益艾康膠囊對鼠白血病病毒致免疫缺陷小鼠免疫功能的影響

益艾康膠囊對鼠白血病病毒致免疫缺陷小鼠免疫功能的影響

魏征1徐立然2

(河南省中醫藥研究院腫瘤科，河南鄭州450004)

摘要〔〕目的建立Friend型鼠白血病病毒(FLV)引起的BALB/C小鼠所致的免疫缺陷動物模型，探討益艾康膠囊對其免疫功能的影響。方法對FLV毒株傳代兩次，隨機分為FLV模型組、齊多夫定(ATZ)對照組、唐草片對照組、益艾康大中、小劑量組。模型組灌以等量生理鹽水，ATZ組按200 mg/kg體重灌胃，連續21 d。無菌取脾，測定脾/胸腺指數。結果與模型組相比，益艾康組對脾大均有較好的抑制作用，但效果稍遜于AZT組。益艾康組與唐草片組亦能增加胸腺重量，兩者之間沒有差異。結論益艾康膠囊可以抑制FLV致免疫缺陷小鼠的脾腫大，并降低脾指數，保護脾臟，且可以增加FLV致免疫缺陷小鼠胸腺重量和胸腺指數。

關鍵詞〔〕益艾康膠囊；鼠白血病病毒；胸腺指數；脾指數

中圖分類號〔〕R965.1；R975.5〔

基金項目：國家“十一五”科技重大專項基金資助(2008ZX10005-002)

通訊作者：徐立然(1959-)，男，主任醫師，博士生導師，主要從事中醫內科學研究。

1南京中醫藥大學2河南中醫學院第一附屬醫院

第一作者：魏征(1983-)，男，在讀博士，主治醫師，主要從事中西醫結合治療惡性腫瘤研究。

獲得性免疫缺陷綜合征(艾滋病)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的傳染性疾病，其感染性強，死亡率高，以免疫系統損害和機會性感染為主要的特征，病變范圍可波及人體各重要器官和組織〔1〕。益艾康膠囊是導師夏祖昌教授帶領河南省中醫藥專家長期前往艾滋病高發區巡診后擬定的臨床經驗方，臨床療效確切，后經劑型改造，目前為國家《中醫藥治療艾滋病試點項目臨床技術》指定用藥，也是我國中醫藥治療艾滋病較大范圍使用的唯一中醫藥制劑〔2～4〕。艾滋病動物模型的探索開始于19世紀80年代，當時的艾滋病模型主要有十二種〔5〕，但是隨著實踐的檢驗，牛，羊，馬由于其臨床表現和艾滋病人的臨床表現差距較大，其體積龐大，不易飼養，培養周期長等原因已經不適宜作為艾滋病的動物模型。現在全球艾滋病動物模型研究主要集中在猴免疫缺陷病毒(SIV)，貓免疫缺損病毒(FIV)和免疫缺陷鼠艾滋病模型(Murine AIDS)〔6，7〕。鼠白血病病毒——Friend leukaemia virus (FLV)是由Carlotte Friend教授于1957年在研究一種可以在小鼠間傳染的鼠白血病中發現的，是第一種被確認可以在動物體內引起腫瘤的病毒。由于FLV本身是一種逆轉錄病毒，又能夠在敏感小鼠體內引起紅白血病和獲得性的免疫抑制，而成為研究腫瘤機制、抗逆轉錄病毒治療以及病毒基因與宿主作用機制的常用小動物模型〔8～10〕。脾臟和胸腺是主要的免疫器官，病毒入侵后，脾臟和胸腺發生腫大，觀測胸腺指數和脾指數是為了更好地研究益艾康膠囊對免疫系統的影響〔11〕。

1材料與方法

1.1藥物與試劑益艾康膠囊：河南省中醫藥研究院附屬醫院制劑室生產，主要由人參、山藥、茯苓、白術、當歸、黃芩等組成。國家中醫藥管理局《5省中醫藥治療艾滋病項目臨床技術方案》制劑，批件〔41豫Z20000009〕提供。齊多夫定(ATZ)：陽性西藥對照藥物；國藥準字H20020322；東北制藥總廠；批號：071201。唐草片：陽性中成藥對照藥物；北京金衛制藥股份有限公司生產，由木棉花、老鸛草、龍葵、金銀花、白花蛇舌草、糯稻根、黃芪、甘草、訶子等二十多味中藥組成。片劑，0.5 g/片，100片/瓶。國藥準字H20040074，批號080301。FLV毒株，購自美國菌種保藏中心，并由北京中原公司在國內代購。經傳代后冷凍液氮罐中低溫保存。

1.2儀器Biofuge Fresco臺式離心機(德國賀力士) YJ-875醫用凈化工作臺(蘇州凈化設備公司) 分析天平(Metler AB204-E德國梅特勒)

