半夏膨化品與生品多糖含量比較研究

程 芬，王盛民，楊長花，王 青

(1.陜西國際商貿學院醫藥學院，陜西咸陽712000;2.西南交通大學生命科學與工程學院，四川成都610031)

膨化技術［1］是一個廣泛應用于食品行業的加工技術，它的原理是通過旋轉螺桿的剪切、擠壓及摩擦升溫，膨化腔內產生高溫高壓后壓力驟降至常溫常壓，原料中的水分驟然汽化做功，達到膨化的目的。已有人將此技術用于中藥的炮制［2-3］，但對半夏的膨化還未見相關報道。多糖為半夏的另一有效成分，研究表明，半夏多糖具有抗腫瘤的作用［4］。筆者采用PH-42型谷物膨化機，對半夏進行膨化，用苯酚-硫酸法［5］測定多糖含量，并與半夏飲片進行比較。

1 材料與方法

1.1 材料 供試藥材:半夏藥材購于成都荷花池藥材市場，經西南交通大學王盛民教授鑒定為天南星科植物半夏［Pinellia ternata(Thunb.)Breit.］的塊莖。

主要儀器:BSA224S電子天平，賽多利斯科學儀器北京有限公司;UV-2450紫外分光光度計，蘇州市萊頓科學儀器有限公司;恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設備有限公司;高速冷凍離心機，德國HERMIE公司Z323K。主要試劑:D-葡萄糖對照品，購于中國藥品生物制品檢定所，批號110833-200904。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液的制備。精密稱取105℃干燥至恒重的D-無水葡萄糖對照品6.5 mg，置100 ml量瓶中，加純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.2.2 測定波長的選擇。分別將半夏供試品和對照品液顯色后，以空白試劑為對照，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄VA)，在400～600 nm波長處進行光譜掃描，結果供試品和對照品液在486 nm處都有最大吸收，故選擇486 nm作為測定波長。

1.2.3 顯色條件的考察。影響顯色的因素主要有水浴溫度、水浴時間、苯酚濃度，試驗對各影響因素進行考察。

1.2.3.2 水浴溫度的考察。精密吸取對照品溶液1.2 ml于試管中，方法同“1.2.3.1”，于不同溫度水浴中保溫 30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以空白試劑為對照，在486 nm波長處測定吸光度值，考察水浴溫度對顯色的影響。

1.2.3.3 苯酚濃度的考察。精密吸取對照品溶液1.2 ml于試管中，加蒸餾水至2.0 ml，分別精密加入不同濃度的苯酚1.0 ml，混勻，其余方法同“1.2.3.1”，以相應試劑為空白，在486 nm波長處測定吸光度值，考察苯酚濃度對顯色的影響。

1.2.3.4 供試品提取時間的考察。精密稱取半夏粗粉8份，每份1.0 g，置圓底燒瓶中，加水100 ml，稱定重量，加熱回流 1.0、1.5、2.0、2.5 h，冷卻，稱重，補足重量，用脫脂棉濾過，精密吸取續濾液 2.0 ml，加乙醇 10.0 ml，搖勻，靜置 12 h，離心［4］，取沉淀加水溶解，置50 ml容量瓶中，稀釋至刻度。精密吸取2.0 ml于試管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混勻，迅速加入濃硫酸7.0 ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應試劑為空白，在486 nm波長處測定吸光度值，計算其含量，考察供試品提取時間對顯色的影響。

1.2.4 供試品制備方法確定。精密稱取半夏粗粉l.0 g，置圓底燒瓶中，加水100 ml，稱定重量，加熱回流1.5 h，冷卻，稱重，補足重量，用脫脂棉濾過，精密吸取續濾液2.0 ml，加乙醇10.0 ml，搖勻，靜置12 h，離心，取沉淀加水溶解，置50 ml容量瓶中，稀釋至刻度。精密量取2.0 ml于試管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混勻，迅速加入濃硫酸7.0 ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應試劑為空白，在486 nm波長處測定吸光度值。

1.2.5 標準曲線的制備。精密吸取葡萄糖對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分別加水至 2.0 ml，立即加入 5% 的苯酚 1.0 ml，混勻，迅速加入濃硫酸 7.0 ml，搖勻，于 40 ℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應試劑為空白，在486 nm波長處測定吸光度值，以吸光度(A)為縱坐標，濃度(mg/ml)為橫坐標，繪制標準曲線。

