻合術，于胃大彎側食管下段(距胃食管交接部0.5～1.5cm處)和胃底近食管下段處分別做1.0cm切口行側側吻合。注意觀察吻合口是否暢通或有無滲液。假手術組大鼠上腹部正中切口，暴露胃食管于腹腔外約10min后關閉腹腔。術后禁食48h，飲水，48h后常規(guī)喂養(yǎng)。于術后第6天分別將奧美拉唑低劑量(10mg)、中劑量(20mg)、高劑量(40mg)給大鼠灌胃，假手術組和模型組大鼠給予等容量的生理鹽水，連續(xù)給藥8周。水合氯醛麻醉下，抽取大鼠腹主動脈血，立即灌入EDTA-2鈉抗凝耦合劑中，靜置30min后，放入2℃離心機中，以1000r/min離心15min，取上層血漿，放入-20℃冰箱中備用。取食管下段(包括吻合口)進行縱行剖開，用冰生理鹽水清洗食管，肉眼觀察黏膜狀況，然后迅速放入液氮罐內冰凍保存?zhèn)溆谩L-6和TNF-α的測定按照試劑盒說明書進行。

2結果

2．1食管大體形態(tài)變化:假手術組大鼠食管顏色淡紅，有光澤，黏膜光滑。模型組大鼠食管顏色變淡白，黏膜粗糙、增厚、皺襞灰白色斑塊狀增生。與模型組比較，奧美拉唑低、中、高劑量治療組大鼠食管病變明顯減輕。

2．2食管組織及血漿IL-6的變化:與假手術組比較，模型組大鼠食管組織及血漿IL-6的含量明顯升高，與模型組比較，奧美拉唑治療組大鼠食管組織及血漿IL-6的含量明顯降低，見表1。

2．3食管組織及血漿TNF-α的變化:與假手術組比較，模型組大鼠食管組織及血漿TNF-α的含量明顯升高，與模型組比較，奧美拉唑治療組大鼠食管組織及血漿的含量TNF-α明顯降低，見表2。

表1　奧美拉唑對反流性食管損傷后食管及

與模型：*P<0.05，**P<0.01

表2　奧美拉唑對反流性食管損傷后食管及

與模型：*P<0.05，**P<0.01

3討論

反流性食管炎(RE)是由于食管胃連接部預防反流機制障礙導致胃內容物反流入食管引起的食管黏膜損傷，該病屬于胃食管反流病(GERD),以食管下段出現(xiàn)黏膜糜爛、潰瘍?yōu)樘卣鱗5]。本實驗采用胃食管反流手術方式復制反流性食管黏膜損傷的大鼠模型，結果顯示，模型動物均出現(xiàn)食管黏膜損傷，黏膜粗糙、增厚、皺襞灰白色斑塊狀增生，表明模型復制成功。

在胃食管反流病發(fā)生發(fā)展過程中，炎癥因子的影響起重要的作用，同時也存在著免疫系統(tǒng)促進炎癥和抑制炎癥機制的調控失衡[6]，因此，胃食管反流病發(fā)生發(fā)展過程中的免疫調控機制，逐漸受到關注和重視，如其中的白細胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。IL-6主要由單核-吞噬細胞、血管內皮細胞、纖維母細胞等多種細胞受白細胞介素-1(IL-1)和少量TNF刺激時合成的細胞因子，基礎和臨床研究均表明，機體許多炎癥反應均與IL-6的參與有關，但是關于IL-6在反流性食管損傷過程中變化情況的研究還比較少。本實驗應用反流性食管黏膜損傷大鼠模型研究結果表明，模型組大鼠食管組織及血漿IL-6的含量明顯升高，提示IL-6可能是通過誘導中性粒細胞活化、產生活性氧等作用，進一步影響食管平滑肌的張力，促使反流性食管炎的發(fā)生及惡化。同時表明奧美拉唑通過降低大鼠食管組織及血漿中IL-6的含量，而發(fā)揮其治療反流性食管損傷的作用。

TNF-α主要由活化的單核/巨噬細胞產生，能抑制和殺傷腫瘤細胞，促進中性粒細胞吞噬，抗感染，引起發(fā)熱，誘導肝細胞急性期蛋白合成，在炎癥反應、細胞免疫、腫瘤免疫等多種生理、病理過程中發(fā)揮著關鍵作用，同時還參與某些自身免疫性疾病的病生理損傷。Yamaguchi等[7]應用大鼠急性反流性食管炎模型實驗研究也證明，由于胃反流物的刺激，食管黏膜中TNF-α的含量升高，并誘導中性粒細胞活化，進而產生活性氧及脂質過氧化作用，導致食管炎癥反應的發(fā)生。本實驗結果顯示，模型組大鼠食管組織及血漿TNF-α的含量明顯升高，經奧美拉唑治療后，大鼠食管組織及血漿TNF-α的含量明顯降低，食管黏膜組織損傷程度明顯減輕。

總之，通過上述實驗研究表明，奧美拉唑可明顯降低反流性食管黏膜損傷后大鼠血漿和食管組織炎癥因子IL-6及TNF-α的含量，這可能是其改善食管局部及外周炎癥反應、治療反流性食管炎的重要作用機制。其詳細的作用機制有待于進一步深入研究。

參考文獻:

[1]Galmiche J P, Janssens J. The pathophysiology of gastroesophageal reflux disease: an overview[J].Scand Gastroenterol, 1995, 2(1): 71～77.

[2]Pettit M. Treatment of gastroesophaheal reflux disease[J].Pharm World Sci, 2005, 27(6):432～437.

[3]Pursnani K G, Mohiuddin M A, Geisinger K R, et al. Experimental study of acid burned and acute oesophagitis[J].Br Surg, 1998, 85(5)：677～682.

[4]張萌, 黃剛,周志剛,等.奧美拉唑對大鼠反流性食管黏膜損傷后細胞增殖相關基因表達的影響[J].河北醫(yī)藥,2014.

[5]中華醫(yī)學會消化內鏡學分會.反流性食管炎診斷及治療指南(2003)[J].中華消化內鏡雜志，2004.21(4)：221～222.

[6]Vieth M, Kulig M, Leodolter A, et al. Histological effects of esomeprazole therapy on the squamous epithelium of the distal oesophagus[J].Aliment Pharmacol Ther, 2006,23(2):313～319.

[7]Yamaguchi T, Yoshida N, Tomatsuri N, et al. Cytokine-induced neutrophil accumulation in the pathogenesis of acute reflux esophagitis in rats[J].Int Mol Med, 2005,16(1):71～77.

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