HBV-DNA水平與乙型肝炎兩對半模式的相關性

HBV-DNA水平與乙型肝炎兩對半模式的相關性

譚斌楊文才李嘉龍麗余麗婭

(銅仁市人民醫院檢驗科,貴州銅仁554300)

摘要〔〕目的探討乙肝病毒(HBV)-DNA定量結果與乙型肝炎兩對半模式的相關性。方法收集該院感染科2011年6月至2013年12月住院和門診收治行HBV-DNA定量檢測和乙肝兩對半檢查的疑似乙肝患者600例，酶聯免疫吸附(ELISA)法測定乙肝兩對半，熒光定量PCR法定量HBV-DNA，分析乙肝兩對半與HBV-DNA定量的關系。結果大三陽(HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性)者HBV-DNA陽性檢出率和HBV-DNA水平高于小三陽(HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性)患者(P<0.05)；乙型肝炎兩對半不同類型HBV-DNA 陽性檢出率和定量水平也不同，有相同的兩對半模式者HBV-DNA 含量也可能不同；HBeAg陽性與HBV-DNA水平呈正相關(P<0.05)。結論HBV-DNA水平可反映HBV復制水平，同時檢測乙肝兩對半可以提高臨床檢測效果。

關鍵詞〔〕HBV-DNA；病毒復制；乙型肝炎兩對半

中圖分類號〔〕R512.6+2〔

第一作者：譚斌(1971-)，男，副主任檢驗師，主要從事基因診斷研究。

乙型肝炎主要傳播途徑有血液傳播、性傳播、母嬰傳播〔1,2〕。據統計全世界超過50%人感染過乙型肝炎病毒(HBV)，無癥狀病毒攜帶者大約2.8億人，我國占1億〔3〕，大約5%轉為慢性肝炎難以治愈〔4〕。當前臨床上診斷乙型肝炎主要通過檢測乙肝兩對半和HBV-DNA。本文定量分析HBV-DNA水平，并探討其與乙型肝炎兩對半模式的相關性。

1資料與方法

1.1一般資料收集我院感染科2011年6月至2013年12月住院和門診收治行HBV-DNA定量檢測和乙肝兩對半檢查的疑似乙肝患者600例，其中男326例，女274例；年齡45～80〔平均(52.27±5.79)〕歲。都經過血清乙肝五項檢查確診(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)，總共有五種組合類型：Ⅰ(大三陽)：HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性；Ⅱ(小三陽)：HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性；Ⅲ：HBsAg、HBeAg陽性；Ⅳ：HBsAg、抗-HBc陽性；Ⅴ：陰性。納入標準：①所有患者均符合臨床乙型肝炎診斷標準，年齡45～80歲；②可以收集到患者檢查和治療的所有資料，并且發現未免疫系統或者惡性腫瘤性疾?。虎鄯蟼惱淼赖?，家屬或者患者簽署了知情同意書。排除標準：①患有嚴重的器官衰竭性疾病，或者內分泌性疾病，或者合并有其他肝炎疾病，比如肝、腎衰竭、糖尿病等；②凡對試驗研究方案不依從、不配合、拒絕參加試驗者及試驗過程中不按照規定進行檢查，或者在研究期間采用了其他治療措施或者轉院治療患者；③在治療過程中病情突然加重不能再參加試驗者。

1.2儀器和試劑達安DA7600 PCR儀；乙肝五項應用美國biotek全自動酶標儀測定；HBV-DNA定量檢測試劑盒(廣州達安基因公司)。

1.3研究方法抽取患者空腹靜脈血4 ml，3 000 r/min離心10 min,留取血清，-20℃保存待用。乙肝五項測定：應用酶聯免疫吸附試驗測定(ELISA法)，由我院檢驗科測定。乙肝兩對半正常值〔5〕:HBsAg<0.5 ng/ml 、HBsAb≤10 MIU/ml、HBeAg≤0.5 PEI U/ml 、HBeAb≤0.2 PEI U/ml、HBcAb≤0.9 PEI U/ml。HBV-DNA定量檢測：應用熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)法：①血樣RNA的抽提；②RNA質量檢測；③樣品cDNA合成；④樣品管家基因實時定量PCR。⑤模板；⑥PCR，所有cDNA樣品分別配置實時定量 PCR反應體系。⑦引物設計(應用Primer Premier 5.0軟件)。⑧電泳；PCR產物與 DNA Ladder在2%瓊脂糖凝膠電泳，GoldView染色，檢測PCR產物是否為單一特異性擴增條帶。結果判斷：≥103copies/ml為陽性,<103copies/ml為陰性。

2結果

2.1HBV-DNA陽性率及定量大三陽患者HBV-DNA陽性檢出率和HBV-DNA平均對數定量均高于小三陽患者，其中患者大三陽HBV-DNA水平最高(P<0.05)，見表1。

2.2HBV-DNA定量與e抗原的關系HBeAg陽性定量與HBV-DNA對數定量間呈正相關(P<0.05)。見表2。

表1　HBV-DNA陽性率及定量

與Ⅱ型比較:1)P<0.05

表2　HBeAg定量與HBV-DNA對數定量的關系

3討論

乙型肝炎是我國病毒性肝炎中最重要的病原〔6〕。臨床上主要通過乙肝兩對半的陽性陰性判斷是否感染HBV〔7,8〕，但是常規乙肝兩對半檢測并不能特異性診斷HBV在患者體內的復制及傳染的或者只能粗略估計病毒復制水平的初步檢查〔9〕，乙肝兩對半吸頭兩對半對病情嚴重程度評估參考性不大〔10〕。隨著醫學科技的發展，基因診斷技術也相應成熟，熒光定量PCR法是疾病診斷的一種重要手段，由專門PCR儀封閉式的完成排除了很多干擾因素〔11〕。HBV-DNA檢查是判斷如何治療的參考依據，一般情況DNA水平越高，傳染性越強。

本研究說明大三陽患者體內病毒復制和傳染最嚴重。乙型肝炎兩對半不同類型其HBV-DNA 陽性檢出率和定量水平也不同。因為HBeAg為乙肝e抗原為病毒復制標志，這與HBV-DNA對數定量水平具有相同的作用。

綜上所述，HBV-DNA水平變化可以反映HBV復制水平和傳染能力大小，同時聯合檢測乙肝兩對半，可以提高臨床檢測效果，有助于臨床的診斷治療以及預防措施效果評價，同時也可以應用到乙型肝炎早期診斷。

4參考文獻

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3張寶華,黃婷.乙型肝炎病毒檢測方法的相關性分析〔J〕.現代檢驗醫學雜志,2010;25(4):69-71.

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8黃華泥,張業久,徐五星.HBV-DNA定量檢測結果與乙肝兩對半模式相關性分析〔J〕.現代中西醫結合雜志,2010；19(31):3459-60.

9賀巧鳳.HBV-DNA含量與乙型肝炎病毒血清標志物的相關性研究〔J〕.檢驗醫學與臨床,2013；10(3):353-5.

10王琦.乙型病毒性肝炎患者的兩對半檢查結果和HBV-DNA檢驗結果分析〔J〕.中國實用醫藥,2013；8(35):67-9.

11黃之品,楊偉,李增彩,等.216例乙肝患者HBeAg、 HBV DNA、PreS1-Ag相關性的臨床分析〔J〕.遼寧醫學院學報,2014；25(3):42-3.

〔2014-11-25修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)