1.3動物BALB/C小鼠76只，體重(16±2)g左右，雌性，由河南省醫學實驗動物中心提供，許可證號：SYXK(豫)2008-0012，同時提供飼料，50%～75%濕度下飼養小鼠3 w，隔2 d稱量小鼠體重一次。

1.4方法

1.4.1FLV免疫缺陷小鼠艾滋病模型制備取BALB/C小鼠，雌性，適應性喂養1 d后，將液氮罐中凍存的FLV感染小鼠的10%脾臟懸液取出，融化后用生理鹽水稀釋75倍，給小鼠腹腔注射0.5 ml脾懸液的稀釋液，并留出10只小鼠不接種作為正常對照組。接種過的小鼠按照體重隨機分為FLV模型組、ATZ組、唐草片組、益艾康大、中、小劑量組。常規喂養。小鼠接種第2天開始給藥。正常對照組和FLV模型組灌胃生理鹽水0.4 ml/d，益艾康大、中、小劑量組分別按照4、2、1 g·kg-1·d-1(相當于臨床32、16、8倍)的劑量灌胃給藥。ATZ組按200 mg·kg-1·d-1劑量灌胃給藥，唐草片給藥體積為0.2 ml/10 g。每天給藥一次，連續給藥21 d。最后一次給藥后1 h，稱量小鼠體重，脫臼處死，無菌剖取脾臟和胸腺并稱重。

1.4.2脾指數和胸腺指數測定計算各組小鼠的脾指數和胸腺指數。

1.5統計學方法應用SPSS13.0軟件進行方差分析。

2結果

2.1對脾重及脾指數的影響AZT組的脾臟接近于正常對照組，脾臟增大不明顯，其余各組均出現脾大，其中模型組脾大最明顯。和模型組相比，益艾康小、中劑量和唐草片組對脾大的抑制較好(P<0.05)，且益艾康小劑量組稍優于唐草片組。和模型組對比，AZT組最小程度的減少脾指數。其次是益艾康中劑量組，接著是唐草片組、益艾康小劑量，益艾康大劑量組，說明益艾康中劑量組和唐草片組有相似降低脾指數的作用，但效果不如AZT組。見表1。

2.2對胸腺重量及胸腺指數的影響模型組的胸腺重量減少明顯，胸腺受抑制較顯著，余組均能一定程度的增加胸腺重量，抗病毒，減少對胸腺組織的損傷。AZT組胸腺重量接近于正常對照組(P>0.05)。益艾康小劑量組對胸腺的損害在余組中最小，其次是益艾康大劑量組。益艾康膠囊能夠增加胸腺重量，和唐草片組相比沒有統計學意義。模型組明顯抑制胸腺的大小，而AZT組能明顯地改善胸腺指數，接近正常對照組。益艾康膠囊組和唐草片組胸腺指數抑制效果接近，說明益艾康組能有效地降低胸腺指數，顯示其增強免疫的作用可能與增強胸腺指數有一定的關系，見表2。

表1　益艾康對小鼠脾重和脾指數的影響 ± s)

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

表2　益艾康對小鼠胸腺重及胸腺指數的影響 ± s)

3討論

艾滋病“疫毒”侵犯五臟，首先犯脾。脾為后天之本，氣血生化之源，脾臟受損，脾臟運化功能失常，氣血生化無源，從而導致五臟氣血陰陽俱虛，是貫穿艾滋病基本病機。五臟氣血陰陽俱虛，首先衛外不能，易感外邪，其次五臟功能受損，則易產生痰飲水濕等變化。在艾滋病病變過程中，病機錯綜復雜，并非能以單一病機等加以概括。一般而言，艾滋病無癥狀期以正虛為主，當出現機會性感染時，則多以邪實為主。

總之，通過對艾滋病中醫藥治療的臨床觀察，艾滋病之“疫毒”與中醫學傳統意義上的“疫毒”在傳播途徑、病因性質、病理變化等方面都有顯著不同，與傳統意義上的“虛勞病”亦有差別。一般而論，艾滋病無癥狀期，或其癥狀經治療而緩解或消失后，其病機為五臟氣血陰虛俱虛，尤其是脾肺氣虛，即以正虛為主，當臨床癥狀突出時，其病機則多以邪實為主或虛實夾雜，但也有以正虛為主者，如久瀉、久喘、長期發熱等。我們以上述理論為指導，對河南地區1000多例艾滋病患者進行辨證論治，取得了較好療效〔12〕。

本實驗表明，FLV感染小鼠的脾重大小在一定程度上反映病毒對免疫系統的損害，脾指數是一個直觀而可靠的指標。胸腺屬中樞免疫器官，是免疫細胞生成、發育，接受杭原刺激成熟的場所。益艾康膠囊能顯著增加FLV小鼠的脾指數，胸腺指數，增強動物的免疫力，效果和上市藥物唐草片沒有差別，但不如抗病毒藥物AZT。益艾康膠囊治療鼠艾滋病的機制有待進一步深入細致地研究。

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〔2014-05-17修回〕

(編輯曹夢園)