不同日齡豬偽狂犬抗體的檢測(cè)與分析

孫華偉+趙永前+茅愛(ài)華

摘要：應(yīng)用豬偽狂犬病毒gpI抗體檢測(cè)試劑盒和豬偽狂犬病毒gB抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)某規(guī)模豬場(chǎng)的2～22周齡11個(gè)階段的110份血清同時(shí)進(jìn)行上述2種抗體檢測(cè)，以掌握不同日齡豬偽狂犬野毒的感染情況并制定適合本場(chǎng)的豬偽狂犬的免疫程序。結(jié)果顯示：該場(chǎng)不同日齡豬偽狂犬gpI抗體全部為陰性，仔豬偽狂犬的母源抗體可以維持到10周以上，說(shuō)明目前場(chǎng)內(nèi)采用10周齡進(jìn)行豬偽狂犬疫苗的免疫接種方法是科學(xué)的。

關(guān)鍵詞：偽狂犬；gpI抗體；gB抗體；免疫接種

中圖分類(lèi)號(hào)： S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）10-0262-02

偽狂犬病（pseudorabies）是由偽狂犬病病毒引起的發(fā)生在多種家畜、野生動(dòng)物中的急性傳染病。偽狂犬病病毒感染豬可以引起種豬繁殖障礙、產(chǎn)弱仔，新生仔豬表現(xiàn)為共濟(jì)失調(diào)、抽搐、甚至突然死亡等。近年來(lái)，隨著我國(guó)養(yǎng)豬規(guī)模的不斷擴(kuò)大，農(nóng)戶(hù)飼養(yǎng)管理水平參差不齊，豬偽狂犬在各地的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。目前，偽狂犬病主要采用gpI缺失疫苗進(jìn)行免疫，與之配套的檢測(cè)方法有g(shù)B抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)及gpI抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行野毒感染抗體檢測(cè)。通過(guò)檢測(cè)上述2種抗體水平來(lái)了解豬場(chǎng)的免疫水平、野毒感染情況，及時(shí)微調(diào)免疫程序，保證被檢豬群安全。2014年6月，在安徽省和縣某存欄300頭生產(chǎn)母豬的規(guī)模豬場(chǎng)，種豬群在5月的檢測(cè)中偽狂犬gpI抗體均為陰性，偽狂犬gB抗體水平良好。由于周?chē)i場(chǎng)存在豬偽狂犬野毒感染，送檢不同日齡豬血清進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)，以及時(shí)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)存問(wèn)題及潛在風(fēng)險(xiǎn)，具體報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

來(lái)自該規(guī)模化豬場(chǎng)2～22周齡（2周齡為1個(gè)階段，每階段采10頭）11個(gè)階段的110份血清。該豬場(chǎng)免疫某生物制品廠的偽狂犬基因缺失疫苗，偽狂犬免疫程序?yàn)椋耗肛i采用“一刀切”的方式每年普免3次，商品豬在70日齡時(shí)按 1份/頭進(jìn)行肌注免疫1次。

1.2 主要試劑及儀器

豬偽狂犬病毒gpI抗體檢測(cè)試劑盒（PRV gl Ab）和豬偽狂犬病毒gB抗體檢測(cè)試劑盒（PRV gB Ab）均購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司。寶特ExL 800酶標(biāo)儀（美國(guó)寶特公司）、CentrifugpI 5424R離心機(jī)、各種規(guī)格移液器均購(gòu)自德國(guó) Eppendorf 公司恒溫箱水浴鍋等。

1.3 方法

嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：被檢樣品S/N>0.70，樣品判為陰性；被檢樣品S/N≤060，樣品判為陽(yáng)性；0.60

2 結(jié)果與分析

2.1 豬偽狂犬gpI抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)的110份血清豬偽狂犬gpI抗體全部為陰性，即商品豬未感染豬偽狂犬野毒，這與母豬群5月的檢測(cè)結(jié)果一致，同時(shí)也說(shuō)明檢測(cè)到的偽狂犬gB抗體為疫苗免疫所產(chǎn)生。

2.2 豬偽狂犬gB抗體檢測(cè)結(jié)果

不同周齡豬偽狂犬gB抗體的檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。由圖1可知，隨著仔豬周齡的增加，偽狂犬gB抗體陽(yáng)性率逐漸下降，10周齡時(shí)達(dá)到最低值70%，仔豬在10周齡免疫后4周豬偽狂犬gB抗體陽(yáng)性率上升至較高水平，并一直維持至20周齡。由圖2可知，隨著仔豬周齡增長(zhǎng)，偽狂犬gB抗體平均值呈先上升后下降趨勢(shì)。12周齡后偽狂犬gB抗體平均值逐漸上升，14周齡時(shí)偽狂犬gB抗體達(dá)到較高水平，并一直維持到20周齡，說(shuō)明仔豬在10周齡時(shí)進(jìn)行豬偽狂犬疫苗免疫的時(shí)機(jī)是正確的。20周齡后抗體平均值又開(kāi)始下降，此時(shí)已接近豬的出欄時(shí)間。由圖3可知，2～4周齡仔豬偽狂犬gB抗體水平和抗體均勻度相對(duì)較好；仔豬6周齡后偽狂犬gB抗體的離散度逐漸增加。10周齡疫苗免疫后，抗體水平逐漸上升，但抗體離散度仍然較大，說(shuō)明豬只之間存在著個(gè)體差異，在相近的免疫條件下，不同豬反映不同的抗體水平。