1.2.6 方法學考察。對儀器精密度、樣品穩定性、試驗重復性進行考察，并計算樣品的加樣回收率。

2 結果與分析

2.1 水浴時間的考察 由圖1可見，水浴時間為30 min時測得的吸光度值最高，故選擇30 min為試驗的最佳的水浴時間。

2.2 水浴溫度的考察 由圖2可知，水浴溫度40℃測得的吸光度值最高，故選擇40℃為試驗的最佳水浴溫度。

青海省作為三江源頭，其對生態環境的影響必須得到重視。為加強河道治理，近年來，政府加大投資在沿河堤壩營造防護林，鋪設草皮，種植功能型植物，以減少水土流失，凈化河流水質，取得了良好的生態效益、經濟效益和社會效益，而綠化面積的確定成為了實施河道治理的關鍵因素[1-3]。精確的綠地面積測量能給規劃設計單位或施工甲乙雙方的決算提供可靠依據。

2.3 苯酚濃度的考察 由圖3可知，加入5%苯酚和6%苯酚測得的吸光度值接近，但由于6%苯酚在水中溶解不充分，為保證測量的準確性，選擇5%苯酚濃度最佳。

2.4 供試品提取時間的考察 由圖4可知，提取1.5 h和2.0 h含量差別較小，但考慮到節約資源，選擇1.5 h為最佳提取時間。

2.5 標準曲線的制備 按照“1.2.5”繪得標準曲線，得回歸方程為 y=12.582x+0.016 1，R2=0.999 2(n=6)，表明葡萄糖對照品在0.013～0.065 mg范圍內呈良好的線性關系。

2.6 方法學考察

2.6.1 精密度考察。精密吸取對照品溶液各1.0 ml于6個試管中，按“1.2”項下的方法制備供試品和對照品，在486 nm波長處測定吸光度值，重復6次，結果RSD值為1.02%，表明儀器精度性良好。

2.6.2 穩定性考察。精密吸取供試品溶液2.0 ml于試管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混勻，迅速加入濃硫酸7.0 ml，搖勻，于40℃水浴中保溫30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相應試劑為空白，在 0、30、60、120、180、240 min時測定吸光度值，結果RSD值為1.48%，表明供試品穩定性良好。

2.6.3 重復性考察。取同一批半夏粗粉1.0 g，共6份，精密稱定，按“1.2”項下方法制備供試品和對照品，在486 nm波長處測定吸光度值，重復6次，結果RSD值為1.16%，表明重復性良好。

2.6.4 加樣回收率考察。取同一批半夏粗粉約0.5 g，共6份(已知多糖含量為12.89%)，分別精密加入葡萄糖對照品溶液1.0 ml(濃度為0.065 mg/ml)，照“1.2”項下方法制備供試品和對照品，在486 nm波長處測定其吸光度值，計算含量，結果見表1。

加樣回收試驗結果表明，平均回收率為98.17%，RSD為1.02%，表明多糖回收率符合要求。

2.7 半夏膨化前后多糖含量測定 分別取半夏供試品1.0 g，各3份，精密稱定，按“2.4”項下方法制備供試品和對照品，在486 nm波長處測定其吸光度值，計算半夏生品及膨化品的多糖含量，結果得出半夏生品中多糖含量為12.88%，膨化半夏中多糖含量為14.55%，由此可知，膨化半夏的多糖含量高于半夏飲片。

表1 加樣回收試驗

3 討論

該試驗采用苯酚-硫酸法測定多糖含量，并對各影響因素做了考察，確定了最佳提取條件，試驗方法簡便、快捷，測定結果準確，可用于半夏多糖含量的分析。

中藥材有效成分的提取工藝關系著中藥材的利用率及提取物的藥理活性，半夏的藥用部位為塊莖，質地致密堅硬，其有效成分不易提取。半夏膨化炮制后，成為空心網狀結構的膨松體，硬度顯著降低，同時內部結構改變，淀粉粒糊化，細胞壁破裂，利于有效成分的浸出。半夏多糖具有抗腫瘤的作用［6］，膨化半夏多糖含量明顯高于半夏生品，表明膨化技術可以增加半夏多糖的含量。半夏為有毒中藥，膨化后其他成分如何變化，還有待進一步研究。

［1］賈淑珍，郝冉.膨化技術在中藥材加工領域的應用［J］.農產品加工，2012(5):75-76.

［2］張英，張翠英，王盛民.紅參膨化炮制實驗研究［J］.時珍國醫國藥，2010，21(7):1724-1725.

［3］郭海霞，蔡正洪，范亞飛.擠壓膨化炮制對何首烏中蒽醌含量的影響［J］.中藥材，2008，31(11):1633-1634.

［4］趙永娟，王蕾，侯林，等.半夏多糖抗腫瘤作用研究［J］.中國藥理學通報，2006，22(6):368-371.

［5］劉玲，周立，師健友，等.黔半夏多糖含量測定［J］.貴陽中醫學院學報，2009，31(5):81-82.

［6］張躍進，孟祥海，許玲.不同炮制方法對半夏化學成分含量的影響研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2008，14(12):22-23.