銀耳口服液中銀耳多糖測定及提高免疫試驗研究

吳熙，陳麗春

（1.福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122；2.廈門中藥廠有限公司，福建廈門361100）

銀耳口服液中銀耳多糖測定及提高免疫試驗研究

吳熙1，陳麗春2

（1.福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122；2.廈門中藥廠有限公司，福建廈門361100）

目的測定銀耳口服液中銀耳多糖的含量，觀察銀耳口服液對醋酸潑尼松造模小鼠非特異性免疫功能的影響。方法①采用苯酚－濃硫酸法測定銀耳口服液銀耳多糖的含量。②選16～18g小鼠50只，按性別、體重依分層隨機分5組，每組10只，雌雄各半。除正常組外，其他4組小鼠用50mg／kg的醋酸潑尼松隔日給小鼠灌胃造模，造成小鼠免疫功能降低的模型。除模型組外，其他3組小鼠分別給30mL、15mL、7.5mL的銀耳口服液，正常組和模型組小鼠灌胃飲用水，每天1次，連續15 d。末次給藥后，次日小鼠稱體重，摘眼球放血處死，解剖取脾臟和胸腺稱重，計算臟器系數。另選18～22g小鼠50只，分組、造模、給藥同②。末次給藥后，次日小鼠腹腔注射5%（V／V）雞紅細胞懸液0.5mL，6 h后，頸椎脫臼處死小鼠，腹腔注射生理鹽水2mL，輕揉小鼠腹部后，剖開腹腔用吸管吸小鼠腹腔液，滴在干凈的載玻片上，涼干后染色，油鏡觀察并計算吞噬細胞吞噬雞紅細胞的百分率。結果①測得銀耳口服液中銀耳多糖含量為0.031%；②銀耳口服液15～30mL／kg可提高醋酸潑尼松造模小鼠免疫器官脾臟、胸腺的重量和吞噬細胞的吞噬功能，與模型組比較，P＜0.05或0.01。結論苯酚-濃硫酸法為測定銀耳口服液中銀耳多糖含量的有效方法，銀耳口服液具有提高非特異性免疫功能作用，為銀耳口服液的質量和有效性提供實驗依據。

銀耳口服液；銀耳多糖；免疫器官；吞噬功能

銀耳口服液由人工栽培的銀耳（又稱白木耳）制成的口服液，為保證銀耳口服液的質量和評價銀耳口服液提高免疫力的有效性，我們參照文獻［1］，對銀耳口服液的指標性成分銀耳多糖進行含量測定和銀耳口服液提高免疫力的試驗研究。現將試驗結果報告如下：

1 實驗材料

1.1 藥品與試劑銀耳口服液（福建中醫藥大學藥理毒理實驗室制備，批號：20120902）；醋酸潑尼松（浙江仙琚制藥股份有限公司，生產批號：120336）；5%雞紅細胞懸液，實驗時配制；所需試劑均為分析純。

1.2 動物昆明小鼠，體重16～18g、18～22g，雌雄各半，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號：2007000520335。

1.3 儀器752-型紫外分光光度計（上海分析儀器總廠）；RE-52型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）；電子天平ES-C-600（湘儀天平儀器有限公司）；生物顯微鏡（OLYMPUS BX-40）。

2 實驗方法與結果

2.1 銀耳口服液銀耳多糖的含量測定采用苯酚－濃硫酸法［1］

2.1.1 銀耳多糖提取與精制復水完全的銀耳子實體經機械粉碎、超聲波處理后，在120℃水中浸提多糖物質；離心收集上清液，在80℃濃縮至原體積的1／5，用三倍量95%乙醇醇析使含醇量達80%；離心收集沉淀，沉淀物依次用無水乙醇、無水乙醚洗滌，置干燥器中干燥，得多糖干品。

2.1.2 標準曲線制備精密稱取105℃干燥恒重的銀耳多糖干品50 mg，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，即得標準溶液；精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置具塞試管中，依次加水至1.0 mL，再分別加入5%苯酚1.0 mL、濃硫酸5.0 mL顯色，搖勻，放置5 min；以1.0 mL蒸餾水作空白對照，于500nm波長處測定吸光度，繪制標準曲線。回歸方程為：C＝0.0023+4.32A，r＝0.9993。

