多西他賽注射液制備工藝研究

陳 蘭 王雪蓮

（西南藥業股份有限公司，中國 重慶400038）

多西他賽為紫杉醇類抗腫瘤藥，通過干擾細胞有絲分裂和分裂間期細胞功能所必須的微管網絡而起抗腫瘤作用。多西他賽可與游離的微管蛋白結合，促進微管蛋白裝配成穩定的微管，同時抑制其解聚，導致喪失了正常功能的微管束的產生和微管的固定，從而抑制細胞的有絲分裂。多西他賽自1995年在墨西哥、南非被批準用于治療乳腺癌及非小細胞肺癌(NSCLC)以來,已在世界范圍內51個國家獲準使用,且在其中24個國家中,它是唯一被批準用于治療晚期NSCLC的藥物[1]。

1 試驗材料

1.1 儀器

Agilet 1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），pHS-3C型pH計（上海雷磁儀器廠），YB-2型澄明度檢測儀（天津大學精密儀器廠），AB204-E電子天平（梅特勒-托利多）。

1.2 藥品與試劑

多西他賽（重慶泰濠制藥有限公司，批號：DO-0811001）；吐溫-80（日本三洋有限公司；無水乙醇（成都科龍有限公司）；活性炭（上海針用活性炭廠）。

2 方法與結果

2.1 多西他賽注射液的制備

準確稱取多西他賽原料，放入配料罐中，并加入配置總量80%的無水乙醇，攪拌使原料完全溶解。在藥液中加入吐溫-80，攪拌均勻。將溶液稀釋至總重量。調節產品pH值。最后加入活性炭，攪拌靜止15分鐘，灌裝，冷凍干燥抽取乙醇，軋蓋。

2.2 多西他賽含量測定試驗

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

儀器：高效液相色譜儀 色 譜 柱：C18（4.6×250mm，5μm，安捷倫）。流動相：以水為流動相A，乙腈為流動相B，按下表進行線性梯度洗脫。檢測波長：232nm。柱溫為45℃；流速為1.2ml/min；進樣體積：20μl。稱取多西他賽定性對照品（包括多西他賽，雜質b，雜質d，雜質e和雜質f）適量，用溶劑[乙腈-水-乙酸（100：100：0.1）]溶解并稀釋至1mg/ml的溶液，作為系統適用性溶液。取對照品溶液用溶劑配制成0.2μg/ml的溶液，作為靈敏度溶液。分別精密量取系統適用性試驗溶液各20μl進樣，系統性試驗溶液色譜圖中多西他賽和雜質b的分離度應大于3.5，對照品溶液主峰面積的相對標準偏差應不大于1.0%[2]。

表1

2.2.2 測定法

取本品的內容物適量，精密稱定，用溶劑溶解并稀釋制成0.2mg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取多西他賽對照品約10mg，置50ml量瓶中，加2ml乙醇使溶解，加溶劑稀釋制成約含多西他賽0.2mg/ml的溶液，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液和對照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算，即得。

2.2.3 系統適用性試驗

精密稱取內容物適量，用溶劑溶解并稀釋制成含多西他賽約0.2mg/ml的溶液，共6份，分別進樣。

表2 含量系統適用性試驗結果

6份樣品的主峰面積的相對標準偏差為0.23%，主峰保留時間得相對標準偏差為0.16%，均小于1%，表明該方法系統適用性不錯。

2.2.4 空白試驗

按處方比例稱取輔料約10mg和制劑12mg各一份，分別置于10ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別進樣，同時進一份溶劑。結果：溶劑和輔料的吸收峰在主峰保留時間處均未有吸收峰出現，不干擾含量測定。