3 結(jié)論與討論

選擇科學(xué)的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行仔豬的免疫，是偽狂犬能否成功免疫的關(guān)鍵，因此，最大限度消除母源抗體的影響對(duì)免疫程序顯得尤為重要。本研究結(jié)果表明，仔豬在6周前抗體水平下降較慢，從第10周開(kāi)始抗體水平下降明顯加快，10周齡疫苗免疫后偽狂犬gB抗體逐漸上升，并維持較長(zhǎng)時(shí)間的高抗體水平，說(shuō)明目前使用的偽狂犬免疫程序科學(xué)有效。由于該場(chǎng)管理正規(guī)，生物安全措施嚴(yán)格，所用疫苗質(zhì)量穩(wěn)定，同時(shí)該場(chǎng)為偽狂犬野毒陰性場(chǎng)， 所以仔豬只免疫1次偽狂犬疫苗。這也表明只要綜合防治措施到位，定期檢測(cè)，保持全場(chǎng)豬群豬偽狂犬野毒抗體陰性是切實(shí)可行的，這也將大大提升規(guī)模豬場(chǎng)的生產(chǎn)效益、品牌效應(yīng)。

3.1 量身定制適合本場(chǎng)的免疫程序

規(guī)模化豬場(chǎng)的免疫程序必須適合本場(chǎng)的實(shí)際情況，檢測(cè)本場(chǎng)不同周齡豬的抗體水平是量身定制適合本場(chǎng)的免疫程序的根本依據(jù)。曾強(qiáng)報(bào)道，母豬產(chǎn)前30 d免疫偽狂犬疫苗，仔豬30日齡時(shí)獲得母源抗體合格率為93.3%以上，且母源抗體可以維持到60日齡[1]。周小兵等報(bào)道，偽狂犬母源抗體在65～75日齡之間下降到最低[2]。劉明亞等報(bào)道，出生仔豬偽狂犬抗體水平較高，并呈緩慢下降趨勢(shì)，45日齡進(jìn)行偽狂犬疫苗免疫，偽狂犬抗體呈加速下降趨勢(shì)[3]。童光志認(rèn)為，母源抗體的半衰期應(yīng)該在15 d左右[4]。本試驗(yàn)豬場(chǎng)多批次統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，商品豬100 kg體質(zhì)量的平均日齡小于160日齡，高于行業(yè)平均水平，也從另一方面驗(yàn)證了本場(chǎng)目前使用的免疫程序是科學(xué)有效的。

3.2 偽狂犬凈化的思考

豬群的健康狀況是豬場(chǎng)能否持續(xù)經(jīng)營(yíng)的關(guān)健，也是決定豬場(chǎng)生產(chǎn)成本的主要因素，近年來(lái)，豬偽狂犬病給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此有計(jì)劃地開(kāi)展豬偽狂犬病的凈化對(duì)于提高規(guī)模化豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義[5]。（1）種豬群的凈化。偽狂犬病病毒可以通過(guò)精液進(jìn)行傳播，種豬群的帶毒率直接影響整個(gè)豬群的偽狂犬病流行，通過(guò)監(jiān)測(cè)種豬群的感染與免疫狀態(tài)，淘汰感染種豬是有效控制仔豬發(fā)生偽狂犬病的有效途徑。（2）后備母豬的凈化。后備母豬在入群前應(yīng)進(jìn)行豬偽狂犬gpI抗體篩查，對(duì)抗體陽(yáng)性者不予入群，保證入群后備母豬質(zhì)量，進(jìn)而達(dá)到控制、凈化種豬群的目的。（3）仔豬的免疫凈化。了解豬場(chǎng)仔豬偽狂犬母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，制定有效、個(gè)性化的免疫程序。（4）偽狂犬野毒陽(yáng)性豬場(chǎng)。除對(duì)初生仔豬在1～3日齡進(jìn)行滴鼻免疫外，還應(yīng)在70、100日齡分別進(jìn)行1次頸部接種，生產(chǎn)豬偽狂犬野毒抗體陰性后備豬。（5）技術(shù)依托。許多豬場(chǎng)尤其是中小規(guī)模豬場(chǎng)只注重免疫而不注重檢測(cè)，大規(guī)模豬場(chǎng)可以投資建設(shè)完備的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，技術(shù)人員及時(shí)對(duì)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)分析。中小規(guī)模豬場(chǎng)應(yīng)找到可信任的技術(shù)依托平臺(tái)，進(jìn)行免疫檢測(cè)、疫病咨詢(xún)，有疫情時(shí)及時(shí)溝通送診。

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