高效液相色譜法同時檢測飼料中6種農藥殘留

何叢薇 ， 李亞麗 ， 高文惠 *

（1.河北科技大學生物科學與工程學院，河北石家莊 050018；2.河北省發酵工程技術研究中心，河北石家莊 050018）

三唑類殺菌劑為分子結構式上帶有三唑環的高效殺菌劑，其具有良好的適用性和殺滅效果，主要通過抑制病原體細胞膜來達到殺菌的效果。目前被廣泛地應用于蔬菜、水果、糧谷等病蟲害的防治（胡艷云等，2014；高文惠等，2013）。菊酯類農藥是目前廣泛應用的一類殺蟲劑，具有高效、低毒等特點。三嗪類殺菌劑是一類能夠抑制植物進行光合作用的高效除草劑，可能引起人類癌癥及先天性缺陷，同時能干擾激素的正常功能（王曉春等，2011）。隨著三唑類、菊酯類、三嗪類殺菌劑長期、大量使用，危害愈發凸顯，因此引起了人們的高度關注。

三唑類、菊酯類、三嗪類殺蟲劑殘留量常用的檢測方法有固相萃取-高效液相色譜法、超高效液相色譜-串聯質譜法、氣相色譜-質譜聯用法、固相萃取-氣相色譜法等（胡靜等，2012；黃超群，2011）?，F今社會，食品安全問題倍受關注，單一檢測某一種農藥殘留已經不能滿足各行業的要求，因此建立高效、快速、靈敏，同時測定多種農藥殘留的方法尤為重要。本實驗采用高效液相色譜法同時分離檢測飼料樣品中三唑類 （戊唑醇、烯唑醇）、菊酯類（胺菊酯、三氟氯氰菊酯）、三嗪類（西瑪津、特丁津）等常用農藥的殘留，為飼料中農殘的監測提供快速、可靠的分離檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 LC-20A高效液相色譜儀 （日本島津公司）；SHZ-82A型恒溫水浴振蕩器 （國華企業）；EVOLUTION 220紫外檢測器（THERMO，USA）；LD5-2A低速離心機 （北京雷勃爾離心機有限公司）；KH5200型超聲波清洗器 （昆山禾創超聲儀器有限公司）；SZ-93自動雙純水蒸餾器（上海亞容生化儀器廠）。

1.1.2 試劑 甲醇、乙腈，均為色譜純，天津市康科德科技有限公司。

標準品：戊唑醇（98%）、烯唑醇（98%），均為北京金寶在線科技有限公司；胺菊酯（97%）、三氟氯氰菊酯（96%），均為濟寧天盛化工有限公司；西瑪津（99%）、特丁津（98%），均為浙江省長興縣中山化工有限公司。

標準液的配制：分別準確稱取6種標準品各150 mg，用甲醇溶解后分別定容于100 mL容量瓶中，使用時根據需要用乙腈稀釋。

樣品：雞飼料、豬飼料、牛飼料，均為市售。

1.2 樣品處理 準確稱取10.00 g飼料樣品，用20 mL甲醇提取（提取兩次，每次 10 mL），超聲20 min后，10000 r/min離心10 min，合并2次上清液，濃縮，用甲醇定容至10 mL，經0.45 μm微孔濾膜過濾，待上機測定。

1.3 色譜條件 色譜柱Promosil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；進樣量：20 μL；流動相：甲醇-水（90∶10，V/V）；柱溫：30 ℃；檢測波長范圍：210 nm。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇 6種農藥的紫外光譜掃描圖見圖1。由圖1可見，6種農藥的最大吸收波長為204～220 nm，綜合考慮各物質及流動相溶劑的紫外吸收情況，檢測波長選定為210 nm。

圖1 6種農藥的紫外光譜掃描圖

2.2 分離條件的選擇 分離條件對樣品的分離效果和分析時間有很大影響，因此實驗對6種農藥的分離條件進行了優化。當以100%甲醇作為流動相時，6種農藥不能實現良好的分離，于是考慮向流動相中加入水。隨著甲醇的減少，色譜峰逐漸分開，當甲醇∶水=95∶5（V/V）時，6 種農藥仍不能完全分離，即特丁津和戊唑醇色譜峰、烯唑醇和胺菊酯色譜峰不能分開，如圖2a所示。于是，繼續減少甲醇的比例，當甲醇-水體積比為90∶10時，6種農藥可實現完全分離，且分析時間短（圖2c）。而當甲醇-水體積比為85∶15時，雖然6種農藥可實現完全分離，但是分析時間大大增長（圖2b）。因此，選用甲醇-水體積比為90∶10。由圖2c看出，各種物質色譜峰尖銳對稱，分離效果好，分析速度快。

圖2 混合標準溶液的分離色譜圖

2.3 線性關系和檢測限 將6種農藥標準液配制成濃度為0.01～100 μg/mL的標準混合溶液，在1.3的色譜條件下進行測定，以峰面積對濃度作圖，繪制出標準曲線，結果見表1。由表1可知，6種農藥有良好的線性相關性，其線性相關系數為0.9992～0.9999，檢測限為0.5～20 ng/mL。

表1 6種農藥的線性關系及檢測限

2.4 樣品測定 飼料樣品按照1.2中樣品處理方法處理，在1.3色譜條件下進行測定。結果顯示，本實驗中測定的飼料樣品未檢出該6種農藥，圖3是典型雞飼料樣品和牛飼料樣品的色譜分離圖。

圖3 飼料樣品色譜分離圖

2.5 加標回收率及精密度實驗 對雞飼料、牛飼料、豬飼料樣品進行低水平和高水平的加標回收率實驗。結果見表2。由表2可見，樣品中6種農藥的平均回收率為87.3%～104.3%，相對標準偏差為1.35% ～3.62%（n=5）。

表2 樣品加標回收率和精密度（n=5） %

3 結論

本實驗建立了高效液相色譜法同時快速分離檢測飼料中西瑪津、特丁津、戊唑醇、烯唑醇、胺菊酯、三氟氯氰菊酯6種農藥殘留的分析方法，該方法簡便、快速，可用于飼料及其他樣品中多種農藥的檢測。在最佳條件下6種農藥在7 min內實現了基線分離，其線性相關系數為0.9992～0.9999，檢測限為0.5～20 ng/mL。樣品加標平均回收率（AR）為 87.3% ～ 104.3%，相對標準偏差（RSD）為1.35% ～ 3.62%（n=5）。

[1]高文惠，劉博，龐軍，等.虛擬模板分子印跡固相萃取-高效液相色譜法檢測食品中聯苯三唑醇與烯唑醇[J].現代食品科技，2013，29（10）：2504 ～ 2508.

[2]胡艷云，徐慧群，姚劍，等.分子印跡固相萃取-液相色譜-質譜法測定果蔬中 20 種三唑類農藥殘留[J].分析化學，2014，42（2）：227 ～ 232.

[3]胡靜，吳曉燕，高文惠.分子印跡固相萃取-高效液相色譜法分析2種三唑類殺菌劑殘留[J].藥物分析雜志，2012，6：1043 ～ 1047.

[4]黃超群，丁慧瑛，朱曉雨，等.液相色譜-串聯質譜法同時測定蔬菜中7種三唑醇類殺菌劑的殘留量[J].分析測試學報，2011，30（6）：656 ～ 660.

[5]王曉春，王廣，焦杏春.三嗪類除草劑分析方法研究進展 [J].農藥，2011，50（5）：320 ～ 324.