細菌感染兔發熱時相白細胞計數、中性粒細胞及其直徑的變化

細菌感染兔發熱時相白細胞計數、中性粒細胞及其直徑的變化

李妤蓉張文菊程瑞彩張潔莉劉明

(邢臺醫學高等專科學校第二附屬醫院，河北邢臺054000)

摘要〔〕目的探討白細胞(WBC)計數、中性粒細胞(NE)體積(V)、C反應蛋白(CRP)、白細胞介素(IL)-8等參數在急性細菌感染兔發熱時相中的變化。方法建立金黃色葡萄球菌感染兔模型，利用Beckman CouIter LH750全自動血液分析儀VCS技術和顯微鏡計數WBC檢測急性細菌感染兔(n=5)及對照組(n=5)的耳緣靜脈EDTA-K2全血，統計分析WBC總數、NEV及NE的直徑。結果與對照組比較，感染組在發熱寒戰期、高峰期WBC、NE直徑、CRP、IL-8差異有統計學意義(分別是P<0.01，P<0.05，P<0.01，P<0.01)。結論細菌感染早期(發熱寒戰期)兔耳緣靜脈血WBC低、NE直徑減小，因此WBC、NE大小、CRP三者綜合分析對急性細菌感染性疾病早期診斷及療效觀察有重要臨床價值。

關鍵詞〔〕細菌感染模型；中性粒細胞；VCS技術

中圖分類號〔〕R34〔文獻標識碼〕A〔

第一作者：李妤蓉(1964-)，女，教授，主任檢驗師，主要從事臨床檢驗研究。

參與機體炎癥反應的眾多炎癥細胞中，中性粒細胞(NE)是數量最大、功能最強的免疫細胞，具有很強的趨化、變形、黏附、吞噬和殺菌作用〔1，2〕。在炎癥介質誘導下，骨髓釋放白細胞(WBC)增加，NE由儲存池向循環池游走增多，有些不成熟WBC也被釋放，出現外周血WBC總數和NE比率增高〔3〕。但是在部分病例中，WBC總數反而降低，甚至出現危急值，此時僅用WBC總數與NE比率來診斷急性細菌感染較困難〔4〕。本文通過細菌感染動物模型研究發熱時相WBC、NE體積(NEV)、NE直徑的變化，尋找一種快速、準確、客觀的診斷指標。

1材料與方法

1.1實驗分組10只幼齡新西蘭兔購于河北醫科大動物實驗中心，分為感染組和對照組2組，每組5只。

1.2兔感染發熱模型制作依據家兔肺炎雙球菌感染發熱模型〔5〕方法。用凝固酶陽性金黃色葡萄球菌菌量6×107個皮內注射免疫幼齡新西蘭兔造模。

1.3體溫測量每間隔2 h測一次體溫。所用測溫計為人用肛表，插入直腸7.0 cm以上，持續時間為表上讀數穩定1 min。測量前常溫飼養在籠內，隨意攝食、飲水和活動。測量時固定于暴露頭尾盒內，盡量避免動物掙扎、躁動，以免體溫變化。所用細菌為本院微生物實驗室提供的凝固酶陽性葡萄球菌。感染前、經增菌、鑒定、再增菌等程序，最后獲得血清肉湯菌液，經硫酸鋇比濁法定量。對照組注射液除葡萄球菌外一切與感染組條件一致。

1.4標本采集14：00注射，兩組注射前、注射后檢測體溫后采集耳緣靜脈血1.5 ml于EDTA抗凝管中，做血細胞分析、C反應蛋白(CRP)、白細胞介素(IL)-8測定，同時制血涂片、瑞氏染色、油鏡下血細胞形態分析，重點檢查NE形態結構特點。

1.5儀器及試劑Beckman-Coulter LH750全自動血細胞分析儀，Omlipo全自動特定蛋白分析儀及配套試劑和質控品，奧林巴斯顯微鏡。

2結果

和對照組比較，感染組在寒戰期、高峰期WBC總數及NE百分率差別非常顯著(P<0.01)；高熱期CRP、IL-8差別非常顯著(P<0.01)；退熱期WBC總數、NE百分率、CRP、IL-8差別不明顯(P>0.05)。見表1。

表1　兩組24 h體溫、WBC總數、NE直徑、CRP、IL-8對比 ( n=5)

3討論

機體在細菌感染后，常引起反應性的WBC總數和NE增多，同時伴隨的NE核左移和中毒性改變也與疾病的療效和預后有關〔6〕。長期以來，血常規中的WBC和NE作為臨床判斷血液細菌感染的主要指標，但有些細菌感染患者WBC和NE并不高，以此為依據診斷可能會貽誤治療時機〔7，8〕。

感染發熱4 h(寒戰期)，感染組精神怠倦、顫抖，身體蜷縮，有的兔子出現腹瀉；WBC總數降低；NE率在23%～51%，可見小NE，直徑在9～11 μm，核左移，嗜中性顆粒粗大，CRP達10 mg/L；之后，隨著體溫的升高進入高峰期，WBC總數漸漸上升，NE數增多可達90%以上，核左移明顯，嗜中性顆粒粗大，體積增大，形態呈多形性，直徑在10～17 μm，可見晚幼粒和晚幼紅細胞；CRP、IL-8明顯升分別可高達30 mg/L、0.9 mmol/L以上。寒戰期WBC總數減低，原因可能是由于細胞因子和交感神經的作用，引起血管收縮和血流減少，粒細胞由軸流移到邊集，邊緣池粒細胞增多，循環池粒細胞數減低〔9〕；細菌內毒素、病毒可一過性抑制骨髓釋放粒細胞等，致循環池粒細胞減少；某些重度細菌感染時外周性粒細胞活性增強且趨化黏附于組織血管壁〔10〕；活化粒細胞膜變形能力減低，大多被滯留在肺毛細血管；外周血WBC聚集等，均可導致外周血WBC電子細胞計數時假性減少，也就是外周血中WBC總數和NE比率不升高反而降低〔11〕。寒戰期血容量不足可能是致NEV縮小的主要原因〔12〕。

高峰期由于動脈、毛細血管擴張，血管通透性倍增，繼之血流減慢，嚴重者發性血流停滯，有利于WBC黏附于血管內皮并滲出到炎癥部位〔13〕。同時，細菌感染時骨髓在炎癥因子刺激下不成熟粒細胞釋放增加，如中性桿狀核粒細胞和晚幼粒細胞〔14〕。同時外周邊緣池中NE在炎癥介質作用下活化，活化的NE主要表現在偽足形成，更好發揮黏附、吞噬功能。外周血中出現體積、形態不同的不成熟粒細胞、活化粒細胞以及成熟粒細胞，導致平均NEV增大、體積大小不一、細胞異質性增大〔15〕。

綜上，在急性發熱時WBC、NE大小、CRP三者綜合分析對急性細菌感染的早期診斷有非常大的價值。細胞因子在細菌感染中對NE遷移、形態變化的影響還需進一步試驗證明。

4參考文獻

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〔2014-03-11修回〕

(編輯苑云杰)