2.1.3 含量測定取銀耳口服液500 mL，置旋轉蒸發器內濃縮體積至200 mL；濃縮液∶氯仿∶正丁醇（25∶5∶1）置分液漏斗內振搖提取30 min，離心15 min，除去蛋白沉淀，取上清液；加95%乙醇使含醇量達80%，抽濾，60℃烘干，置100 mL量瓶中加水至刻度，作為供試液；取供試液1.0 mL置具塞試管中，按標準曲線制備方法測定吸光度，3次均值A＝0.0713，由回歸方程計算出銀耳口服液中的銀耳多糖含量約0.031%

2.2 銀耳口服液對小鼠非特異性免疫的影響［2，3］

2.2.1 銀耳口服液對潑尼松造模小鼠免疫器官脾臟、胸腺指數的影響選體重16～18g昆明種小鼠50只，雌雄各半，按性別、體重分層隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。實驗設：正常組、模型組、模型+銀耳口服液高、中、低（30 mL／kg、15 mL／kg、7.5 mL／kg）3個劑量組；小鼠適應性飼養3 d后，銀耳口服液中、低劑量用飲用水配成與高劑量等體積30 mL，均按體重0.3 mL／l0g灌胃；正常組和模型組小鼠灌服等體積飲用水。每天上午灌胃1次，連續15 d。同時除正常組外，其他各組小鼠1、 3、5、7、9、11、13、15日下午，灌服0.25%醋酸潑尼松溶液，按體0.2 mL／l0 g（50 mg／kg）造模。末次給藥后，小鼠禁食不禁水過夜，次日小鼠稱重后，摘眼球放血處死，解剖取脾臟和胸腺稱重，計算臟器指數。

脾和胸腺指數/（mg／g）＝脾或胸腺重量／體重。

結果見表l。

表1 銀耳口服液對醋酸潑尼松造模小鼠免疫器官脾、胸腺指數的影響（x±s）

2.2.2 銀耳口服液對醋酸潑尼松造模小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響選體重18～22 g昆明種小鼠50只，雌雄各半，按性別、體重分層隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。實驗設：正常組、模型組、銀耳口服液高、中、低（30 mL／kg、15 mL／kg、7.5 mL／kg）3個劑量組。小鼠適應性飼養3 d后，銀耳口服液中、低劑量用飲用水配成與高劑量等體積30 mL，均按體重0.3 mL／l0g灌胃；正常組和模型組小鼠灌服等體積飲用水。每天上午灌胃1次，連續15 d。同時除正常組外，其他各組小鼠1、3、5、7、9、11、13、15日下午，灌服0.25%醋酸潑尼松溶液，按體0.1m2／10 g（50mg／kg）造模。末次給藥后，次日小鼠腹腔注射5%（V／V）雞紅細胞懸液0.5 mL，6 h后，頸椎脫臼處死小鼠，腹腔注射生理鹽水2 mL，輕揉小鼠腹部后，剖開腹腔用吸管吸小鼠腹腔液，滴在干凈的載玻片上，涼干后染色，油鏡觀察并計算吞噬細胞吞噬雞紅細胞的百分率。結果見表2。

表2 銀耳口服液對醋酸潑尼松造模小鼠腹腔吞噬細胞吞噬影響（x±s）

2.2.3 統計學處理采用簡明統計學處理品V2.0，數據用x±s表示，組間差異比較用t檢驗。

3 討論

銀耳性平，味甘、淡，無毒，具有潤肺生津、滋陰養胃、益氣和血之功效，主要含多糖、甘露醇、氨基酸、維生素和微量元素等。現代研究證實：銀耳多糖具有提高人體免疫功能、延緩衰老等作用［4］。本試驗測定銀耳指標性成分銀耳多糖的含量，同時證實該銀耳口服液具有提高非特異性免疫功能的作用，提高醋酸潑尼松造模小鼠免疫器官脾、胸腺指數和腹腔吞噬細胞吞噬功能，為銀耳口服液的質量和有效性提供保證。該銀耳口服液有望成為提高免疫功能的保健品，值得進一步完善研究及推廣應用。

［1］呂玉光，楊麗敏.銀耳中多糖的含量測定［J］.黑龍江醫藥科學，1999，22（6）：32.

［2］張大方，金若敏.藥理與中藥藥理實驗［M］.3版.上海：上海科學技術出版社，2013：89-91.

［3］李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M］.上海：上海科學技術出版社，1991：155-158.

［4］陳飛飛，蔡東聯.銀耳多糖的主要生物學效應研究進展［J］.中西醫結合學報，2008，6（18）：862-863.

R914.4

A

1000-338X（2015）04-0046-02

2015－06－05

吳熙（1982—），男，助理實驗師，主要從事藥物制劑分析。