2.2.5 精密度試驗

①重復性試驗

精密稱取內容物適量，并稀釋制成含多西他賽約0.2mg/ml的溶液，共6份，分別取20μl進樣。結果見表3。

表3 含量重復性試驗結果

結果：6次進樣的平均峰面積為98.7%，RSD=0.46%，表明含量的重復性較好。

②中間精密度試驗

由另外一人，另一天，用另外一臺液相檢測，結果見表4。

表4 含量中間精密度試驗結果

重復性和中間精密度試驗12份溶液含量的相對標準偏差為0.41%，可見此方法測定含量精密度較好。

2.2.6 溶液的穩定性

取重復性試驗的樣品溶液1份，在室溫下放置不同的時間，計算含量。結果見表5。

表5 含量溶液穩定性試驗結果

供試品溶液在放置8小時后，含量基本無變化，可見溶液穩定性很好。

2.2.7 回收率試驗

精密稱取多西他賽原料各三份，分別置于量瓶中，用溶劑溶解并稀釋至100ml，搖勻，分別進樣，計算回收率。結果見表6。

表6 含量回收率試驗結果

三個濃度下的平均回收率為99.0%，相對標準偏差為1.34%，表明此方法測定含量的準確度很好，可以對多西他賽進行準確定量。

2.3 注射用多西他賽制備工藝的考察

2.3.1 質量指標

①性狀：白色凍干塊狀物。②pH測定：pH值應為3.0~4.5。③水分：取本品，照水分測定法（中國藥典2010年版二部附錄ⅧM第一法A）測定，含水分不得過3.0%。④有關物質測定：單個雜質峰面積不的過2.0%，總雜質峰面積不得過5.0%。⑤含量測定：多西他賽含量用高效液相法測定，多西他賽含量應在90%~105%范圍內。

2.3.2 藥用炭的篩選

將多西他賽用無水乙醇溶解后，加入吐溫-80攪拌均勻后，分別加入0.01%、0.05%、0.1%的活性炭，攪拌均勻后，靜止15分鐘，粗濾，再通過0.22μm精濾，灌裝，冷凍抽乙醇后軋蓋。加入不同藥用炭試驗，結果見表7。

表7 活性炭篩選結果表

結果顯示，活性炭對多西他賽的吸附不是很明顯，但一定量的活性炭有助于保證產品質量，在多西他賽藥液中加入0.01%的活性炭，在大生產過程中既保證細菌內毒素合格，又保證過濾系統能順利進行。

2.3.3 凍干時間的篩選

多西他賽原料難溶于水，我們使用無水乙醇作為產品溶劑。因此多西他賽注射液需控制乙醇殘留量。為保證有效去除無水乙醇，采取了分階段程序升溫的辦法，同時保證高真空度的條件下去除無水乙醇。我們分別考察了32小時、36小時、40小時、44小時時本品的無水乙醇殘留量最終確定本品的冷凍干燥時間。無水乙醇殘留量的測定采用氣相色譜法測定。

表8 凍干時間與無水乙醇殘留量研究

根據實驗的測定結果，冷凍干燥32小時乙醇的殘留量符合標準要求，為保證在大生產過程中，產品的乙醇殘留量符合標準規定，因此選擇冷凍干燥時間為44小時。

2.3.4 結果

多西他賽溶液配制后加入0.01%活性炭后攪拌靜止15分鐘，藥液經過0.45μm及0.22μm兩級過濾后灌裝，冷凍干燥44小時后，軋蓋。中試生產的三批樣品（批號：20130301、20130302、20130303），樣品經過質量檢測，各項指標均符合質量標準規定。結果見表9。

3 討論

表9 三批試驗結果表

多西他賽的藥理作用比紫杉醇強，在細胞內濃度比紫杉醇高3倍，作為微管穩定劑和裝配促進劑，活性比紫杉醇大2倍；作為微管解聚抑制劑，活性比紫杉醇大2倍[3]，目前已在64個國家上市。因原料藥多西他賽難溶，使用乙醇作為溶劑。再與吐溫-80混合形成溶液，再采取冷凍干燥技術將混合溶液中的無水乙醇抽除。我們對多西他賽注射液進行了處方篩選、凍干曲線的摸索等試驗研究工作，研究結果表明，按照研制工藝中試生產的三批樣品均符合質量要求，處方和工藝合理，利于生產操作，能保證產品質量，生產效率高。

［1］姚和際,等.多西紫杉醇研究進展及市場分析[J].中國制藥信息,2001,17(5):29-30.

［2］美國藥典[Z].USP35版.

［3］孫燕,李雛廉,管忠震.泰索帝治療晚期乳腺癌和肺癌[J].中國新藥雜志,1998,7(3):165-167.